ELISA yra patikimas ŽIV diagnozavimo metodas. Kaip ir kur atlikti ELISA testą. ELISA diagnostika: kokia esmė, antikūnų nustatymas, kaip jis atliekamas ir kokioms ligoms gydyti? Labiausiai įdomus fermentų imunologinis tyrimas yra ŽIV ELISA

ŽIV yra mūsų kartos rykštė. Kokie yra ŽIV diagnozavimo metodai, išsami informacija apie ŽIV ELISA testą. Kaip tai priimti, kaip interpretuoti analizės rezultatus.

Žmogaus imunodeficito virusas yra viena baisiausių mūsų kartos infekcijų.

ŽIV destruktyviai veikia mūsų imuninę sistemą, o laiku nesustabdžius ligos progresavimo, jis gali transformuotis į įgytą imunodeficito sindromą. ŽIV plinta per tiesioginį partnerių kontaktą lytinių santykių metu per vyro ir moters lytinius organus. Kita infekcijos priežastis gali būti viruso patekimas į kraują. Taip nutinka dėl nesterilių instrumentų naudojimo, užteršto kraujo perpylimo ir netgi iš kartos į kartą: vaikui nuo užkrėstos motinos žindymo metu.

Iki šiol mokslininkai visame pasaulyje laužo smegenis, kad sukurtų naujos kartos vaistus, galinčius išgydyti AIDS, tačiau, nepaisant spartaus mokslo pažangos tempo, žmogaus imunodeficito virusas ir toliau plinta visoje planetoje.

ELISA – ŽIV diagnostikos metodas

XX amžiaus kartos mokslininkai sukūrė keletą ŽIV diagnozavimo metodų, iš kurių svarbiausiu laikomas fermentinis imunologinis tyrimas. ŽIV ELISA buvo pradėtas atlikti palyginti neseniai - devintojo dešimtmečio pradžioje. Laikui bėgant metodas buvo tobulinamas ir įgijo naujų detalių. Dabar ELISA metodo patikimumas yra vienas didžiausių – apie 98 proc. Atitinkamai, šis metodas naudojamas vis dažniau.

ELISA yra pirmasis tyrimas, su kuriuo pacientas susiduria tirdamasis dėl ŽIV. ELISA metodas nustato antikūnų buvimą kraujyje. Jei tyrimas nustato antikūnų buvimą kraujyje, vadinasi, virusas yra. Tačiau informacija apie šį tyrimą turi būti paremta kitais tyrimais, tokiais kaip imunoblotavimas (IB) ir naujausios kartos metodas – polimerazės grandininė reakcija (PGR).

Antikūnai – tai specialūs baltymų junginiai, kuriuos gamina plazmos ląstelės kaip reakcija į organizmą patekusią infekciją (antikūnai pradeda formuotis praėjus 1-2 mėnesiams po užsikrėtimo).

ŽIV priežastys

Gydytojas jums išrašys siuntimą atlikti tyrimą, jei turėjote kontaktą su ŽIV infekuotu asmeniu arba yra užsikrėtimo rizika. Žmonių kartos, kurioms gresia pavojus užsikrėsti ŽIV, yra:

• mėnesį atliekamas injekcijų gydymo kursas;
• turėti lytinių santykių be specialių apsaugos priemonių;
• lytinių santykių metu perduodamų infekcijų nešiotojai;
• pacientų, kuriems buvo atliktas kraujo perpylimas ar injekcija, siekiant išsiaiškinti kraujo krešėjimo priežastį devintajame dešimtmetyje.

Jei kyla abejonių dėl savo ŽIV statuso ir nerimaujate dėl užsikrėtimo galimybės, rekomenduojama nedelsiant kreiptis pagalbos į bet kurią mūsų šalies gydymo įstaigą, kad būtų atliktas išsamus ŽIV tyrimas. Tyrimo rezultatai gaunami per mėnesį. Žmonėms, kuriems gresia ŽIV, rekomenduojama pasitikrinti kas 4 mėnesius.

Kaip išsitirti

Norint atlikti kraujo tyrimą dėl ŽIV, specialaus pasiruošimo nereikia, tačiau geriau laikytis paprasčiausių taisyklių:

• Geriau nevalgyti vakare, o ryte atlikti testą tuščiu skrandžiu;
• Nerekomenduojama perkrauti organizmo fiziniu darbu;
• valgyti sveiką maistą, kurį laiką susilaikyti nuo cigarečių ir alkoholio;
• Norėdami atmesti klaidingus testo rezultatus, neturėtumėte atlikti tyrimo po sunkių ligų gydymo.

Žmogaus imunodeficito viruso infekcija yra rimta diagnozė. Klaidos diagnozuojant gali sukelti pražūtingų pasekmių. ELISA tyrimas dėl ŽIV yra prieinamiausias tyrimo metodas, tačiau jis ne visais atvejais yra informatyvus.

ELISA – su fermentais susijęs imunosorbentinis tyrimas. ELISA metodo tikslas – aptikti imunodeficito viruso antikūnus biologinėje medžiagoje. Naudodami šį metodą galite stebėti ne pačių virusų buvimą skystyje, o tik antikūnus, pagamintus reaguojant į jų buvimą. Fermentinis imunologinis tyrimas plačiai naudojamas lytiškai plintančių ligų diagnostikai. Tai padeda nustatyti lytiniu keliu plintančias ligas.

Yra keletas ELISA tipų: tiesioginė versija, netiesioginė versija, sumuštinių metodas. Bet kokiu atveju metodas pagrįstas antikūnų, kurie yra svetimkūnio įsiskverbimo rodiklis, nustatymu. Norint nustatyti šias "žymes", biologinis komponentas yra apdorojamas fermentais.

Fermentinis imunologinis tyrimas nustato antikūnus 96–98% tikslumu, paklaida yra nereikšminga. Tai yra 2–4%.

ELISA – ŽIV diagnostikos metodas

ELISA tyrimas dėl ŽIV yra pirmasis diagnozės etapas. Imunodeficito viruso antigenai yra baltymai p24, p15, p17, p31 ir glikoproteinai gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.

Norint nustatyti viruso baltymą, iš venos paimamas kraujo mėginys. ELISA kraujo tyrimui siunčiamas mėginys apdorojamas fermentiniais imunologiniais reagentais. Serumas išskiriamas iš kraujo. Jei tyrimo metu jie randami, tai reiškia, kad virusas jau yra kraujyje.

Kraujas duodamas griežtai tuščiu skrandžiu. Likus 2 dienoms iki tyrimo nerekomenduojama valgyti riebaus maisto ir gerti alkoholio. Turėtumėte nustoti vartoti antivirusinius vaistus 14 dienų.

Metodo privalumai:

• santykinai maža kaina;
• didelis reagentų stabilumas;
• didelis jautrumas;
• trumpalaikė trukmė;
• minimali žmogiškojo faktoriaus įtaka.

Šiuolaikinės ELISA testų sistemos gaminamos pagal tarptautinius standartus. Tai padidina metodo tikslumą.

Fermentinis imunologinis tyrimas ne visada duoda patikimų rezultatų. Virusui patekus į kraują, prasideda latentinė (paslėpta) vystymosi stadija. Laikotarpis, kol virusai pradeda daugintis ir dar nesusiformavo antikūnai, vadinamas „seronegatyvaus lango laiku“. Šiame etape nėra prasmės atlikti ELISA. Jei atsiranda infekcija, rezultatas bus . Kaip greitai virusas atsiskleidžia, priklauso nuo to, kiek pavojingų ląstelių pateko į organizmą. Nesaugių lytinių santykių ar užteršto kraujo perpylimo atveju šis laikotarpis bus minimalus.

Siekiant didelio ŽIV ELISA patikimumo, testas atliekamas tris kartus. Žmogaus imunodeficito viruso ELISA testo atlikimo terminai:

• 6 savaites po galimo kontakto,
• per 3 mėnesius,
• po šešių mėnesių.

4-osios kartos ŽIV ELISA metodas yra informatyviausias ankstyvosiose infekcijos stadijose. Ją galima atlikti praėjus 1 mėnesiui po įtariamos infekcijos. Bandymas yra brangus, palyginti su 3 kartos analogu. Todėl valstybinėse gydymo įstaigose jis naudojamas kaip papildomas diagnostikos metodas. 3 tyrimas atliekamas nemokamai.Jei remiantis jo rezultatais negalima duoti aiškaus atsakymo, pacientas siunčiamas į 4 kartos ELISA tyrimą.

Svarbu! Iš karto po užsikrėtimo žmogus tampa užkrečiamas. Jis pavojingas kitiems, net kai dar nežino apie savo diagnozę!

Jei ELISA atskleidžia antikūnus prieš ŽIV antigenus, reikia atlikti papildomus tyrimus. Tai įtraukia . Šio metodo patikimumas yra 80%. PGR tiria kraują, spermą ir makšties išskyras. Biologinis skystis suskaidomas medicininiame reaktoriuje ir apdorojamas fermentais. Dėl to gaunami duomenys apie ŽIV ląstelių koncentraciją skystoje terpėje. Dėl didelės paklaidos (20 proc.), jei rezultatas teigiamas, papildomai atliekamas imunoblotingas.

Kitas diagnozės etapas yra Combo testas (arba imunoblotingas). Tai labai jautrus testas (98 % patikimumas), kuris atliekamas, jei ELISA rezultatai yra dviprasmiški po 6 mėnesių.

ELISA rezultatų dekodavimas

Iššifravimo laikas svyruoja nuo 24 iki 48 valandų. Jei reikia skubiai gauti informaciją (reikia operacijos), dekodavimas atliekamas per 2 valandas. Provincijos medicinos centrai ne visada turi reikiamų reagentų. Mėginys paimamas taikymo vietoje, tada perkeliamas į regioninį centrą. Tokiomis aplinkybėmis rezultatą galima sužinoti per 1-2 savaites.

Fermentinio imunologinio tyrimo rezultatas gali būti teigiamas arba neigiamas; kitų variantų nėra.

Net jei pradinio ir pakartotinio ELISA rezultatas buvo teigiamas, pacientas negali būti pripažintas ŽIV infekuotu. Priklausomai nuo klaidų. Klaidingai teigiamo rezultato priežastys:

• lėtinės ligos;
• ilgalaikės infekcinės ligos;
• nėštumas.

Todėl analizės rezultatas turėtų būti patikslintas papildomais tyrimais.

Jei imunoblotingas yra ŽIV teigiamas (reaktyvus), asmuo laikomas ŽIV infekuotu, o tai reiškia, kad jis yra sveikas.

Laikui bėgant viruso ląstelės prisitaiko prie paskirtų vaistų. Norint kontroliuoti, ELISA testas kartojamas periodiškai.

Kartais imunoblotas rodo klaidingai neigiamą rezultatą. Itin retai imunodeficito virusas serga 6 mėnesius (ar ilgiau). Tai įmanoma, jei į kraują patenka nedidelis kiekis viruso ląstelių. 0,5% visų atvejų infekciją galima diagnozuoti tik po metų. 99,5%, per šešis mėnesius po užsikrėtimo ELISA duos patikimą rezultatą.

Net ir atliekant labai tikslius tyrimus, klaidų tikimybė vis tiek yra 2%. Neturėtume pamiršti apie žmogiškąjį faktorių. Siekiant pašalinti klaidos galimybę, testą galima atlikti 2 skirtingose ​​įstaigose.

S.N. IGOLKINA, V.F. PUZYREVAS, L.G. ZININA, N.M. DENISOVA, A.N. BURKOVAS,

A.P. RITE, T.I. ULANOVA
UAB "Mokslinių tyrimų ir gamybos asociacija "Diagnostikos sistemos",

Nižnij Novgorodas
ELISA IMUNO TYRIMO SISTEMOS „DS-ELISA-HBeAg“ ir „DS-ELISA-anti-HBe“, SPECIALIAI DIAGNOSTIKAI IR ŪMINIO IR LĖTINIO HEPATITO B PROGNOZĖS REZULTATAMS
Hepatitas B yra virusinė infekcinė liga, kuriai būdingas sunkus

uždegiminis kepenų pažeidimas. Apie 1% mirčių įvyksta

ūminis ligos laikotarpis, 4-10% atvejų virsta lėtine

procesas su galimu vėlesnės kepenų ir pirminės cirozės formavimu

hepatokarcinomos.

Nepaisant sergamumo ūminiu hepatitu B mažėjimo tendencijos, toliau formuojasi epidemiologiškai pavojinga pacientų, kuriems lėtinis virusinis hepatitas diagnozuojamas pirmą kartą, bei ligos sukėlėjo nešiotojų grupė. . Nepalanki prognozė išlieka dėl didelio sergamumo hepatitu B tarp reprodukcinio amžiaus gyventojų, taip pat tarp paauglių.

Todėl dabar ypač aktualūs hepatito B gydymo, profilaktikos ir diagnostikos klausimai.Šiuo metu šios infekcijos žymenims nustatyti plačiai taikomi fermentiniai imunosorbento tyrimo metodai. Svarbiausi serologiniai HBV žymenys yra e-antigenas (HBeAg) ir antikūnai prieš e-antigeną (anti-HBe). HBeAg yra susijęs su dideliu kraujo užteršimu, o tai rodo aktyvią hepatito B viruso (HBV) replikaciją. Nustatyta, kad aukšti HBeAg titrai atitinka didelį DNR polimerazės aktyvumą ir visada derinami su pilnų Dane dalelių aptikimu. Kai serumas, kuriame yra HBeAg, patenka į sveiko žmogaus kraują, infekcijos rizika yra daug kartų didesnė nei po serokonversijos.

Sergant ūminiu hepatitu B, HBeAg kraujyje aptinkama ankstyvose infekcinio proceso stadijose, jau pasireiškus pirmiesiems klinikiniams ligos pasireiškimams, savaite atsiliekant nuo HBsAg atsiradimo. Ciklinės eigos ūminiam hepatitui B (AHB) būdinga trumpalaikė HBeAg cirkuliacija. Netrukus, 2–3 icterinio periodo savaites, atsiranda anti-HBe, todėl galima numatyti palankias ligos baigtis.

Anti-HBe kraujyje cirkuliuoja 2-5 metus, rečiau kelis mėnesius.

HBeAg-antiHBe serokonversijos pradžia žymi staigų aktyvumo sumažėjimą

infekcinis procesas. HBeAg nustatymas pacientų kraujyje po 2 ligos mėnesių rodo patologinio proceso chroniškumą. Tokiu atveju anti-HBe gali susidaryti praėjus daugeliui metų po antikūnų prieš HBcAg atsiradimo arba gali būti visai neaptiktas.

Anti-HBe atsiradimas gali turėti nepalankią prognostinę reikšmę

ūminis HBV laikotarpis sunkiomis formomis, o tai atitinka mutaciją prieššerdinėje zonoje su

HBV „e-“ padermės susidarymas.

Šio darbo tikslas buvo sukurti labai jautrų ir specifinį

fermentų imunologinių tyrimų sistemos, skirtos HBeAg ir anti-HBe aptikimui ir pagrindinių jų charakteristikų įvertinimui.

Medžiagos ir metodai.

1. Fermentų imunosorbentų tyrimų sistema „DS-ELISA-HBeAg“. Tinkama testo pradžia

yra polikloniniai ožkų antikūnai prieš rekombinantinį HBeAg, kuriuos gamina NPO Diagnostic Systems, Nižnij Novgorodas, adsorbuoti ant kietosios fazės, ir konjugatas, kuris yra polikloniniai ožkos antikūnai prieš rekombinantinį HBeAg, pažymėti krienų peroksidaze, gaminami NPO Diagnostic No Systemv, Nizhny Novgorod. Analizės schema yra vieno etapo "sumuštinis" Bendras reakcijos laikas yra 1,5 valandos. Serumo mėginys analizuojamas neskiestas.

2. Fermentų imunosorbentų tyrimų sistema „DS-ELISA-anti-HBe“. Testo pagrindas yra

rekombinantinis HBeAg (AHBV 102), pagamintas NPO Diagnostic Systems,

Nižnij Novgorodas, sorbuotas ant kietosios fazės ir anti-IgG konjugato su krienų peroksidaze, pagamintas Sorbent Service, Maskva. Reakcija vyksta dviem etapais. Tiriamasis serumas pridedamas prie imobilizuoto antigeno 1/10 praskiedimu ir, inkubavus bei pašalinus nesurištus komponentus, naudojant pelės monokloninius antikūnus prieš žmogaus IgG, paženklintus krienų peroksidaze, nustatomi specifiniai imunokompleksai.

3. Sukurtoms tyrimų sistemoms įvertinti panaudoti 2178 serumo mėginiai

kraujo. Iš jų 480 buvo sveikų donorų serumo mėginiai. 1680 pavyzdžių atstovauja

yra kraujo serumo mėginiai, kuriuose yra įvairių hepatito B viruso žymenų.

Laikui bėgant iš pacientų, kuriems buvo diagnozuotas ūminis virusinis hepatitas B, buvo paimta aštuoniolika mėginių. Anksčiau visi mėginiai buvo tiriami, ar nėra HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc naudojant NPO Diagnostic Systems, Nižnij Novgorod, testavimo sistemas: „ELISA-HBsAg/m“, „DS-ELISA-HBeAg“, „ DS-ELISA-anti-HBe", "ELISA-anti-HBc".

4. Atliktas palyginamas sukurtų testavimo sistemų vertinimas naudojant

komercinis vaistas "Monolisa HBe", pagamintas BIO-RAD, Prancūzija;

Rezultatai ir DISKUSIJA. NPO „Diagnostic Systems“ sukūrė 2 naujus diagnostikos rinkinius: „DS-ELISA-HBeAg“ ir „DS-ELISA-anti-HBe“. Testų sistema „DS-ELISA-HBeAg“ skirta hepatito B viruso e-antigenui aptikti žmogaus serume (plazmoje) naudojant fermentinį imunosorbentinį tyrimą ir gali būti naudojama specifinei diagnostikai, nustatant infekcinės ligos aktyvumą. procesas, numatantis hepatito B sunkumą ir baigtį.

Testo sistema „DS-ELISA-anti-HBe“ skirta aptikti IgG antikūnus prieš hepatito B viruso e-antigeną žmogaus kraujo serume (plazmoje) ir gali būti

naudojamas prognozuojant infekcinio proceso eigą ir stebint hepatito B terapiją.

Siekiant ištirti naujų testų specifiškumą, buvo įvertintas pasiskirstymas

kraujo serumo mėginių, kuriuose yra ir kurių nėra, optinis tankis (OD).

HBeAg arba anti-HBe. Buvo naudojami sveikų donorų kraujo serumo mėginiai ir kraujo serumo mėginiai, atrinkti įvairiems hepatito B viruso žymenims.

kraujo perpylimo stotys. Tyrimo rezultatai parodė reikšmingą dviejų populiacijų atsiskyrimą. Serumo mėginių, kurių sudėtyje nėra HBeAg, OD vertės svyravo nuo 0,011 iki 0,111, o pagrindinė serumo mėginių, kurių sudėtyje yra HBeAg, smailė svyravo nuo 2,186 iki 3,186 (1a pav.).

Fig.1a. Serumo mėginių, turinčių ir neturinčių HBeAg, OD pasiskirstymas „DS-ELISA-HBeAg“ tyrimo sistemoje
Smailę, atitinkančią žemo OD (0,3–0,6) serumų grupę, tikriausiai sudaro serumo mėginiai, surinkti ankstyvose infekcinio proceso stadijose.

Jau inkubaciniu laikotarpiu HBsAg ir HBeAg natūraliai registruojami pacientų kraujyje, o tai patvirtina galimą jų epidemiologinį pavojų.

Serumo mėginių, kuriuose nėra anti-HBe, optinio tankio diapazonas

buvo nuo 0, 002 iki 0, 122, o pagrindinis serumo mėginių, turinčių anti-HBe, OD buvo nuo 2, 431 iki 3, 231 (1b pav.).

Ryžiai. 1b. Serumo mėginių, kurių sudėtyje yra ir neturi anti-HBe, OD pasiskirstymas „DS-ELISA-anti-HBeAg“ tyrimo sistemoje
Ištirtos anti-HBe teigiamų mėginių OD pasiskirstymo ypatybės

serumai, kurių sudėtyje yra ( n= 78) ir neturi HBsAg ( n=56).


Ryžiai. 2a. HBe teigiami serumo mėginiai, kuriuose yra HBsAg „DS-ELISA-anti-HBe“ tyrimo sistemoje.

2b pav. Anti-HBe teigiamų serumo mėginių, kuriuose nėra HBsAg, OD pasiskirstymo ypatybės „DS-ELISA-anti-HBe“ testų sistemoje.
87 % anti-HBe teigiamų serumo mėginių, kuriuose nebuvo HBsAg, optinis tankis svyravo nuo 0,41 iki 0,81 (2b pav.). Be to, tik 14% anti-HBe teigiamų serumo mėginių, kuriuose yra HBsAg, OD buvo šiame diapazone (2a pav.). Yra žinoma, kad vėlyvojo sveikimo fazėje, kai neigiamas reaktyvumas HBsAg, laipsniškai mažėja antikūnų titrai prieš HBeAg (2b pav.). Todėl gali būti, kad vyraujanti anti-HBe teigiamų mėginių koncentracija atitiko mažesnį nei 0, 8 OD.

Gauti duomenys rodo teigiamų ir atskyrimo patikimumą

neigiamų kraujo serumo mėginių, neatsižvelgiant į ligos stadiją. Buvo tiriamas „DS-ELISA-HBeAg“ ir „DS-ELISA-antiHBe“ testų sistemų jautrumas ir specifiškumas, lyginant su „Monolisa HBe“ testu (BIORAD, Prancūzija) (1 lentelė).

1 lentelė
Lyginamosios jautrumo ir specifiškumo charakteristikos

testavimo sistemos DS-ELISA-HBeAg ir DS-ELISA-antiHB

Indeksas	HBeAg nustatymas		AntiHBe nustatymas
	NPO „DS“, DS-IFA-HBeAg	"BIO-RAD" "Monolisa HВe"	NPO "DS" DS-ELISA-antiHBe	"BIO-RAD"
Kiekis tyrinėjo pavyzdžiai	67	67	32	32
Atskleista teigiamas pavyzdžiai	47	47	16	16
Atskleista neigiamas pavyzdžiai	20	20	16	16

1 lentelėje pateikti duomenys rodo 100 % rezultatų sutapimą.

Yra žinoma, kad kombinuota HBeAg ir anti-HBe indikacija, ypač jų kiekybinis įvertinimas, turi papildomos prognostinės reikšmės. Spartus anti-HBe titro padidėjimas apibūdina aktyvų humoralinį imuninį atsaką ir praktiškai pašalina chroniškumo grėsmę. Išanalizavome HBeAg/anti-HBe kiekio pokyčius pacientų, kuriems buvo klinikinė diagnozė „ūminis virusinis hepatitas B“, kraujo serumo mėginiuose (2 lentelė).

2 lentelė
HBeAg/anti-HBe serokonversijos dinamika pacientams, sergantiems HBV

Tema serga	Kraujo paėmimo diena*	HBeAg	anti-HBe O.F./O.C.		Anti-HBc	prieš HBc IgM
	1	1,4+	2,1+	+	+	+
	12	0,5-	1,0+	+	+	+
	21	0,3-	1,3+	+	+	+
	1	1,2+	1,2+	+	+	+
	5	0,4-	1,0+	+	+	+
	13	0,2-	2,5+	+	+	+
	1	1,2+	0,6-	+	+	+
	21	0,2-	4,6+	+	+	+
	30	0,2-	9,7+	+	+	+
	1	2,1+	0,5-	+	+	+
	8	0,6-	1,1+	+	+	+
	28	0,3-	2,8+	+	+	+
	1	0,7-	2,2+	+	+	+
	8	0,3-	2,2+	+	+	+
	15	0,3-	2,8+	+	+	+
	38	0,2-	3,0+	+	+	+
6	1	1,1+	4,4+	+	+	+
	14	0,5-	3,8+	+	+	+

* nuo patekimo į ligoninę
Visi serumo mėginiai buvo ištirti, ar nėra serologinių žymenų

OGV: HBsAg, anti-HBc, anti-HBc IgM. Stebėjimo laikotarpis svyravo nuo 13 iki 38 dienų. 1, 2 ir 6 pacientams anti-HBe buvo nustatytas HBeAg titro sumažėjimo fone. 3 ir 4 pacientams anti-HBe atsirado po to, kai HBeAg išnyko iš kraujo serumo atitinkamai 21 ir 8 dieną. HBeAg aptikimo paciento Nr.5 kraujo serume analizė paguldus į ligoninę parodė neigiamą rezultatą. Tuo pačiu metu konversija į anti-HBe buvo užregistruota jau pirmąją tyrimo dieną.

Visiems tiriamiesiems buvo nustatyta tendencija didėti antikūnų prieš HBeAg titras

kraujo serumas, leidžiantis numatyti palankią klinikinės būklės dinamiką

ūminio kvėpavimo sindromo apraiškos ir greitas pasveikimas.

Naujų bandymų sistemų tyrimas parodė didelį jų diagnostinį patikimumą. DS-ELISA-HBeAg ir DS-ELISA-antiHBe palyginimo rezultatai parodė 100% atitikimą Monolisa HBe testui.

Tiriant pacientų, sergančių hepatitu B, serumo mėginius dinamikoje, atliekami tyrimai

patvirtintas didelis jautrumas ir specifiškumas.

Trumpas tiriamųjų mėginių ir konjugato inkubavimo laikas (1 valanda) leidžia nustatyti teisingą taktiką, kaip atlikti terapines priemones per trumpiausią įmanomą laiką. Sukurtos testų sistemos yra lengvai naudojamos ir ekonomiškos (HBeAg nustatyti reikia 50 μl serumo, o anti-HBe nustatyti – 10 μl serumo). Aukštos tyrimų kokybės charakteristikos leidžia juos sėkmingai panaudoti prognozuojant infekcinio proceso eigą ir stebint hepatito B terapiją.
LITERATŪRA

1.Mayeris K.P. Hepatitas ir hepatito pasekmės / K.P. Mayer. – M., GEOTAR, Medicina, 1999.- P.720

2.Onishchenko G.G. Virusinio hepatito plitimas kaip grėsmė nacionaliniam saugumui / G.G. Onishchenko, L.A. Dementieva // Mikrobiologijos žurnalas. –2003.-Nr.4.- P.93-99.

3.Sorinsonas S.N. Virusinis hepatitas / S.N. Sorinsonas. - Sankt Peterburgas, Teza, 1997.- 306 P.

4. Baumeisteris M. Hepatito B viruso ir antigeno specifiniai epitopai ir komercinių anti-HВe imunologinių tyrimų apribojimai / M. Baumeister // Medicinos virusologijos žurnalas.- 2000.-N 60.- R. 256-263.

5.Kane M. Pasaulinė hepatito B infekcijos kontrolės programa / M. Kane // Vakcina. – 1995.-N131(1 priedas).- R.47-6. Šuničis ŠO. Hepatito B viruso padermės su mutacijomis pagrindiniame promotoriuje pacientams, sergantiems fulminantiniu hepatitu / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Vidaus medicinos metraščiai. – 1995.- N122.- R.241-248.

7. Ou J.-N. Hepatito B viruso e antigeno molekulinė biologija./ J.-N.Ou // Gastroenterologijos ir hepatologijos žurnalas. – 1997.- Nr.12 (Suppl.1) – R. 178-187.

8.Tiollais P. Hepatito B virusas. / P. Tiollais, C. Pourcel, A. Dejean // Gamta. – 1985. – P.317, 489-495
Publikuota: J. “Klinikinė laboratorinė diagnostika” - 2005.-Nr.6-P.-34-37

ELISA (fermentinis imunosorbento tyrimas, ELISA) į praktinės medicinos gyvenimą įžengė kažkur praėjusio amžiaus 60-aisiais. Pradinė jo užduotis buvo histologiniai tyrimai moksliniais tikslais, kurių tikslas – gyvo organizmo ląstelių antigeninės struktūros paieška ir identifikavimas.

ELISA metodas pagrįstas specifinių (AT) ir susijusių antigenų (AG) sąveika su „antigeno-antikūno“ komplekso susidarymu, kuris aptinkamas naudojant fermentą. Šis faktas paskatino mokslininkus galvoti, kad šis metodas gali būti naudojamas diagnostikos tikslais, siekiant nustatyti specifinius įvairių klasių imunoglobulinus, susijusius su imuniniu atsaku į tam tikrą infekciją. Ir tai buvo proveržis klinikinėje laboratorinėje diagnostikoje!

Metodas buvo pradėtas aktyviai naudoti tik devintojo dešimtmečio pradžioje, o vėliau daugiausia specializuotose įstaigose. Pirmuosiuose imunofermentų analizatoriuose buvo įrengti kraujo perpylimo centrai ir stotys, infekcinių ligų ir venerologijos ligoninės, nes mūsų horizonte pasirodė didžiulis AIDS, gimęs Afrikos žemyne ​​ir iškart prisijungė prie „senųjų“ infekcijų, reikalavo neatidėliotinų diagnostinių priemonių ir paieškos. dėl jį veikiančių gydomųjų vaistų.

ELISA metodo taikymo sritis

Fermentinio imunologinio tyrimo galimybės yra tikrai plačios. Dabar sunku įsivaizduoti, kaip apsieiti be tokių tyrimų, kurie naudojami pažodžiui visose medicinos srityse. Atrodo, ką ELISA gali padaryti onkologijoje? Pasirodo, gali. Ir daug. Analizės gebėjimas rasti žymenis, būdingus tam tikroms piktybinių navikų rūšims, yra pagrindas anksti nustatyti naviką, kai dėl mažo dydžio jis dar nėra nustatytas jokiu kitu metodu.

Šiuolaikinė klinikinė laboratorinė diagnostika (CDL), be navikų žymenų, turi nemažą ELISA panelių arsenalą ir jomis diagnozuoja įvairias patologines būkles (infekcinius procesus, hormoninius sutrikimus) bei stebi farmacinius vaistus, siekiant nustatyti jų poveikį paciento organizmui. ir, beje, ne tik žmogus. Šiuo metu fermentinis imunologinis tyrimas plačiai naudojamas veterinarijos tarnybose, nes „mūsų mažieji broliai“ taip pat yra jautrūs daugeliui ligų, nuo kurių kartais labai kenčia.

Taigi ELISA dėl savo jautrumo ir specifiškumo iš kraujo mėginio, paimto iš venos, gali nustatyti:

• Hormoninė būklė (skydliaukės ir antinksčių hormonai, lytiniai hormonai);
• Virusinių ir bakterinių infekcijų buvimas (ŽIV, B ir C, chlamidijos, sifilis ir daugelis kitų ligų, kurias sukelia patogeniniai mikroorganizmai);
• Mikroorganizmų gyvybinės veiklos pėdsakai, kurie inicijavo infekcinį procesą, kuris sėkmingai baigėsi ir perėjo į imuninio atsako į šį patogeną formavimosi stadiją. Tokie pėdsakai, tai yra antikūnai, daugeliu atvejų lieka cirkuliuoti kraujyje visą gyvenimą, taip apsaugodami žmogų nuo pakartotinio užsikrėtimo.

Kokia ELISA esmė?

Fermentinio imunologinio tyrimo metodas leidžia nustatyti ne tik paties patogeno buvimą (kokybinė analizė), bet ir kiekybinį jo kiekį paciento kraujo serume.

Viruso ar bakterijų dozė reikšmingai įtakoja infekcinio proceso eigą ir jo baigtį, todėl kiekybinė analizė vaidina svarbų vaidmenį diagnozuojant ir gydant įvairių formų ir stadijų ligas.

Tačiau žinant fermentų imunologinius tyrimus kaip ELISA metodą, net nesusimąstome, kaip jis sugeba aprėpti tokį platų mūsų planetoje gyvenančių mikroorganizmų spektrą, kurių daugelis kelia tiesioginę grėsmę žmonių ir gyvūnų sveikatai bei gyvybei. Tačiau faktas yra tas, kad ELISA turi daugybę galimybių (nekonkurencinių ir konkurencinių – tiesioginių ir netiesioginių), kurių kiekviena išsprendžia savo problemą ir leidžia atlikti tikslinę paiešką.

Vienos ar kitos klasės imunoglobulinams identifikuoti naudojama tradicinė 96 šulinėlių polistireno plokštė (plokštė), kurios duobutėse kietoje fazėje koncentruojami sorbuoti rekombinantiniai baltymai. Antikūnai arba antigenai, patekę į šulinėlį su kraujo serumu, randa „pažįstamą“ objektą ir sudaro su juo kompleksą (AG - AT), kuris, fiksuotas fermento konjugatu, pasireikš duobutės spalvos pasikeitimu, kai skaitydami rezultatus.

Fermentinis imunologinis tyrimas atliekamas naudojant tam tikro specifiškumo testavimo sistemas, pagamintas specialiose laboratorijose ir aprūpintas visais reikalingais reaguojančiais komponentais. Tyrimai gali būti atliekami naudojant skalbimo mašinas („skalbykles“) ir skaitymo spektrofotometrus, kurie dažniausiai apima rankų darbą. Visiškai automatinėse mašinose, kurios atlaisvina laborantą nuo monotoniško lašinimo, plovimo ir kitų įprastų užduočių, žinoma, dirbti greičiau ir patogiau, tačiau ne visos laboratorijos gali sau leisti tokią prabangą ir toliau dirbti senamadiškai. pusiau automatinės mašinos.

ELISA rezultatų interpretavimas priklauso laboratorinės diagnostikos gydytojo kompetencijai, taip pat reikia atsižvelgti į beveik visų imunocheminių reakcijų savybę duoti klaidingai teigiamus arba klaidingai neigiamus atsakymus.

Vaizdo įrašas: šiuolaikinis fermentinis imunologinis tyrimas

ELISA rezultatai naudojant sifilio pavyzdį

Fermentinis imunologinis tyrimas tinka visoms formoms identifikuoti, be to, naudojamas atrankos tyrimuose. Analizei atlikti naudojamas paciento veninis kraujas, paimtas tuščiu skrandžiu. Darbe naudojamos tam tikro specifiškumo tabletės (AB klasės A, M, G) arba suminiai antikūnai.

Atsižvelgiant į tai, kad sifilio antikūnai gaminami tam tikra seka, ELISA gali lengvai atsakyti į klausimą, kada įvyko infekcija ir kokiame proceso etape, o gautų rezultatų interpretacija gali būti pateikta tokia forma:

• IgM rodo infekcinio proceso trukmę (gali atsirasti paūmėjus lėtinėms uždegiminėms ligoms);
• IgA teigia, kad infekcija įvyko daugiau nei prieš mėnesį;
• IgG rodo, kad infekcija įsibėgėjo arba neseniai buvo atliktas gydymas, o tai nesunku nustatyti surinkus anamnezę.

Atliekant tyrimą dėl sifilio, neigiamos duobutės (ir neigiama kontrolė) išliks bespalvės, o teigiamos duobutės (ir teigiama kontrolė) bus ryškiai geltonos spalvos dėl testo metu pridėto chromogeno spalvos pasikeitimo. Tačiau spalvos intensyvumas ne visada sutampa su kontroliniu, tai yra, jis gali būti šiek tiek blyškesnis arba šiek tiek gelsvas. Tai yra abejotini rezultatai, kurie, kaip taisyklė, turi būti iš naujo išnagrinėti, privalomai atsižvelgiant į kiekybinius rodiklius, gautus spektrofotometru, tačiau apskritai spalva yra tiesiogiai proporcinga imuninių kompleksų (susijusių Ag ir AT) skaičiui. .

Labiausiai įdomus fermentų imunologinis tyrimas yra ŽIV ELISA

Analizė plačiam gyventojų sluoksniui galbūt yra įdomesnė nei kitos, nes vis dar negalima tvirtai pasakyti, kad daugelis socialinių problemų išnyko (prostitucija, narkomanija ir kt.). Deja, ŽIV paliečia ne tik šiuos visuomenės sluoksnius, užsikrėsti galima įvairiomis aplinkybėmis, nesusijusiomis su seksualiniu amoralumu ar narkotikų vartojimu. Bet jei reikia atlikti ŽIV testą, nereikėtų bijoti, kad visi aplinkiniai sužinos apie jūsų apsilankymą tokioje laboratorijoje. Dabar ŽIV infekuotus žmones saugo įstatymai, o abejojantys gali kreiptis į anoniminius biurus, kur gali išspręsti problemą nebijodami viešumo ir pasmerkimo.

Fermentinis imunologinis tyrimas, naudojamas ŽIV infekcijai diagnozuoti, yra vienas iš svarbiausių standartinių tyrimų, tačiau tam reikalingos specialios sąlygos, nes tema yra labai subtili.

Tikslinga atlikti ŽIV ELISA tyrimą po lytinių santykių, kraujo perpylimo, kitų medicininių procedūrų, rodančių infekciją, ir pasibaigus inkubaciniam periodui („seronegatyvus langas“), tačiau reikia turėti omenyje, kad šis laikotarpis nėra nuolatinis. Jis gali baigtis per 14–30 dienų arba gali trukti iki šešių mėnesių, todėl vidutinė vertė laikoma intervalu nuo 45 iki 90 dienų. Dėl ŽIV kraujas dovanojamas taip pat, kaip ir nuo kitų infekcijų – iš venos tuščiu skrandžiu. Rezultatai bus paruošti priklausomai nuo medžiagos sukaupimo laboratorijoje ir jos darbo krūvio (nuo 2 iki 10 dienų), nors dažniausiai laboratorijos atsakymą pateikia tą pačią arba kitą dieną.

Ko galite tikėtis iš savo ŽIV rezultatų?

ELISA ŽIV infekcijai nustatyti aptinka dviejų tipų viruso antikūnus: ŽIV-1 (dažniau Rusijoje ir kitose Europos bei Azijos šalyse) ir ŽIV-2 (dažniau Vakarų Afrikoje).

ŽIV ELISA užduotis – ieškoti G klasės antikūnų, kurie aptinkami visose tyrimo sistemose, bet vėliau, ir A bei M klasės antikūnų, aptiktų naujos kartos rekombinantinių tyrimų rinkiniuose, kurie leidžia rasti antikūnus. ankstyviausiose stadijose (inkubacinis laikotarpis – „seronegatyvus langas“). Iš ELISA galite tikėtis šių atsakymų:

Pirminis teigiamas rezultatas: kraujas turi būti pakartotinai tiriamas naudojant tos pačios rūšies, bet, jei įmanoma, kitos serijos tyrimų sistemą ir kitas asmuo (laborantas);

Pakartotinis (+) apima naują paciento kraujo paėmimą, kurio tyrimas panašus į pirminę analizę;

Kitas teigiamas rezultatas taikomas etaloninei analizei, kuriai naudojami labai specifiniai testų rinkiniai (2-3 vnt.);

Teigiamas rezultatas abiejose (arba trijose) sistemose siunčiamas imunoblotuoti (ta pati ELISA, bet atliekama atskirai, naudojant ypač didelio specifiškumo testų rinkinius).

Išvada apie ŽIV infekciją daroma tik remiantis imunoblotingu. Pokalbis su užkrėstu asmeniu vyksta visiškai konfidencialiai. Už medicininių paslapčių atskleidimą Rusijoje, kaip ir kitose šalyse, gresia baudžiamoji atsakomybė.

Ypatingo populiarumo sulaukė ir chlamidijų bei citomegaloviruso tyrimai naudojant fermentinį imunologinį tyrimą, nes jie leidžia nustatyti užsikrėtimo laiką, ligos stadiją ir gydymo priemonių efektyvumą.

Diegimo metu taip pat galima stebėti įvairių klasių antikūnų atsiradimą įvairiose infekcinio agento sukeltos patologinės būklės fazėse:

• IgM galima nustatyti jau praėjus septynioms dienoms po užsikrėtimo;
• IgA rodo, kad infekcija organizme gyvena ilgiau nei mėnesį;
• IgG patvirtina chlamidijos diagnozę ir padeda stebėti gydymą bei nustatyti jo veiksmingumą. Reikėtų pažymėti, kad G klasės antikūnai organizme išlieka ir cirkuliuoja nepriklausomai nuo ligos trukmės, todėl norint teisingai interpretuoti analizę, reikia atsižvelgti į pamatines vertes (normas), kurios, beje, , yra skirtingi kiekvienam CDL: atsižvelgiant į bandymo sistemos prekės ženklą ir į rinkinį įtrauktų reagentų specifiškumą. Normalios vertės įvedamos į formą šalia ELISA rezultato.

Kalbant apie , tai yra kiek kitaip: M klasės antikūnai atsiranda maždaug po pusantro mėnesio, ty rezultatas (IgM+) tampa teigiamas pirminės infekcijos fazėje arba latentinės infekcijos reaktyvacijos metu ir toks išlieka nuo 4 mėnesių iki šeši mėnesiai.

G klasės antikūnų buvimas būdingas pirminės ūminės infekcijos ar pakartotinės infekcijos atsiradimui. Analizė teigia, kad virusas yra, tačiau nepateikiama informacija, kurioje stadijoje yra infekcinis procesas. Tuo tarpu normalaus IgG titro nustatymas taip pat sukelia sunkumų, nes tai visiškai priklauso nuo konkretaus žmogaus imuninės būklės, tačiau tai nustatoma identifikuojant G klasės imunoglobulinus. Atsižvelgiant į tokį antikūnų elgesį, diagnozuojant CMV, reikia įvertinti G klasės antikūnų gebėjimą sąveikauti su CMV, siekiant vėliau jį „neutralizuoti“ (AT avidity). Pradinėje ligos stadijoje IgG labai silpnai jungiasi su viruso antigenais (mažas avidiškumas) ir tik tada pradeda rodyti aktyvumą, todėl galime kalbėti apie antikūnų avidiškumo padidėjimą.

Galime daug kalbėti apie fermentinio imunologinio tyrimo privalumus, nes šiuo metodu pavyko išspręsti daugybę diagnostinių problemų naudojant tik veninį kraują. Nereikia ilgai laukti, nerimauti ir nesklandumų renkant medžiagą tyrimams. Be to, ELISA testų sistemos toliau tobulinamos ir jau ne už kalnų diena, kai testas duos 100% patikimą rezultatą.

Vaizdo įrašas: Maskvos valstybinio medicinos universiteto mokomasis filmas. Sechenovą apie ELISA pagrindus

Kaina pagal pageidavimą

Prekę į krepšelį galite įdėti nurodę kiekį

Gamintojas: Diagnostikos sistemos

Šalis Rusija

Vienetas Matai: komplektas

Pakuotės tipas: kartoninė dėžutė

Straipsnis: L-1823

apibūdinimas

Fermentinė imunologinio tyrimo sistema, skirta aptikti G, M ir A klasių antikūnus prieš Treponema pallidum (T. pallidum) žmogaus kraujo serume (plazmoje) ir smegenų skystyje, siekiant diagnozuoti sifilį, visas reagentų rinkinys 96x2 nustatymui, tinkamas rankiniai metodai ir automatiniai testavimo analizatoriai. Metodas pagrįstas „spąstų“ principu, kuris susideda iš to, kad visų klasių specifiniai antitreponeminiai antikūnai, esantys mėginyje, tuo pačiu metu jungiasi su rekombinantiniais antigenais – T. pallidum imunodominuojančių baltymų analogais, fiksuotais plokštelės šulinėliuose. ir į tuos pačius antigenus, paženklintus peroksidazės krienais, kai kartu inkubuojami žmogaus kraujo serumo (plazmos) arba smegenų skysčio ir konjugato mėginiai. Substrato ir chromogeninio mišinio, kuriame yra TMB, spalvos pasikeitimas, kai jis pridedamas į plokštelės duobutes, rodo, kad tiriamuosiuose mėginiuose yra specifinių Treponema pallidum antikūnų.

Funkcinis tikslas

Antikūnų prieš Treponema pallidum aptikimas vaidina svarbų vaidmenį diagnozuojant sifilį, nes T. pallidum negalima išskirti iš ląstelių kultūros, o mėginių, skirtų tiesioginiam patogeno nustatymui, dažnai nepasiekiama latentinėje ir vėlyvoje ligos stadijoje. Atliekant sifilio serodiagnozę, naudojami netreponeminiai (RMP, RPR, VDRL) ir treponeminiai (RPGA, RIF, ELISA) tyrimai. Fermentiniai imunologiniai tyrimai, skirti nustatyti bendruosius antikūnus, naudojami masinei donorų kraujo patikrai ir sifiliui diagnozuoti kaip serologinių tyrimų komplekso dalis. Po sėkmingo gydymo treponeminių tyrimų reaktyvumas daugeliu atvejų išlieka

Specifikacijos

Nustatyti turinį:
1. Polistireno 96 šulinėlių sulankstoma plokštelė - 2 vnt.,
2. Konjugatas yra skaidrus geltonas skystis,
3. Teigiama kontrolė – skaidrus raudonas skystis,
4. Neigiama kontrolė – skaidrus žalias skystis,
5. Plovimo tirpalas, koncentratas, pH nuo 6,9 iki 7,6,
6. TMB yra skaidrus bespalvis skystis,
7. Substrato tirpalas - skaidrus bespalvis skystis, pH ~4,2.
8. Sustabdymo reagentas (0,2 M),
9. Naudojimo instrukcija ir kokybės sertifikatas.
Laikymo sąlygos: +2...8°C temperatūroje užšalimas nepriimtinas.
Tinkamumo laikas yra 15 mėnesių nuo pagaminimo datos, nurodytos rinkinio etiketėje.
Atitiktis TU 9398-182-05941003-2010 reikalavimams.
Registruotas Roszdravnadzor.