کشت ویروس در جنین مرغ کشت روی جنین مرغ عفونت در عروق خونی CAO

بیشتر ویروس های شناخته شده توانایی تکثیر در جنین مرغ را دارند (شکل 4). جنین های 8 تا 14 روزه بسته به نوع ویروس، روش عفونت و اهداف تحقیق استفاده می شود. ویروس های آنفولانزا در 9-10 روز، واکسن های آبله - در 12 روز، اوریون - در جنین مرغ 7 روزه کشت می شوند. تکثیر ویروس در جنین مرغ در قسمت‌های مختلف جنین اتفاق می‌افتد که به دلیل ویژگی‌های تروپیسم ویروس است. تکنیک رشد ویروس در جنین مرغ به طور گسترده در کشت صنعتی استفاده می شود.

ساختار جنین مرغ و روش های عفونت آن: 1 - به آمنیون. 2 - وارد حفره آلانتوئیک. 3 - داخل کیسه زرده. (میکروبیولوژی و ایمونولوژی. ویرایش شده توسط Vorobyov A.A. - M. - 1999).

بیرونی ترین غشای خارج جنینی که در مجاورت پوسته یا بافت های مادری قرار دارد و بنابراین به عنوان محل تبادل بین جنین و محیط آن عمل می کند، نامیده می شود. کوریون.در گونه های تخمگذار، وظیفه اصلی کوریون انجام تبادل گازهای تنفسی است. در پستانداران کوریون در تنفس و تغذیه، دفع، فیلتراسیون و سنتز مواد نقش دارد. در موجودات اولیه کوریون یک غشای ثانویه و در موجودات پیشرفته غشای جنین است. حفره بین کوریون و آمنیون حفره کوریوآمنیوتیک است.

آمنیون(به یونانی آمنیون)، کیسه آمنیوتیک یا غشای آبی - یکی از غشاهای جنینی در جنین خزندگان، پرندگان و پستانداران.

از نظر تکاملی، آمنیون برای محافظت از جنین ها از خشک شدن در طول تکامل در خارج از محیط آبی بوجود آمد. بنابراین، حیوانات مهره‌دارانی که تخم‌گذاری می‌کنند (خزندگان و پرندگان)، و همچنین پستاندارانی که از نسل خزندگان هستند، به عنوان آمنیوت ("حیوانات دارای غشای تخم") طبقه‌بندی می‌شوند. طبقات و ابرطبقه های قبلی مهره داران (سفالوکوردات ها، سیکلوستوم ها، ماهی ها، دوزیستان) در محیط آبی تخم می گذارند، بنابراین نیازی به پوسته آبزی ندارند. این دسته از حیوانات در گروه آنامنیا ترکیب می شوند. برخلاف آنامنیا، آمنیوت ها برای تولید مثل و رشد اولیه به محیط آبی نیاز ندارند، بنابراین آمنیوت ها به بدنه های آبی متصل نیستند. این نقش تکاملی آمنیون است.

در هنگام تولد پستانداران، غشای آب می ترکد، آب بیرون می ریزد، و بقایای آمنیون روی بدن نوزاد اغلب "پیراهن" نامیده می شود، که از دوران باستان نشانه خوش شانسی و سایر خرافات در همه جا بوده است. بارها (از این رو، به ویژه، ضرب المثل روسی در مورد کسانی که "در پیراهن به دنیا آمدند").

آلانتویس (از یونانی allantoeid?s - سوسیس شکل) اندام تنفسی جنینی مهره داران عالی است. غشای جوانه ای که از روده عقب جنین ایجاد می شود. علاوه بر این، آلانتویس در تبادل گاز جنین با محیط و انتشار مواد زائد مایع نقش دارد. آلانتویس، همراه با سایر غشاهای جنینی - آمنیون و کوریون، یکی از ویژگی های تعیین کننده مهره داران عالی - پستانداران، پرندگان و خزندگان است.

در پرندگان تخم‌زا و خزندگان، آلانتوا در اطراف جنین در امتداد دیواره‌های پوسته رشد می‌کند. در لایه بیرونی خود که مزودرم نام دارد، شبکه گسترده ای از رگ های خونی ایجاد می کند که از طریق آن با محیط خارجی در تعامل است. در پستانداران آلانتویس بخشی از بند ناف است.

چندین راه برای آلوده کردن جنین مرغ در حال رشد وجود دارد: روی غشای کوریوآلانتوئیک، در حفره آلانتوئیک و آمنیوتیک، کیسه زرده و بدن جنین.

عفونت غشای کوریوآلانتوئیک برای جداسازی و کشت ویروس هایی که پلاک هایی روی غشاها ایجاد می کنند (ویروس های واکسن، آبله، هرپس سیمپلکس) استفاده می شود. قبل از عفونت، تخمک ها با استفاده از اووسکوپ بررسی می شوند و مرز فضای هوا و غشای کوریوآلانتوئیک با مداد مشخص می شود. سطح تخم در بالای فضای هوا و در محل عفونت با الکل پاک می شود، می سوزد، با ید درمان می شود و سوراخی در حفره کیسه هوا ایجاد می شود.

در محل عفونت، پوسته برداشته می شود تا به غشای زیر پوسته آسیبی وارد نشود، سپس با یک سوزن استریل کوتاه سوراخ می شود تا به غشای کوریوآلانتوئیک آسیبی وارد نشود. هوا از حفره کیسه هوا مکیده می شود. مواد ویروسی (0.05 - 0.2 میلی لیتر) با یک سرنگ توبرکولین با سوزن کوتاه یا پیپت پاستور روی غشای کوریوآلانتوئیک اعمال می شود. سوراخ پوسته با یک شیشه پوشش استریل یا همان قطعه اره شده پوسته پوشانده شده و لبه ها با پارافین مذاب پر می شود. جنین های آلوده به صورت افقی روی پایه قرار می گیرند و در ترموستات انکوبه می شوند. جنین ها زودتر از 48 ساعت انکوباسیون جدا می شوند. بر روی غشای آلوده، لکه های مات سفید رنگ با اشکال مختلف (پلاک) مشاهده می شود.

عفونت در حفره آلانتوئیک. ویروس وارد شده به آلانتوئیس در سلول های اندودرمی تکثیر می شود و سپس به مایع آلانتوئیک منتقل می شود. عفونت به روش زیر انجام می شود: سوراخی در پوسته بالای محفظه هوا با نوک چاقوی جراحی یا قیچی ایجاد می شود و پس از آن سوزنی با سرنگ در جهت عمودی از سوراخ وارد می شود که از داخل سوراخ عبور می کند. غشای کوریوآلانتوئیک و وارد حفره آلانتوئیک، مواد در حجم 0.1 میلی لیتر تزریق شده و سوراخ با پارافین پر می شود.

عفونت در کیسه زردهبرای این منظور از جنین های 5 تا 10 روزه استفاده می شود. رایج ترین دو روش عفونت است. طبق اولی، مواد از طریق فضای هوا معرفی می شوند. یک سوراخ در مرکز تخم مرغ ایجاد می شود، آن را روی پایه قرار می دهند که انتهای آن به سمت راست است، و یک سوزن متصل به سرنگ در جهت عمودی از طریق سوراخ وارد می شود؛ سوزن از غشای کوریوآلانتوئیک عبور می کند. حفره آلانتوئیک وارد زرده می شود. از 0.1 تا 0.5 میلی لیتر از مواد حاوی ویروس را می توان به کیسه زرده تزریق کرد. پس از عفونت، سوراخ پوسته با پارافین پر می شود و جنین در ترموستات قرار می گیرد. طبق روش دوم، در مرز فضای هوا در سمتی که زرده قرار دارد (سمت مقابل جنین)، سوراخی در پوسته ایجاد می شود که از طریق آن مواد عفونی وارد می شود. جهت سوزن باید به سمت مرکز تخم مرغ باشد.

جنین مرغ آلوده به مواد ویروسی بسته به ماهیت ویروس معرفی شده به مدت 2-3 روز در انکوباتور قرار می گیرد. برای ایجاد ویروس از نمونه های گرفته شده از یک بیمار (مثلاً سواب های نازوفارنکس که برای تشخیص آنفولانزا استفاده می شود)، جنین مرغ محیط خوبی را فراهم می کند. با توجه به نوع تغییرات، مثلاً، در بافت های غشای کوریوآلانتوئیک، می توانیم مستقیماً تعیین کنیم که با چه نوع ویروسی سروکار داریم. ویروس های آبله و هرپس تغییرات بسیار مشخصی ایجاد می کنند. برخی از ویروس ها به شدت در بافت های مختلف جنین جوجه تکثیر می شوند و ماده اولیه برای تهیه آنتی ژن های ویروسی لازم برای تشخیص آزمایشگاهی بیماری های ویروسی را فراهم می کنند. ویروس های تکثیر شده در جنین مرغ به عنوان ماده اولیه برای تولید هجده نوع واکسن واکسیناسیون استفاده شد.

علیرغم جنبه های مثبت کشت سلولی که در آزمایشگاه های ویروس شناسی مدرن بسیار گسترده شده است، جنین مرغ در بسیاری از موارد اولویت خود را حفظ کرده و به عنوان یک ماده کلاسیک برای کار ادامه می دهد. نشانه وجود ویروس در جنین مرغ با مرگ جنین، واکنش هماگلوتیناسیون مثبت روی شیشه با مایع آلانتوئیک یا آمنیوتیک، با تشکیل ضایعات کانونی ("پلاک") روی غشای کوریون-آلانتوئیک و همچنین ایجاد می شود. در RHA

بسیاری از ویروس هایی که انسان ها و حیوانات را آلوده می کنند می توانند به میزان کم یا زیاد در جنین جوجه تکثیر شوند. وجود یک پوسته متراکم از جنین در برابر میکروارگانیسم های محیط خارجی محافظت می کند.

روش کشت ویروس در جنین مرغ در تشخیص آزمایشگاهی عفونت های ویروسی و همچنین برای تولید واکسن های ویروسی و داروهای تشخیصی استفاده می شود. اما این روش دارای معایبی است: 1) مشاهده تغییرات پاتولوژیک در جنین پس از عفونت با ویروس در پویایی غیرممکن است. 2) هنگام باز کردن جنین آلوده به ویروس، اغلب هیچ تغییر قابل مشاهده ای تشخیص داده نمی شود و لازم است با استفاده از روش های ویروسی دیگر (به عنوان مثال، واکنش هماگلوتیناسیون) وجود ویروس در بافت ها و مایعات جنین تشخیص داده شود. 3) روش کشت در جنین مرغ برای همه ویروس ها مناسب نیست. با وجود معایب موجود، این روش نسبتاً ساده، راحت و ارزان است و به طور گسترده در مطالعات ویروس شناسی استفاده می شود. هنگام کار با اورتومیکسوویروس ها، هرپس ویروس ها و ویروس های آبله بسیار مهم است.

1.3.1. ساختار جنین مرغ

جنین مرغ با یک پوسته آهکی پوشیده شده است - یک پوسته، که غشای پوسته از داخل مجاور آن است. در انتهای صاف تخم مرغ دوشاخه شده و دارای فضایی هوایی است. در زیر غشای پوسته یک غشای کوریوآلانتوئیک وجود دارد؛ در انتهای صاف تخمک در امتداد قسمت داخلی غشای پوسته قرار دارد و فضای هوا را محصور می کند؛ این غشاء سرشار از رگ های خونی است و به عنوان اندام تنفسی برای جنین عمل می کند. در مجاورت آن از داخل حفره آلانتوئیک قرار دارد که یک اندام دفعی است و جنین را از خشک شدن و آسیب محافظت می کند. حفره آلانتوئیک جنین واقع در حفره آمنیون را احاطه کرده است که با مایع آمنیوتیک پر شده است. از طریق طناب زرده، جنین به کیسه زرده، منبع اصلی مواد مغذی متصل می شود.

برای کشت موفقیت آمیز ویروس ها در بدن جنین مرغ در حال رشد، یک رژیم دمایی خاص (36 0 -38 0)، رطوبت (50-70٪) و همچنین تهویه کافی مورد نیاز است. جنین های مرغ در سن معینی آلوده می شوند و بسته به نوع ویروس و روش آلودگی به مدت 6 تا 13 روز انکوبه می شوند. تهیه: پایه تخم مرغ، ویال های الکل و ید، لوله آزمایش با پارافین استریل، ورقه های پوششی، کیسه های پشم پنبه و گاز استریل، ظروف استریل پیچیده شده در کاغذ، سرنگ های استریل، سوزن ها، موچین ها، سوزن های کالبد شکافی ضروری است. ابزارها در یک لیوان الکل قرار می گیرند، جایی که در کل کار باقی می مانند؛ قبل از هر دستکاری، با شلیک در شعله مشعل، آنها را استریل می کنند. دست ها قبل از کار کاملا شسته می شوند، توصیه می شود از ماسک گاز استفاده کنید.

جنین های زنده با بررسی تخمک های انکوبه شده در اووسکوپ برای کار انتخاب می شوند. یک جنین زنده متحرک است، رگ های خونی غشاء پر از خون است. تخم‌مرغ‌های انتخاب شده کاملاً در انتهای بلانت (یا در کناره تخم‌مرغ) ضد عفونی می‌شوند: پوسته با الکل پاک می‌شود، با ید روغن کاری می‌شود، دوباره با الکل درمان می‌شود و آتش می‌گیرد.

1.3.2. عفونت جنین جوجه روی غشای کوریوآلانتوئیک

جنین مرغ 10-12 روزه برای عفونت استفاده می شود. مراحل اصلی عفونت:

1. تخم مرغ در حالت عمودی بر روی پایه قرار می گیرد به طوری که کیسه هوا در بالا قرار دارد و پوسته آن در انتهای صاف تخم مرغ استریل می شود.

2. سوراخ پوسته در بالای مرکز کیسه هوا با استفاده از یک سوزن تشریح انجام می شود.

3. فک قیچی به سوراخ حاصل وارد شده و پنجره ای به قطر حدود 1.5 سانتی متر در پوسته بریده می شود.

4. از طریق سوراخ، برگ داخلی پوسته را با سوزن پاره کنید و در یک منطقه کوچک (0.5-1 سانتی متر مربع) پوست بگیرید.

5. غشای کوریوآلانتوئیک با اعمال 0.1-0.2 میلی لیتر از مواد حاوی ویروس روی آن با استفاده از پیپت یا سرنگ پاستور آلوده می شود.

6. پنجره در پوسته با یک فیلم الاستیک مخصوص یا یک شیشه پوشش استریل پوشانده شده و با پارافین مذاب متصل شده است.

جنین های آلوده در یک ترموستات در حالت عمودی قرار می گیرند و به مدت 2-3 روز انکوبه می شوند و پس از آن کالبد شکافی طبق قوانین زیر انجام می شود:

1. تخم مرغ روی پایه قرار می گیرد تا فضای هوا در بالا باشد و محل باز شدن آن استریل شود.

2. با استفاده از قیچی استریل، پوسته را در امتداد مرز فضای هوایی قطع کنید.

3. با استفاده از موچین، پوسته را در امتداد حاشیه بردارید. غشای کوریوآلانتوئیک در معرض در امتداد لبه پوسته بریده شده است. از سوراخ به دست آمده، کل محتویات تخم مرغ را در یک فنجان یا سینی بریزید.

4. غشای کوریوآلانتوئیک باقی مانده در داخل پوسته به دقت با موچین جدا می شود و در یک فنجان استریل با محلول نمک قرار می گیرد. در اینجا آنها آن را صاف می کنند و با قرار دادن فنجان روی پس زمینه تیره تغییرات را مطالعه می کنند.

برای به دست آوردن مواد حاوی ویروس از غشای کوریوآلانتوئیک، باید آن را با قیچی خرد کرد و سپس در هاون با شیشه کوارتز آسیاب کرد و محلول نمکی به آن اضافه کرد. سوسپانسیون به دست آمده با سرعت 2000 دور در دقیقه به مدت 10-15 دقیقه سانتریفیوژ می شود و مایع رویی به عنوان یک ماده حاوی ویروس استفاده می شود.

برنج. 3. عفونت جنین مرغ

1.3.3. عفونت در حفره آلانتوئیک

جنین های 10-11 روزه برای عفونت گرفته می شود. مراحل اصلی عفونت:

1. تخم مرغ روی پایه قرار می گیرد که انتهای آن صاف است و پوسته آن در فضای هوا استریل می شود.

2. سوراخ پوسته در مرکز انتهای بلانت با استفاده از یک سوزن کالبد شکافی ایجاد می شود.

3. سوزن سرنگ حاوی رقت ویروس وارد سوراخ می شود. سوزن در جهت عمودی 2-3 میلی متر زیر سطح کیسه هوا پیش می رود و سپس 0.1-0.2 میلی لیتر مواد تزریق می شود.

4. سوراخ در پوسته با پارافین استریل ذوب شده مهر و موم شده است.

جنین های آلوده معمولاً به مدت 2 روز در ترموستات نگهداری می شوند. قبل از باز کردن، تخم مرغ ها را یک شب در یخچال با دمای 4 درجه سانتیگراد قرار می دهند. باز کردن به ترتیب زیر انجام می شود:

1. تخم مرغ روی پایه قرار می گیرد تا کیسه هوا در بالا باشد، پوسته بالای آن استریل شود.

2. با استفاده از قیچی، پوسته کمی بالاتر از مرز فضای هوا بریده می شود.

3. غشای پوسته را با موچین به دقت جدا کنید و پس از آن غشای کوریوآلانتوئیک با پیپت پاستور در محلی که رگ وجود ندارد سوراخ می شود و مایع آلانتوئیک به داخل مکیده می شود.

4. مایع آلانتوئیک به یک لوله آزمایش استریل منتقل می شود و بخشی از آن برای آزمایش عقیمی باکتریولوژیک به آبگوشت تلقیح می شود.

جنین بسته به نوع ویروس و روش عفونت در سن 8 تا 14 روزگی استفاده می شود. تولید مثل در جنین مرغ در قسمت های مختلف جنین انجام می شود روش های عفونت: روی غشای کوریوآلانتوئیک، در غشای آلوتونیک و آمنیوتیک، کیسه زرده، بدن جنین.

29. کشت بافت.

بسته به روش آماده سازی، 3 نوع سلول وجود دارد:

شیشه تک لایه می تواند روی سطح شیشه خنثی شیمیایی به شکل تک لایه تکثیر شود.

تعلیق، پخش در کل حجم محیط غذایی؛

اندام ها قطعات کاملی از اندام ها و بافت ها هستند که ساختار اصلی خود را حفظ می کنند.

تهیه یک کشت سلولی اولیه شامل چند مرحله است: آسیاب کردن بافت، جداسازی سلول‌ها و شستشوی سوسپانسیون حاصل از تریپسین.

نشانه:

- اثر سیتوپاتیک - تغییرات مورفولوژیکی در سلول های قابل مشاهده در زیر میکروسکوپ، تا رد شدن از شیشه.

انکلوژن های ویروسی تجمع ذرات ویروسی یا جداسازی اجزای ویروسی در سیتوپلاسم یا هسته سلول ها هستند.

پلاک ها نواحی محدودی هستند که از سلول های دژنراتیو تشکیل شده اند. آنها به صورت لکه های روشن در پس زمینه سلول های رنگی قابل مشاهده هستند.

تست رنگ

همادجذب توانایی کشت های سلولی برای جذب گلبول های قرمز در سطح خود است.

دخالت.

30. طبقه بندی، ترکیب شیمیایی باکتریوفاژها.

باکتریوفاژها ویروس های باکتریایی هستند که توانایی نفوذ به سلول های باکتریایی و انحلال آنها را دارند. آنها شکل قورباغه ای دارند، برخی شبیه به نخ مکعبی هستند. آنها از یک سر و یک دم تشکیل شده اند. در داخل فرآیند دمی یک میله استوانه ای وجود دارد، در خارج یک غلاف وجود دارد، این فرآیند به یک صفحه پایه شش ضلعی با خارهای کوتاه ختم می شود. فاژها از اسید نوکلئیک و پروتئین تشکیل شده اند. در فاژهای اسپرم‌شکل، DNA دو رشته‌ای در یک مارپیچ در داخل سر قرار گرفته است. پروتئین ها بخشی از پوسته هستند. علاوه بر پروتئین‌های ساختاری، پروتئین‌های داخلی مرتبط با اسید نوکلئیک و پروتئین‌های آنزیمی درگیر در تعامل فاژ با سلول کشف شد.

31. فرآیند برهمکنش بین فاژهای بدخیم و یک سلول باکتریایی حساس به آنها

تعداد فاژهای ویروسی فقط از طریق چرخه لیتیک افزایش می یابد. فرآیند برهمکنش بین یک باکتریوفاژ بدخیم و یک سلول شامل چند مرحله است: جذب باکتریوفاژ روی سلول، نفوذ به داخل سلول، بیوسنتز اجزای فاژ و مونتاژ آنها، و آزادسازی باکتریوفاژها از سلول.

در ابتدا، باکتریوفاژها به گیرنده های مخصوص فاژ روی سطح سلول باکتری متصل می شوند. دم فاژ با کمک آنزیم هایی که در انتهای آن قرار دارند (عمدتاً لیزوزیم)، غشای سلولی را به صورت موضعی حل می کند، منقبض می شود و DNA موجود در سر به داخل سلول تزریق می شود، در حالی که پوسته پروتئینی باکتریوفاژ در خارج باقی می ماند. DNA تزریق شده باعث بازسازی کامل متابولیسم سلول می شود: سنتز DNA باکتری، RNA و پروتئین متوقف می شود. DNA باکتریوفاژ با استفاده از آنزیم ترانس کریپتاز خودش شروع به رونویسی می کند که پس از ورود به سلول باکتری فعال می شود. ابتدا mRNA های اولیه و سپس دیررس سنتز می شوند که وارد ریبوزوم های سلول میزبان می شوند، جایی که پروتئین های باکتریوفاژ اولیه (DNA پلیمرازها، نوکلئازها) و دیررس (پروتئین های کپسید و دم، آنزیم های لیزوزیم، ATPase و ترانس کریپتاز) سنتز می شوند. تکثیر DNA باکتریوفاژ طبق یک مکانیسم نیمه محافظه کار اتفاق می افتد و با مشارکت DNA پلیمرازهای خود انجام می شود. پس از سنتز پروتئین های دیررس و تکمیل تکثیر DNA، فرآیند نهایی آغاز می شود - بلوغ ذرات فاژ یا ترکیب DNA فاژ با پروتئین پوششی و تشکیل ذرات فاژ عفونی بالغ.

عفونت غشای کوریوآلانتوئیک.این روش یکی از پرکاربردترین روش هاست. مزیت اصلی آن این است که تعدادی از ویروس ها هنگام تکثیر روی غشای کوریوآلانتوئیک باعث تغییرات مشخصه آن می شوند و ضایعاتی را به شکل لکه های سفید رنگ - پلاک هایی با مورفولوژی های مختلف ایجاد می کنند.

جنین 10-12 روزه برای عفونت استفاده می شود. به طور معمول، غشای کوریوآلانتوئیک با ایجاد سوراخی در پوسته بالای کیسه هوا یا در کناره تخم، نفوذ می کند.

مراحل اصلی عفونت در غشای کوریوآلانتوئیک از فضای هوا:

1. تخم مرغ روی پایه در حالت عمودی قرار می گیرد
به طوری که کیسه هوا در بالا باشد)"؛ انجام دهید
استریل کردن کامل پوسته در انتهای بلانت تخم مرغ.

2. پوسته در بالای مرکز کیسه هوا سوراخ شده است.
با استفاده از سوزن تشریح

3. فک قیچی به سوراخ حاصل وارد می شود و
یک پنجره به قطر حدود 1.5 سانتی متر در پوسته ببرید. (که در آن
اجازه ندهید تکه های پوسته داخل تخم مرغ قرار گیرد).

4. از طریق سوراخ ایجاد شده، برگ داخلی قابل مشاهده است
غشای پوسته، با دقت با چشم پاره می شود
موچین یا سوزن را در یک منطقه کوچک جدا کنید (0.5-1
سانتی متر 2)، غشای کوریوآلانتوئیک را آشکار می کند.

5. غشای کوریوآلانتوئیک را آلوده می کند
با استفاده از 0.1-0.2 میلی لیتر از مواد حاوی ویروس به آن
(به عنوان مثال، ویروس واکسینیا) با استفاده از پیپت پاستور
یا سرنگ

6. پنجره در پوسته با یک کش مخصوص بسته می شود
فیلم، پوشش استریل یا شیشه
کلاه لبه دار. برای اتصال شیشه و درپوش به پوسته
از پارافین مذاب استفاده کنید

جنین های آلوده در یک ترموستات در حالت عمودی قرار می گیرند و به مدت 2-3 روز انکوبه می شوند و پس از آن کالبد شکافی طبق قوانین زیر انجام می شود:

1. تخم مرغ روی پایه قرار می گیرد تا هوا
فضا در بالا بود، مکان در حال استریل شدن است
افتتاح آینده با پردازش مناسب
الکل و ید

2. پس از برداشتن فیلم، روکش یا کلاهک،
با استفاده از قیچی استریل، پوسته را در امتداد مرز هوا قطع کنید
فضا.

3. با استفاده از موچین، پوسته را بردارید.
غشای کوریوآلانتوئیک در معرض (که ممکن است
تغییرات قابل مشاهده باشد) در امتداد لبه پوسته بریده می شوند. از طریق
سوراخ ایجاد شده، تمام محتویات تخم مرغ را در فنجان بریزید
یا سینی

4. بافت کوریوآلانتوئیک باقی مانده در داخل پوسته
پوسته به دقت با موچین جدا می شود و در آن قرار می گیرد
فنجان استریل با محلول نمک. ایناهاش
با قرار دادن فنجان روی تاریکی، تغییرات را صاف کرده و مطالعه کنید
زمینه.

برای به دست آوردن مواد حاوی ویروس از غشای کوریوآلانتوئیک، باید آن را با قیچی خرد کرد و سپس در هاون با شیشه کوارتز آسیاب کرد و محلول نمکی به آن اضافه کرد. سوسپانسیون به دست آمده با سرعت 2000 دور در دقیقه به مدت 10-15 دقیقه سانتریفیوژ می شود و از مایع رویی استفاده می شود! به عنوان یک ماده حاوی ویروس (آزمایش اجباری برای عدم وجود آلودگی باکتریایی مورد نیاز است).

عفونت در حفره آلانتوئیک.این روش

این به دلیل سادگی آن متمایز است و ارزشمند است زیرا به تجمع قابل توجهی از ویروس کمک می کند. جنین های 10 روزه معمولاً برای عفونت گرفته می شوند. مراحل اصلی عفونت در حفره آلانتوئیک:

}. تخم مرغ روی پایه ای قرار می گیرد که انتهای آن صاف است و پوسته آن در فضای هوا استریل می شود.

2. در مرکز انتهای بلانت، سوراخی در پوسته ایجاد می شود
با استفاده از سوزن تشریح

3. سوزن سرنگ حاوی رقت وارد سوراخ می شود
ویروس (مانند ویروس آنفولانزا). سوزن به داخل پیشرفته شده است
جهت عمودی 2-3 میلی متر زیر سطح هوا
کیسه کنید و سپس OD-0.2 میلی لیتر از مواد را تزریق کنید.

4. سوراخ در پوسته با استفاده از مهر و موم شده است
پارافین استریل ذوب شده

جنین های آلوده معمولاً به مدت 2 روز در ترموستات نگهداری می شوند. قبل از باز کردن، تخم مرغ ها را یک شب در یخچال با دمای 4 درجه قرار دهید. باز کردن به ترتیب زیر انجام می شود:

1. تخم مرغ روی پایه قرار می گیرد تا کیسه هوا در بالا باشد، پوسته بالای آن استریل شود.

2. با استفاده از قیچی، پوسته را کمی بالاتر ببرید
مرزهای فضای هوایی

3. پوسته پوسته را با موچین به دقت جدا کنید، سپس
چرا غشای کوریوآلانتوئیک با پاستور سوراخ می شود؟
در محلی که رگ وجود ندارد پیپت کنید و آلانتوئیک را بمکید
مایع (می توانید 5-6 میلی لیتر جمع آوری کنید).

4. مایع آلانتوئیک به یک استریل منتقل می شود
لوله آزمایش، و بخشی به آبگوشت تلقیح می شود تا بررسی شود
عقیمی باکتریولوژیک

روش عفونت حفره آلانتوئیک اغلب برای کشت ویروس آنفولانزا و همچنین اوریون و واکسینیا استفاده می شود.

عفونت در حفره آمنیون

انجام این روش دشوارتر است و تا حدودی کمتر از روش های قبلی استفاده می شود. ویژگی آن این است که هنگام آلوده شدن به ویروس های پنوموتروپیک خاص (به عنوان مثال، ویروس های آنفولانزا، اوریون)، دومی نه تنها در سلول های غشای آمنیون، بلکه در دستگاه تنفسی و بافت ریه جنین، جایی که مایع عفونی شده، تکثیر می شود. نفوذ می کند. جنین 7-12 روزه برای عفونت استفاده می شود. عفونت در حفره آمنیوتیک با استفاده از روش باز انجام می شود، زمانی که یک سوراخ نسبتا بزرگ در پوسته ایجاد می شود تا مواد وارد شود، یا روش بسته، زمانی که عفونت از طریق سوراخ کردن پوسته انجام می شود.

اولین آنها آسیب زاتر است، دومی کمتر قابل اعتماد است، زیرا با عمل کورکورانه، همیشه نمی توان یک سوزن را در حفره آمنیون قرار داد.

تکنیک عفونت باز:

1. تخم مرغ را روی پایه گذاشته و استریل می کنیم
پوسته در ناحیه انتهای بلانت.

2. بالای مرکز حریم هوایی در پوسته
با استفاده از قیچی، پنجره ای به قطر 2 سانتی متر را برش دهید
برای عفونت در غشای کوریوآلانتوئیک).

3. برگ داخلی پوسته را با دقت جدا کنید
غشاء با استفاده از موچین، نمایان شدن زیرین
غشای کوریوآلانتوئیک

از قیچی برای ایجاد یک سوراخ کوچک استفاده کنید
غشای کوریوآلانتوئیک در محلی که رگ های خونی وجود ندارد و موچین های چشمی در محل برش قرار می گیرند. غشای آمنیون با موچین گرفته می شود و کیسه آمنیوتیک از روی سطح غشای کوریوآلانتوئیک بیرون کشیده می شود.

5. نگه داشتن غشای آمنیوتیک در این موقعیت،
با تزریق 0.1- حفره آمنیون را آلوده کنید.
0.2 میلی لیتر رقت ویروس.

6. سوراخ پوسته با درپوش استریل بسته می شود.
یا پوشش شیشه، با استفاده از آنها را تعمیر و
بستن تخم مرغ با پارافین مذاب

جنین های آلوده به مدت 2 روز انکوبه می شوند، جنین های مرده در روز اول دور ریخته می شوند (مشاهدات از طریق پنجره ای در پوسته انجام می شود). جنین ها پس از باز شدن یک شب در یخچال با دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری می شوند.

تکنیک باز کردن جنین در هنگام عفونت در حفره آمنیوتیک:

1. پس از استریل کردن محل کالبد شکافی آینده، آن را قطع کنید
پوسته کمی بالاتر از لبه کیسه هوا.

2. غشای کوریوآلانتوئیک سوراخ شده است
پاستور را پیپت کنید و مایع آلانتوئیک را بردارید.

3. گرفتن کیسه آمنیوتیک با موچین، سوراخ کردن
غشای آن با سوزن سرنگ یا پیپت پاستور و
مایع آمنستیک مکیده می شود (از 0.5 تا 1.5 میلی لیتر). U
جنین آلوده، مایع باید کدر باشد، در عین حال
مانند یک جنین معمولی شفاف است.

4. مایع گرفته شده به یک لوله آزمایش استریل، 0.1- منتقل می شود.
0.3 میلی لیتر از آن برای کنترل باکتریولوژیک به آبگوشت تلقیح می شود
عقیمی

معرفی روش های کشت ویروس در جنین مرغ در توسعه ویروس شناسی اهمیت زیادی داشت. برای تکثیر ویروس از جنین مرغ 7-12 روزه استفاده می شود که در ترموستات 37 درجه سانتیگراد انکوبه می شود. شرط لازم برای رشد مناسب جنین حفظ رطوبت هوای معینی است که می توان با قرار دادن آن ایجاد کرد. ظرفی با آب در ترموستات کشت ویروس در جنین مرغ در نقاط مختلف جنین آلوده انجام می شود:

1) روی غشای کوریون-آلانتوئیک؛

2) به حفره آلانتوئیک.

3) به حفره آمنیوتیک؛

4) داخل کیسه زرده.

عفونت جنین مرغ در جعبه با استفاده از ابزار استریل انجام می شود. قبل از: عفونت، جنین مرغ دو بار با یک سواب پنبه ای مرطوب شده با الکل پاک می شود.

عفونت غشای کوریون-آلانتوئیک. پس از ضد عفونی کردن تخم مرغ، تکه ای از پوسته را با دقت از انتهای صاف جدا کنید، غشای زیر پوسته را بردارید - این غشای کوریون-آلاتیوئیک را نشان می دهد. مواد عفونی به مقدار 0.1-0.2 میلی لیتر با استفاده از سرنگ یا پیپت پاستور روی غشای کوریون-آلانتوئیک اعمال می شود. پس از عفونت، سوراخ با کلاهک بسته می شود و فاصله بین آن و جنین مرغ با پارافین پر می شود. در سمت دیگر تخم مرغ، نام ماده عفونی و تاریخ آلودگی را با یک مداد ساده بنویسید.

عفونت در حفره آمنیوتیک.تخمک اووسکوپیک است و ناحیه ای در سمت جانبی انتخاب می شود که کوریون-آلانتوئیس فاقد رگ های خونی بزرگ است. این قسمت با مداد مشخص شده است. تخم ها روی پایه در حالت افقی قرار می گیرند، ضد عفونی می شوند و با نیزه استریل مخصوص سوراخ سوراخ می شود. وپوسته به عمق 2-3 میلی متر، که از طریق آن یک سوزن با مواد عفونی در همان فاصله به طور مستقیم به حفره آمنیوتیک وارد می شود. برای جلوگیری از برگشت مایع تزریق شده، ابتدا سوراخی در بالای کیسه هوا ایجاد می شود. پس از آن هر دو سوراخ با پارافین پر می شوند.

عفونت در حفره آلانتوئیک.عفونت نیز در یک جعبه سایه دار انجام می شود. فضای هوا مشخص شده است، پوسته بالای فضای هوا ضد عفونی شده و یک سوزن سرنگ با مواد از طریق سوراخی در پوسته به سمت جنین وارد می شود. اگر سوزن وارد حفره آلانتوئیک شود، جابجایی سایه جنین مشاهده می شود. پس از عفونت، سوراخ با پارافین پر می شود.

عفونت در کیسه زردهپوسته ضد عفونی شده است. تخم مرغ روی پایه قرار می گیرد و انتهای آن صاف به سمت راست است به طوری که علامت زرده رو به بالا باشد. یک سوراخ در مرکز بالای محفظه هوا سوراخ شده است. یک سوزن سرنگ از طریق سوراخی در پوسته در جهت افقی به عمق 2-3 میلی متر وارد می شود که وارد کیسه زرده می شود. این ماده در حجم 0.2-0.3 میلی لیتر تجویز می شود. پس از معرفی مواد، سوراخ واکس زده می شود.

دما و مدت انکوباسیون به خواص بیولوژیکی ویروس بستگی دارد. تخمک های آلوده روزانه چک می شوند و برای بررسی زنده ماندن جنین اووسکوپ می شوند. اگر جنین در روز اول بمیرد، معمولاً علت آن ضربه در حین عفونت است. چنین تخم هایی از روی تجربه بیرون می آیند. وجود ویروس در جنین آلوده با تغییرات مشخصه در غشای کوریون-آلانتوئیک جنین مرغ آلوده تعیین می شود. ویروس هایی که فعالیت هماگپوتین کنندگی ندارند با استفاده از RSC شناسایی می شوند. برای تشخیص ویروس در مایع آلانتوئیک یا آمنیوتیک جنین های آلوده، RGA انجام می شود.