Laboratorieforskning PCR. Vad visar ett PCR-blodprov? Hur man förbereder sig för analys. Var man kan testas för PCR

För adekvat och effektiv behandling av många infektionssjukdomar är det nödvändigt att snabbt fastställa en korrekt diagnos. För att lösa detta problem idag används högteknologiska diagnostiska metoder baserade på molekylärbiologiska metoder. För närvarande används polymeraskedjereaktion (PCR) redan ganska brett i praktisk medicin som det mest pålitliga laboratoriediagnostiska verktyget.

Vad förklarar populariteten av PCR för närvarande?

För det första används denna metod för att identifiera patogener av olika infektionssjukdomar med hög noggrannhet.

För det andra att övervaka behandlingens effektivitet.

I olika manualer, broschyrer, artiklar samt förklaringar av medicinska specialister stöter vi ofta på användningen av obegripliga termer och ord. Det är verkligen svårt att tala om högteknologiska produkter av vetenskap i vardagliga ord.

Vad är kärnan och mekaniken i PCR-diagnostik?

Varje levande organism har sina egna unika gener. Gener finns i DNA-molekylen, som faktiskt är varje enskild organisms "visitkort". DNA (genetiskt material) är en mycket lång molekyl som är uppbyggd av byggstenar som kallas nukleotider. För varje patogen av infektionssjukdomar är de belägna strikt specifikt, det vill säga i en viss sekvens och kombination. När det är nödvändigt att förstå om en person har en viss patogen, tas biologiskt material (blod, urin, saliv, utstryk), som innehåller DNA eller DNA-fragment av mikroben. Men mängden genetiskt material hos patogenen är mycket liten, och det är omöjligt att säga vilken mikroorganism den tillhör. PCR används för att lösa detta problem. Kärnan i polymeraskedjereaktionen är att en liten mängd material för forskning som innehåller DNA tas, och under PCR-processen ökar mängden genetiskt material som tillhör en specifik patogen och därmed kan det identifieras.

PCR-diagnostik – genetisk studie av biomaterial.

Idén med PCR-metoden tillhör den amerikanske vetenskapsmannen K. Mullins, som han föreslog 1983. Den fick dock utbredd klinisk användning först i mitten av 90-talet av 1900-talet.

Låt oss förstå terminologin, vad det är - DNA, etc. Varje cell av någon levande varelse (djur, växt, människa, bakterier, virus) har kromosomer. Kromosomer är väktarna av genetisk information som innehåller hela gensekvensen för varje specifik levande varelse.

Varje kromosom består av två DNA-strängar vridna till en spiral i förhållande till varandra. DNA är kemiskt deoxiribonukleinsyra, som består av strukturella komponenter - nukleotider. Det finns 5 typer av nukleotider - tymin (T), adenosin (A), guanin (G), cytosin (C) och uracil (U). Nukleotider är ordnade efter varandra i en strikt individuell sekvens och bildar gener. En gen kan bestå av 20-200 sådana nukleotider. Till exempel består genen som kodar för produktionen av insulin av 60 nukleotidpar.

Nukleotider har egenskapen komplementaritet. Det betyder att mitt emot adenin (A) i en DNA-kedja finns det nödvändigtvis tymin (T) i en annan kedja, och mitt emot guanin (G) finns cytosin (C). Schematiskt ser det ut så här:
G - C
T - A
A - T
Denna egenskap av komplementaritet är nyckeln för PCR.

Förutom DNA har RNA samma struktur - ribonukleinsyra, som skiljer sig från DNA genom att den använder uracil istället för tymin. RNA är innehavaren av genetisk information i vissa virus som kallas retrovirus (till exempel HIV).

DNA- och RNA-molekyler kan "multipliceras" (denna egenskap används för PCR). Detta sker på följande sätt: två strängar av DNA eller RNA rör sig bort från varandra, och ett speciellt enzym sitter på varje sträng, som syntetiserar en ny kedja. Syntesen fortsätter enligt komplementaritetsprincipen, det vill säga om den ursprungliga DNA-kedjan innehåller nukleotid A, kommer den nysyntetiserade att innehålla T, om G, sedan C, etc. För att börja syntesen behöver detta speciella "byggar"-enzym ett "frö" - en sekvens på 5-15 nukleotider. Denna "primer" definieras för varje gen (klamydiagen, mykoplasma, virus) experimentellt.

Så varje PCR-cykel består av tre steg. I det första steget sker den så kallade avlindningen av DNA - det vill säga separationen av två DNA-strängar kopplade till varandra. I den andra är "fröet" fäst vid en del av DNA-strängen. Och slutligen, förlängningen av dessa DNA-strängar, som produceras av ett "byggar"-enzym. För närvarande sker hela denna komplexa process i ett enda provrör och består av upprepade cykler av multiplikation av detekterbart DNA för att erhålla ett stort antal kopior, som sedan kan detekteras med konventionella metoder. Det vill säga, från en DNA-sträng får vi hundratals eller tusentals.

Stadier av PCR-forskning

Samling av biologiskt material för forskning

Olika biologiska material används som prov: blod och dess komponenter, urin, saliv, flytningar från slemhinnor, cerebrospinalvätska, flytningar från sårytor, innehåll i kroppshåligheter. Alla bioprover samlas in med engångsinstrument och det insamlade materialet placeras i sterila plaströr eller placeras på odlingsmedia, med efterföljande transport till laboratoriet.

De nödvändiga reagensen läggs till de insamlade proverna och placeras i en programmerbar termostat - en termisk cykler (förstärkare). I förstärkaren upprepas PCR-cykeln, bestående av tre steg (denaturering, hybridisering och förlängning), 30-50 gånger. Vad betyder det här? Låt oss ta en närmare titt.

Stadier av direkt PCR-reaktion, kopiering av genetiskt material

jagPCR-stadium - Beredning av genetiskt material för kopiering.
Uppstår vid en temperatur på 95 ° C, medan DNA-strängarna separeras och "frön" kan landa på dem.

"Fröer" produceras industriellt av olika forsknings- och produktionsföreningar och laboratorier köper färdiga sådana. Samtidigt fungerar "primern" för att identifiera till exempel klamydia endast för klamydia osv. Således, om ett biomaterial testas för förekomst av klamydiainfektion, placeras en "primer" för klamydia i reaktionsblandningen; om biomaterialet testas för Epstein-Barr-viruset är det också ett "frö" för Epstein-Barr-viruset.

IIstadium – Kombination av det genetiska materialet från smittämnet och "fröet".
Om det finns DNA från ett detekterbart virus eller en bakterie, sitter "primern" på detta DNA. Denna process att lägga till en "primer" är det andra steget av PCR. Detta steg äger rum vid en temperatur på 75°C.

IIIstadium - Kopiering av det genetiska materialet från smittämnet.
Detta är processen att faktiskt förlänga eller föröka genetiskt material, vilket sker vid 72°C. "Byggarenzymet" närmar sig "fröna" och syntetiserar en ny DNA-kedja. Med slutet av syntesen av en ny DNA-kedja slutar PCR-cykeln. Det vill säga, i en PCR-cykel fördubblas mängden genetiskt material. Till exempel innehöll det initiala provet 100 DNA-molekyler av ett virus; efter den första PCR-cykeln kommer provet redan att innehålla 200 DNA-molekyler av viruset som testas. En cykel varar 2-3 minuter.

För att generera en tillräcklig mängd genetiskt material för identifiering utförs vanligtvis 30-50 PCR-cykler, vilket tar 2-3 timmar.

Stadium för identifiering av förökat genetiskt material

Egentligen slutar PCR här och sedan kommer det inte mindre betydande steget av identifiering. För identifiering används elektroforesmetoden eller märkta "frön". Vid användning av elektrofores separeras de resulterande DNA-strängarna efter storlek, och närvaron av DNA-fragment av olika längd indikerar ett positivt testresultat (det vill säga närvaron av ett visst virus, bakterier, etc.). Vid användning av märkta "frön" tillsätts en kromogen (färgämne) till den slutliga reaktionsprodukten, vilket resulterar i att den enzymatiska reaktionen åtföljs av bildandet av färg. Utvecklingen av färg indikerar direkt att ett virus eller annat detekterbart medel finns i originalprovet.

Idag är det möjligt att omedelbart "läsa" PCR-resultat med hjälp av märkta "frön", såväl som lämplig programvara. Detta är den så kallade realtids-PCR.

Varför är PCR-diagnostik så värdefull?

En av de betydande fördelarna med PCR-metoden är dess höga känslighet - från 95 till 100%. Dessa förmåner måste dock baseras på strikt iakttagande av följande villkor:

1. korrekt insamling och transport av biologiskt material;
2. tillgång till sterila engångsinstrument, speciallaboratorier och utbildad personal;
3. strikt efterlevnad av metodiken och steriliteten under analysen

Känsligheten varierar mellan olika upptäckta mikrober. Till exempel är känsligheten för PCR-metoden för att detektera hepatit C-virus 97-98%, känsligheten för att detektera ureaplasma är 99-100%.

De egenskaper som är inneboende i PCR-analys möjliggör oöverträffad analytisk specificitet. Detta innebär att man identifierar exakt den mikroorganism som söktes, och inte en liknande eller närbesläktad.
Den diagnostiska känsligheten och specificiteten för PCR-metoden överstiger ofta odlingsmetoden, kallad "guldstandarden" för att upptäcka infektionssjukdomar. Med tanke på varaktigheten av kulturodlingen (från flera dagar till flera veckor) blir fördelen med PCR-metoden uppenbar.

PCR vid diagnos av infektioner
Fördelarna med PCR-metoden (sensitivitet och specificitet) bestämmer ett brett spektrum av tillämpningar inom modern medicin.
De huvudsakliga tillämpningsområdena för PCR-diagnostik:

1. diagnos av akuta och kroniska infektionssjukdomar av olika lokaliseringar
2. övervakning av behandlingens effektivitet
3. klargörande av typen av patogen

PCR används inom obstetrik, gynekologi, neonatologi, pediatrik, urologi, venerologi, nefrologi, infektionsklinik, oftalmologi, neurologi, ftisiopulmonologi, etc.

Användningen av PCR-diagnostik utförs i samband med andra forskningsmetoder (ELISA, PIF, RIF, etc.). Deras kombination och lämplighet bestäms av den behandlande läkaren.

Smittämnen som upptäckts med PCR

Virus:

1. retrovirus HIV-1 och HIV-2
2. herpetiforma virus
3. herpes simplex virus typ 1 och 2

PCR-diagnostik - vad är det? Kärnan i polymeraskedjereaktionen är att för att studera biologiskt material används speciella typer av markörer som snabbt analyserar DNA från smittämnen. Inom gynekologi finns det olika metoder för PCR-tester för kvinnor, beroende på vilket material som testas (blod, urin, utstryk etc.). Efter bearbetning av data identifieras typen av patogen (detta är den så kallade "PCR-kvalitativ analys") och/eller deras koncentration - denna typ av studie kallas "PCR-kvantitativ analys."

Genom att ta tester med PCR-metoden kan du snabbt kontrollera patogener av infektiös patologi när detta inte är möjligt att göra med andra tester (immunologiska, bakteriologiska, mikroskopi). I modern laboratoriediagnostik är PCR det mest effektiva och bästa sättet att upptäcka DNA från mikrober och virus. Testet gör det möjligt för gynekologen och andra klinikläkare att inte bara fastställa orsaken till sjukdom hos kvinnor och män, utan också att övervaka processens framsteg och korrekt utvärdera resultatet av behandlingen.

Priser för PCR-diagnostik

Infektion	PCR	Pris
Klamydia (Clamidia Trachomatis)	kvalitativ	450
Klamydia	kvantitativ	850
Ureaplasma (U. urealiticum / U. parvum)	kvalitativ	450
Ureaplasma	kvantitativ	750
Mycoplasma Hominis	kvalitativ	450
Mykoplasma	kvantitativ	750
Mycoplasma Genitalium	kvalitativ	450
Mykoplasma	kvantitativ	750
Gardnerella (Gardnaerella vaginalis)	kvalitativ	450
Trichomonas vaginalis	kvalitativ	400
Trichomonas	kvantitativ	850
	kvalitativ	500
Gonokocker (Neisseria gohorrhoeae)	kvantitativ	650
Cytomegalovirus (CMV)	kvalitativ	400
Orsaken till syfilis (Treponema pallidum)	kvalitativ	500
Candida (Candida albicans)	kvalitativ	450
Candida (Candida albicans / Candida glabrata / Candida crusei)	kvalitativ	750
Herpesvirus typ I och II (HSV)	kvalitativ	450
Epstein-Barr-virus	kvalitativ	500
Varicella-Zoster-virus	kvalitativ	350
Humant papillomvirus

VAD PCR VISAR

Kvalitativ PCR-analys ger en indikation på den direkta närvaron av ett smittämne i människo- eller djurkroppen. Du kan ta ett utstryk av nästan vilken plats som helst (könsorgan, urinrör, orofarynx, etc.) eller PCR-blodprov. Med hjälp av ett utstryk eller skrapning inom gynekologi kontrollerar de klamydia, urea och mykoplasma, herpesvirus, HPV och andra mikrober. Resultatet av DNA-analysen ges till patienten med laboratoriets slutsats "upptäckt" eller "ej upptäckt." I fallet med ett blodprov låter det dig identifiera HIV, hepatit, herpes, cytomegalovirus och andra mikroorganismer i ett mycket tidigt skede, och i vissa fall bestämma deras genotyp och visa kvantiteten.

Kvantitativa PCR-analyser.
Studien tillåter inte bara att snabbt identifiera det önskade genetiska materialet, utan också att visa koncentrationen av deras DNA (kvantitativ PCR-metod). Att bestämma typen och antalet patogener är viktigt vid beslut om behandling, särskilt om till exempel mykoplasma (DNA-kvantifiering), ureaplasmatypning (DNA-kvantifiering) detekteras eller, viktigast av allt, genotypning och kvantifiering av viral belastning kan göras i tester för HPV-infektion.

PCR-RESULTAT

Av allt som har sagts är det tydligt vad PCR-analys är och vilka är fördelarna med detta test inom gynekologi. En annan viktig nyans av denna diagnos är att dechiffrera resultatet är tillgängligt och bekvämt för en icke-professionell. Med tanke på hur mycket PCR-analys som görs på kliniken, samt den tid det tar för rapporten att vara klar (laboratoriet ger vanligtvis information inom 1-2 dagar), blir denna diagnostiska metod det bästa valet för att fastställa alla större gynekologiska och andra infektioner.

Med hjälp av den kvalitativa metoden för DNA-testning av kvinnliga och manliga utstryk, drar laboratoriet två typer av slutsatser:

1. "PCR-negativ" - ingen patogen upptäcktes i testmaterialet och
2. "PCR-positiv" - RNA eller DNA från en mikrob eller virus hittades i testet.

PCR inom gynekologi

Indikationer för att ta dessa tester hos kvinnor är följande:

• Misstanke om möjlig STI-infektion;
• Anonym undersökning;
• Närvaro av flytningar från könsorganen, klåda;
• Smärta i nedre delen av buken;
• obehag vid urinering;
• Smärta under samlag;
• Förhöjda leukocyter i flora utstryksanalys;
• Närvaron av erosion på livmoderhalsen;
• graviditetsplanering;
• Problem med att bli gravid och föda barn;
• Förberedelse för gynekologiska operationer, IVF;
• I förebyggande syfte.

Var är det bästa stället att testa sig för PCR i Moskva?
Denna typ av diagnostik inom gynekologi tillhör moderna och högteknologiska metoder. Tester för infektioner med PCR-metoden bör tas på en klinik som har allt som behövs för att få fullständiga resultat. I vår vårdcentral utförs provtagning av kvalificerade, erfarna gynekologer (inte den genomsnittliga personalen i behandlingsrummet), engångsinstrument och speciellt laboratoriematerial används och prover som tas emot från patienter skickas dagligen till jobbet. Detta gör att du inte bara kan få PCR-resultat snabbt, utan också för att säkerställa deras tillförlitlighet. Om så önskas, fullständig anonymitet för undersökningen.

Hur mycket kostar PCR?
Denna tjänst tillhandahålls av många medicinska institutioner i huvudstaden. Kostnaden påverkas av många faktorer, allt från plats till intern prispolicy. Det finns dock objektiva faktorer som bestämmer det genomsnittliga minimitalet, under vilka en högkvalitativ och pålitlig tjänst inte kan tillhandahållas på grund av de nämnda faktorerna. Det genomsnittliga priset för PCR-diagnostik i Moskva-kliniker för vissa infektioner är som följer:

• kvalitativ PCR-utstryksanalys - 400 - 500 rubel;
• kvantitativ analys av PCR-utstryk - från 600 rubel (1 enhet);
• RNA-diagnostik av skrapningar - från 1 000 rubel (1 enhet);
• Kvalitativt PCR-blodprov (till exempel för herpes, HPV, Epstein-Barr-virus, cytomegalovirus) - 450 - 550 rubel, kvantitativt - från 2 000 rubel;
• Kvalitativ HIV-DNA (bekräftelse/bekräftelse på förekomsten av HIV under den prekliniska perioden) - från 2 000 rubel, kvantitativt RNA - från 7 000 rubel, resistens - från 14 000 rubel.

Förberedelse för PCR

För att få korrekta, tillförlitliga forskningsresultat bör flickor och kvinnor följa vissa regler innan de går att testa sig för infektioner:

1-2 dagar innan ditt besök på kliniken för testning, avstå från samlag;
- avstå från att kissa 1,5 - 2 timmar före smeten;
- utför hygien av de yttre könsorganen med vanligt vatten, utan rengöringsmedel, undvik sköljning;
- utesluta användningen av vaginaltabletter, suppositorier;
- ta inte PCR-tester under menstruation;
- om du är oskuld, varna gynekologen om detta i förväg innan undersökningen.

Hur man tar PCR-tester

Att ta ett PCR-test på vår klinik, inklusive anonymt, är ganska enkelt. Därefter kommer vi att förklara hur PCR tas från kvinnor och män och var, från vilka platser denna studie är mest informativ.

När det gäller en kvinna tas analysen av en gynekolog. Detta händer vanligtvis vid ett första möte med en läkare eller när du dyker upp helt enkelt för att testa sig för infektioner, utan föregående konsultation. Allt är enligt dina önskemål. Man säger sina önskemål, vilka infektioner man skulle vilja testas för och efter det börjar proceduren för att hämta materialet. Patienten klär av sig nedanför midjan och sätter sig på en stol. Efter att ha spridit blygdläpparna, för läkaren in ett gynekologiskt spekulum av lämplig storlek i slidan. Gynekologer tar PCR från kvinnor, vanligtvis från livmoderhalsen, såväl som urinröret. I det senare fallet, innan sonden sätts in, utförs en kort massage av urinröret med ett finger in i slidan. Om PCR-testet tas av tonårsflickor eller jungfruflickor, används inte en spegel, och prover av flytningar tas genom en öppning i mödomshinnan eller området i den vaginala vestibulen. Det resulterande materialet placeras i ett förseglat rör med ett speciellt medium och skickas till laboratoriet.

Att ta denna analys från män ger inga särskilda svårigheter. Sonden förs in i urinröret på ett djup av 3-4 cm och vrids medurs och moturs flera gånger. Materialet placeras även i ett provrör för efterföljande diagnostik.

I slutet av artikeln, se
Polymeraskedjereaktion (PCR) uppfanns 1983 av Kary Mullis (amerikansk vetenskapsman). Han fick därefter Nobelpriset för denna uppfinning. För närvarande är PCR-diagnostik en av de mest exakta och känsliga metoderna för att diagnostisera infektionssjukdomar.
Polymeraskedjereaktion (PCR)- en experimentell metod för molekylärbiologi, en metod för att signifikant öka små koncentrationer av vissa fragment av nukleinsyra (DNA) i biologiskt material (prov).
PCR-metoden bygger på upprepad fördubbling av en viss del av DNA med hjälp av enzymer under artificiella förhållanden (in vitro). Som ett resultat produceras mängder av DNA som är tillräckliga för visuell detektion. I det här fallet kopieras endast avsnittet som uppfyller de angivna villkoren, och endast om det finns i provet som studeras.
Förutom att helt enkelt öka antalet DNA-kopior (denna process kallas amplifiering), tillåter PCR många andra manipulationer med genetiskt material (införande av mutationer, splitsning av DNA-fragment), och används i stor utsträckning i biologisk och medicinsk praxis, till exempel , för att diagnostisera sjukdomar (ärftliga, smittsamma), för att fastställa faderskap, för att klona gener, införa mutationer och isolera nya gener.

Specificitet och tillämpning

Utföra PCR

För att utföra PCR i det enklaste fallet krävs följande komponenter:

• DNA-mall som innehåller DNA-sektionen som behöver amplifieras;
• två primrar som är komplementära till ändarna av det önskade fragmentet;
• termostabilt DNA-polymeras;
• deoxinukleotidtrifosfater (A, G, C, T);
• Mg2+-joner som är nödvändiga för driften av polymeraset;
• buffert-lösning.

PCR utförs i en termisk cykler - en anordning som ger periodisk kylning och uppvärmning av provrör, vanligtvis med en noggrannhet på minst 0,1°C. För att undvika avdunstning av reaktionsblandningen, tillsätt högkokande olja, såsom vaselin, till provröret. Tillsatsen av specifika enzymer kan öka utbytet av PCR-reaktionen.
Reaktionens framsteg

Vanligtvis utför PCR 20-35 cykler, som var och en består av tre steg. Den dubbelsträngade DNA-mallen upphettas till 94-96°C (eller 98°C om ett särskilt värmestabilt polymeras används) under 0,5-2 minuter för att separera DNA-strängarna. Detta stadium kallas denaturering - vätebindningarna mellan de två kedjorna förstörs. Ibland, före den första cykeln, förvärms reaktionsblandningen i 2-5 minuter för att fullständigt denaturera matrisen och primrarna.
När strängarna väl har separerats sänks temperaturen för att tillåta primrarna att binda till den enkelsträngade mallen. Detta stadium kallas glödgning. Glödgningstemperaturen beror på primrarna och väljs vanligtvis 4 - 5°C under deras smälttemperatur. Stegtiden är 0,5 - 2 minuter.

DNA-polymeras replikerar mallsträngen med användning av en primer som primer. Detta är förlängningsstadiet. Töjningstemperaturen beror på polymeraset. Vanligt använda polymeraser är mest aktiva vid 72°C. Förlängningstiden beror på både typen av DNA-polymeras och längden på det amplifierade fragmentet. Typiskt tas förlängningstiden till en minut per tusen baspar. Efter att alla cykler är slutförda utförs ofta ett ytterligare sista förlängningssteg för att fullborda alla enkelsträngade fragment. Detta steg varar 10 - 15 minuter.
Förbereda material för forskning och transportera det till laboratoriet

För framgångsrik analys är det viktigt att korrekt samla in material från patienten och förbereda det korrekt. Det är känt att i laboratoriediagnostik görs majoriteten av felen (upp till 70%) exakt vid provberedningsstadiet. För att samla upp blod i INVITRO-laboratoriet används idag vakuumsystem som å ena sidan minimalt skadar patienten, och å andra sidan låter materialet samlas upp på ett sådant sätt att det inte kommer i kontakt med antingen personal eller miljö. Detta undviker kontaminering (kontamination) av materialet och säkerställer objektiviteten i PCR-analysen.

DNA – deoxiribonukleinsyra – är en biologisk polymer, en av två typer av nukleinsyror som säkerställer lagring, överföring från generation till generation och implementering av det genetiska programmet för utveckling och funktion av levande organismer. Den huvudsakliga rollen för DNA i celler är långtidslagring av information om strukturen hos RNA och proteiner.

RNA-ribonukleinsyra är en biologisk polymer som i sin kemiska struktur liknar DNA. RNA-molekylen är byggd av samma monomerenheter - nukleotider - som DNA. I naturen existerar RNA vanligtvis som en enda sträng. I vissa virus är RNA bärare av genetisk information. I cellen spelar den en viktig roll i överföringen av information från DNA till protein. RNA syntetiseras på en DNA-mall. Denna process kallas transkription. Det finns områden i DNA som innehåller information som är ansvarig för syntesen av tre typer av RNA, som skiljer sig åt i de funktioner de utför: budbärar- eller budbärar-RNA (mRNA), ribosomalt RNA (rRNA) och transport-RNA (tRNA). Alla tre typerna av RNA är involverade i proteinsyntesen på ett eller annat sätt. Information om proteinsyntes finns dock endast i mRNA.

Nukleotider är den grundläggande repeterande enheten i nukleinsyramolekyler, produkten av en kemisk kombination av en kvävebas, ett socker med fem kolatomer (pentos) och en eller flera fosfatgrupper. Nukleotider som finns i nukleinsyror innehåller en fosfatgrupp. De är namngivna efter den kvävehaltiga bas de innehåller - adenin (A), som innehåller adenin, guanin (G) - guanin, cytosin (C) - cytosin, tymin (T) - tymin, uracil (U) - uracil. DNA innehåller 4 typer av nukleotider - A, T, G, C, RNA innehåller även 4 typer - A, U, G, C. Sockret i alla DNA-nukleotider är deoxiribos, RNA - ribos. När nukleinsyror bildas binder nukleotiderna till en sockerfosfatryggrad i molekylen, på ena sidan av vilken det finns baser.

Primer är kort DNA som används för att replikera mallsträngen. Var och en av primrarna är komplementära till en av strängarna i den dubbelsträngade mallen, som ramar in början och slutet av den amplifierade regionen.

Litteratur

1. Glick B., Pasternak J. Molecular biotechnology. Principer och tillämpning. Per. från engelska - M.: Mir, 2002. - 589 s., illus. ISBN 5-03-003328-9
2. Shchelkunov S.N. Genteknik - Novosibirsk: Sibirsk. Univ. förlag, 2004. - 496 s.; sjuk. ISBN 5-94087-098-8
3. Patrushev L.I. Artificiella genetiska system - M.: Nauka, 2005 - I 2 volymer - ISBN 5-02-033278-X

VIKTIG!

Informationen i detta avsnitt kan inte användas för självdiagnos och självbehandling. Vid smärta eller annan exacerbation av sjukdomen bör diagnostiska tester endast ordineras av den behandlande läkaren. För att ställa en diagnos och korrekt ordinera behandling bör du kontakta din läkare.

Artikel 00516

Ett block av tester för att diagnostisera genitala (urogenitala, latenta) infektioner med PCR-metoden

Detta analysblock inkluderar:

• Gardnerella vaginalis (Gardnerella) (bestämning i materialet med PCR)
• Candida albicans (candida) (bestämning i materialet med PCR)
• HPV, HPV (Humant papillomvirus, humant papillomvirus), typer: låg onkogen risk (6.11) som indikerar typen; hög onkogen risk (16,18,31,33,35,39,45,51,52) utan att specificera typen (bestämning i materialet genom PCR) (bestämning i materialet av met
• Mycoplasma hominis (human mycoplasma) (bestämning i materialet med PCR)
• Mycoplasma genitalium (genital mycoplasma) (bestämning i materialet med PCR)
• Neisseria gonorrhoeae (gonokocker) (bestämning i materialet med PCR)
• Trichomonas vaginalis (Trichomonas) (bestämning i materialet med PCR)

Vad är det för

Den optimala enheten för att diagnostisera sexuellt överförbara infektioner (STD, STI), såväl som inflammatoriska sjukdomar i genitourinary systemet hos män och kvinnor.

Slidan är inte en steril miljö. I slidan, såväl som i tarmarna och på huden, finns det många olika mikroorganismer...

Detta block är för dig om:

• aldrig har undersökts eller undersökts för mer än ett år sedan;
• haft oskyddat samlag sedan den senaste undersökningen;
• planerar en graviditet (båda makarna är gravida);
• några klagomål förekom, till exempel obehag, klåda, sveda, flytningar, vaginal lukt, känsla av irritation.

Observera att många infektioner är asymtomatiska (så kallade latenta infektioner), så du bör göra PCR-tester inte bara om du har besvär.

Blocket innehåller följande indikatorer:

• Chlamydia trachomatis (klamydia) (orsakande medlet för klamydia)
• Mycoplasma hominis (human mycoplasma)
• Mycoplasma genitalium (genital mycoplasma) (orsakande medel för mykoplasmainfektion)
• Ureaplasma parvum (ureaplasma parvum)
• Ureaplasma urealyticum (ureaplasma urealyticum, tidigare namn Biovar "T-960")
• Neisseria gonorrhoeae (gonococcus, orsakande medel för gonorré)
• HPV (Humant papillomvirus, humant papillomvirus), typer av hög onkogen risk: 16,18 med typ angiven, 16, 18,31,33,35,39,45,52,67,58,59 utan typ indikerad
• HPV (Humant papillomvirus, humant papillomvirus), typer av låg onkogen risk: 6.11 anger typen
• HPV (Humant papillomvirus, humant papillomvirus), typer av hög och låg onkogen risk: 16,18 med typ angiven, 16,18,31,33,35,39,45,52,67,58,59 utan typ indikerad, 6 , 11 med typangivelse
• Trichomonas vaginalis (Trichomonas, det orsakande medlet för trichomoniasis)
• Gardnerella vaginalis (Gardnerella)
• Candida albicans (Candida) (orsakande medel för candidiasis)

De viktigaste symptomen på dessa infektioner, inklusive symtom på sexuellt överförbara sjukdomar

Forskningsmetod: PCR.

PCR - polymeraskedjereaktion (PCR) är en diagnostisk metod som låter dig upptäcka försumbara mängder av ett visst genetiskt material i kliniskt material, multiplicera och identifiera det.

Biologiskt material för PCR-analys väljs beroende på platsen för patogenen. Men för att erhålla ett tillförlitligt analysresultat är den rekommenderade typen av biologiskt material för att upptäcka infektioner i urogenitala området. ett utstryk från vaginal flytning och livmoderhalskanalen hos kvinnor och urinröret hos män.

Typer av biologiskt material för PCR-diagnostik

• Urin för att isolera infektioner
• Skrapning och utstryk (cervikal, vaginal, urinrör) för infektioner
• Spermier, prostatasekret
• Blod och dess komponenter (serum, plasma, leukocyter, etc.)
• Avföring
• Saliv, sputum och sköljningar
• Bröstmjölk och bröstsekret
• Och så vidare.

Värdet av tester

Resultat för varje patogen: negativ positiv

Villkor för att ta analysen

Testet kan göras på vilken CIR-klinik som helst under öppettiderna.

Frågade också:

• Bakteriologisk undersökning av flytningar från livmoderhalskanalen med bestämning av känslighet för antibiotika, utan känslighet för antimykotika

Hur testas man på CIR Laboratories?

För att spara tid, gör en beställning för analys på Webbutik! När du betalar för din beställning online får du rabatt 10% för hela beställningen!

Relaterat material

Klamydia och klamydophila

Modern klassificering av familjen Chlamydiaceae (chlamydia, chlamydophila)

PCR – polymeraskedjereaktion (PCR, polymeraskedjereaktion)

PCRär en DNA-diagnostisk metod som låter dig isolera försumbara mängder av visst genetiskt material i kliniskt material, multiplicera och identifiera det.

Klamydia

Klamydia- en bakteriesjukdom orsakad av Chlamydia trachomatis.

Vaginal mikroflora

Slidan är inte en steril miljö. I slidan, såväl som i tarmarna och på huden, finns det många olika mikroorganismer. Grunden för mikrofloran är mjölksyrabakterier.

Olika läkarundersökningsprogram

Vilka undersökningar ingår i den årliga läkarundersökningen? Varför är det viktigt att genomgå en fullständig undersökning?

Immunoblot

Blotting(från engelska blot - spot) - metoder för att identifiera proteiner, som tillhandahålls genom att applicera separerade molekyler (till exempel antigener) på vilken bärare som helst.

PCR-diagnostik av infektioner i spermier (ejakulera)

PCR-analys idag är en av de högteknologiska, prisvärda och effektiva metoderna för molekylär diagnostik, som används inom olika medicinska områden. Oftast används det för laboratoriediagnostik av mänskliga infektionssjukdomar, inklusive sexuellt överförbara infektioner (STI), och identifiering av patogener av urogenitala infektioner som kan orsaka olika inflammatoriska sjukdomar i det genitourinära systemet hos män och kvinnor.

Inom modern medicin läggs större vikt vid högprecisions laboratorieforskningstekniker baserade på polymeraskedjereaktionen. Tack vare användningen av PCR-teknik har det blivit möjligt att genomföra analyser på molekylärgenetisk nivå och identifiera akuta och kroniska former av ärftliga och infektionssjukdomar hos en patient långt innan kliniska symtom uppträder.

Vad är PCR-diagnostik

Denna metod utvecklades av den amerikanska biokemisten och nobelpristagaren Carrie Mullis 1984.

Många kvalificerade specialister möter PCR-testning varje dag och kan inte föreställa sig att exakt diagnostisera de flesta aktiva former av patologier utan dess resultat i fall där immunologiska och mikrobiologiska metoder inte fungerar. Det händer ofta att olika virus kan orsaka samma kliniska symtom, PCR-analys gör att du kan identifiera patogenen i dess lägsta koncentration i biomaterialet och identifiera även enstaka celler av virus eller baciller.

Om PCR-diagnostik på video

Grunden för PCR-diagnostik är under speciella laboratorieförhållanden, upprepad amplifiering (multiplikation) av vissa sektioner av DNA (deoxiribonukleinsyra) - humant genetiskt material.

Hela den tekniska processen för kopiering består av flera steg:

1. Denaturering – provberedning, genom att höja biomaterialets temperatur (upp till 95 °C), delas 2-strängat DNA i två separata strängar.
2. Glödgning — Det biomaterial som studeras kyls och kvävebaserade primers (reagens) tillsätts till det, som har förmågan att specifikt känna igen sekvenser i DNA-molekylen som endast är karakteristiska för det patogena ämnet och kombineras med dem.
3. Förlängning – själva polymerasreaktionen, fullbordandet av ett unikt molekylärt genetiskt ställe inträffar, i var och en av kopplingarna med primern bildas en ny DNA-sträng, som strukturellt kompletterar dottern en.

Hela cykeln upprepas 20 - 30 gånger. I slutändan bildas det antal komplementära DNA-strängar som är tillräckligt för visuell analys och jämförelse av resultaten med tillgängliga data om cellstrukturen hos olika patogener. Viruset, arten av dess utseende bestäms, styrkan av dess effekt på kroppen och antalet närvarande baciller bestäms. Denna information är av stort värde för den behandlande läkaren när den ordinerar effektiva terapimetoder och väljer läkemedel.

PCR-diagnostiksmetoder skiljer sig från andra laboratoriemetoder i följande:

• direkt bestämning av förekomsten av patogener;
• hög känslighet, specificitet och mångsidighet för virusdetektionsproceduren;
• analyshastighet;
• förmågan att diagnostisera asymtomatiska patologier.

Resultaten av studien kan fotograferas eller föras in i informationsmedia så att de kan bedömas av oberoende experter.

Hur förbereder man sig ordentligt för att ta ett PCR-test?

Olika biomaterial används för forskning:

• blod;
• slem;
• saliv;
• urin;
• sputum;
• epitelavskrapningar;
• prostatajuice;
• skrapning av slemhinnor;
• Amnionvätska;
• placentavävnad;
• cerebrospinal-, led- eller pleuravätska;
• genitala sekret.

Modern laboratorieutrustning och laboratorieläkarens professionalism garanterar att patienten som genomgår PCR-analys får ett tillförlitligt resultat. Men studiens noggrannhet beror på korrekt förberedelse för testet och på överensstämmelse med alla rekommendationer för val av biomaterial.

Det är inte svårt att förbereda sig ordentligt för analysen; det är viktigt att följa alla befintliga regler:

1. Dagen före testet, ha inte samlag.
2. Avbryt gympapass.
3. Besök inte ett badhus eller bastu före undersökningen.
4. Du bör äta middag kvällen innan senast kl 20.00, ägna dig inte åt kryddig och fet mat och drick inte alkohol.
5. Venöst blod måste doneras på morgonen; innan proceduren ska du inte äta, dricka eller röka.

Hur kvinnor och män genomgår PCR-tester - funktioner i proceduren

Det huvudsakliga allmänna kravet för val av biomaterial är att erhålla den maximala koncentrationen av mikroorganismer i provet och frånvaron av oönskade föroreningar - slem, blod eller pus.

Vid undersökningar av infektioner som överförs genom sexuell kontakt (ureaplasmos, gardnerellose, klamydia, mykoplasmos, trichomoniasis) samlas sekret från könsorganen:

• hos män tas ett utstryk eller skrapning från urinkanalen (urethra);
• hos kvinnor - ett utstryk eller skrapning från slidan, livmoderhalskanalen.

När man tar material från urogenitala kanalen är det viktigt att undvika kontaminering. För detta ändamål tas en skrapning från män tidigast 2 timmar efter den sista urineringen, från kvinnor - med hänsyn till dagarna i menstruationscykeln. Överskott av slem eller pus avlägsnas med sterila bomullspinnar, biomaterialet samlas upp med hjälp av speciella plastsonder - detta minskar sannolikheten för att blod kommer in i provet.

Förfarandet för att ta en urogenital skrapning är ganska smärtsamt för män , vilket är anledningen till att den första portionen urin efter en retention över natten, som innehåller den största mängden epitel, ofta används för analys. Urin samlas upp i en steril behållare med tättslutande lock och levereras till laboratoriet senast två timmar efter uppsamling. I laboratoriet erhålls ett cellulärt sediment av urin för efterföljande arbete genom centrifugering.

Vilka infektioner ingår i PCR-12-komplexet?

PCR-diagnostik används aktivt av erfarna specialister. Den mest efterfrågade är diagnosen virus och infektioner.

Vilka 12 infektioner kan upptäckas med PCR-diagnostik?	Vad som avslöjas
HIV-infektion	Humant immunbristvirus typ 1/2
Hepatit A, B, C, G	Hepatitvirus HAV, HBV, HCV, HGV
Mononukleos	Epstein-Barr-virus
Cytomegalovirusinfektion	Orsaksmedlet är Cytomegalovirus
Herpetic infektion	Herpes simplex virus typ 1/2
STI är infektioner som överförs sexuellt	Patogena mikrober - ureaplasma, gardnellera, klamydia, mykoplasma, trichomonas
Tuberkulos	Mycobacterium tuberculosis
Onkogena virus	Humant papillomvirus - Humant papillomvirus och dess onkogena arter (14 typer)
Borrelios	Det orsakande medlet för fästingburen hjärninflammation
Listerios	Orsaksmedlet är Listeria monocytogenes
Candidiasis	Svampar från Candida-familjen
Helicobacter pylori-infektion	Orsaksmedlet är Helicobacter pylori

För närvarande utökar polymeraskedjereaktionstekniker möjligheterna att bedriva forskning - införandet av genotypning och splitsning av vävnads-DNA-fragment har blivit utbrett i olika områden inom modern medicin:

• gynekologi;
• urologi;
• pulmonologi;
• gastroenterologi;
• hematologi;
• onkologi.

Var kan jag testas billigt i Urals federala distrikt?

Moderna PCR-diagnostiksmetoder utvecklas ständigt. Tekniken i sig förbättras, nya varianter av PCR och nya testsystem som används för kedjereaktioner växer fram. Dessa innovationer gör kostnaderna för dessa tester mer överkomliga för patienterna.