ELISA är en pålitlig metod för att diagnostisera HIV. Hur och var man gör ELISA-testet. ELISA-diagnostik: vad är essensen, bestämning av antikroppar, hur utförs det och för vilka sjukdomar är det effektivt? Den mest spännande av enzymimmunoanalyserna är HIV ELISA

HIV är vår generations gissel. Vilka metoder finns för att diagnostisera HIV, fördjupad information om ELISA-testet för HIV. Hur man tar det, hur man tolkar resultaten av analysen.

Det mänskliga immunbristviruset är en av de mest fruktansvärda infektionerna för vår generation.

HIV har en destruktiv effekt på vårt immunförsvar, och om sjukdomens utveckling inte stoppas i tid kan den förvandlas till förvärvat immunbristsyndrom. HIV sprids genom direktkontakt mellan partners under samlag genom manliga och kvinnliga könsorgan. En annan orsak till infektion kan vara viruset som kommer in i blodomloppet. Detta sker på grund av användningen av osterila instrument, transfusion av kontaminerat blod, och även över generationer: till ett barn från en infekterad mamma under amning.

Hittills har forskare runt om i världen bråttom för att skapa en ny generation av medicin som kan bota AIDS, men trots den snabba vetenskapliga utvecklingen fortsätter det mänskliga immunbristviruset att spridas över planeten.

ELISA – en metod för att diagnostisera HIV

Forskare från 1900-talets generation har utvecklat flera metoder för att diagnostisera HIV, varav den viktigaste anses vara enzymimmunanalys. HIV ELISA började genomföras relativt nyligen - i början av nittiotalet. Med tiden förfinades metoden och fick nya detaljer. Nu är tillförlitligheten hos ELISA-metoden en av de högsta - cirka 98%. Följaktligen används denna metod allt oftare.

ELISA är det första testet en patient stöter på när han testar för HIV. ELISA-metoden bestämmer förekomsten av antikroppar i blodet. Om testet finner närvaron av antikroppar i blodet är viruset närvarande. Information om detta test måste dock stödjas av andra tester, såsom immunblotting (IB) och den senaste generationens metod - polymeraskedjereaktion (PCR).

Antikroppar är speciella proteinföreningar som produceras av plasmaceller som en reaktion på att en infektion kommer in i kroppen (antikroppar börjar bildas 1-2 månader efter infektion).

Orsaker till HIV

Din läkare kommer att skriva en remiss till dig för att testa dig om du har varit i kontakt med någon som är smittad med hiv eller om det finns risk för infektion. Generationer av människor som riskerar att smittas av hiv inkluderar:

• genomgår en injektionsbehandling i en månad;
• ha sexuella relationer utan särskilda skyddsmedel;
• bärare av infektioner som överförs under sexuell kontakt;
• patienter efter att ha genomgått en blodtransfusion eller injektion för att upptäcka orsaken till blodpropp på åttiotalet.

Om du har tvivel om din hiv-status och oro för risken för infektion, rekommenderas det att du omedelbart söker hjälp från någon medicinsk institution i vårt land för att genomföra en omfattande hiv-undersökning. Testresultat erhålls inom en månad. Personer med risk för hiv rekommenderas att testas var fjärde månad.

Hur man testar sig

Det krävs inga speciella förberedelser för att ta ett blodprov för HIV, men det är bättre att följa de enklaste reglerna:

• Det är bättre att inte äta på kvällen, utan att ta testet på fastande mage på morgonen;
• Det rekommenderas inte att överbelasta kroppen med fysiskt arbete;
• äta hälsosam mat, avstå från cigaretter och alkohol ett tag;
• För att utesluta falska testresultat bör du inte ta testet efter att ha behandlat allvarliga sjukdomar.

Humant immunbristvirusinfektion är en allvarlig diagnos. Fel i diagnos kan leda till katastrofala konsekvenser. Ett ELISA-test för HIV är den mest tillgängliga forskningsmetoden, men den är inte informativ i alla fall.

ELISA – enzymkopplad immunosorbentanalys. Syftet med ELISA-metoden är att detektera antikroppar mot immunbristviruset i biologiskt material. Med hjälp av metoden kan du spåra närvaron i vätskan, inte av själva virusen, utan bara av de antikroppar som produceras som svar på deras närvaro. Enzymimmunanalys används i stor utsträckning vid diagnos av könssjukdomar. Det hjälper till att identifiera sexuellt överförbara sjukdomar.

Det finns flera typer av ELISA: direkt version, indirekt version, sandwichmetod. I alla fall är tekniken baserad på att bestämma närvaron av antikroppar, som fungerar som en indikator på penetrationen av ett främmande medel. För att identifiera dessa "taggar" behandlas den biologiska komponenten med enzymer.

Enzymimmunanalys bestämmer antikroppar med en noggrannhet på 96–98%, felet är obetydligt. Det är 2-4%.

ELISA – en metod för att diagnostisera HIV

ELISA-test för HIV är det första stadiet av diagnos. Antigenerna för immunbristviruset är proteinerna p24, p15, p17, p31 och glykoproteinerna gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.

För att upptäcka virusproteinet tas ett blodprov från en ven. Ett prov som skickas för ELISA-blodtestning behandlas med enzymimmunoanalysreagenser. Serum isoleras från blodet. Om de hittas under studien betyder det att viruset redan finns i blodet.

Blod doneras strikt på fastande mage. Det rekommenderas inte att äta fet mat eller dricka alkohol 2 dagar före testet. Du bör sluta ta antivirala läkemedel i 14 dagar.

Fördelar med metoden:

• relativt låg kostnad;
• hög stabilitet hos reagenser;
• hög känslighet;
• kort varaktighet;
• minimal påverkan av den mänskliga faktorn.

Moderna ELISA-testsystem tillverkas enligt internationella standarder. Detta ökar metodens noggrannhet.

Enzymimmunanalys ger inte alltid tillförlitliga resultat. Efter att viruset kommit in i blodet börjar det latenta (dolda) utvecklingsstadiet. Perioden innan virus börjar föröka sig och antikroppar ännu inte har bildats kallas "seronegativ fönstertid". Det är ingen mening att göra ELISA i detta skede. Om infektion uppstår blir resultatet . Hur snabbt viruset avslöjar sig beror på hur många farliga celler som har kommit in i kroppen. Vid oskyddat samlag eller transfusion av kontaminerat blod kommer denna period att vara minimal.

För hög tillförlitlighet av HIV ELISA utförs testet tre gånger. Deadlines för att ta ELISA-testet för humant immunbristvirus:

• 6 veckor efter trolig kontakt,
• om 3 månader,
• sex månader senare.

4:e generationens ELISA för HIV är en metod som är mest informativ i de tidiga infektionsstadierna. Det kan utföras så tidigt som 1 månad efter den misstänkta infektionen. Testet är dyrt jämfört med 3:e generationens analog. Därför används det i offentliga medicinska institutioner som en ytterligare diagnostisk metod. Test 3 genomförs kostnadsfritt. Om man utifrån resultatet inte kan ge ett säkert svar remitteras patienten till en 4:e generationens ELISA.

Viktig! Omedelbart efter infektion blir en person smittsam. Han är farlig för andra, även när han ännu inte känner till sin diagnos!

Om ELISA avslöjar antikroppar mot HIV-antigener måste ytterligare studier utföras. Detta inkluderar . Tillförlitligheten för denna metod är 80%. PCR testar blod, sperma och flytningar. Den biologiska vätskan bryts ner i en medicinsk reaktor och behandlas sedan med enzymer. Som ett resultat erhålls data om koncentrationen av HIV-celler i det flytande mediet. På grund av det stora felet (20%), om resultatet är positivt, utförs dessutom immunblotting.

Nästa steg i diagnosen är Combo-testet (eller immunblotting). Detta är ett mycket känsligt test (98% konfidens), som utförs om ELISA-resultaten är tvetydiga efter 6 månader.

Avkodning av ELISA-resultat

Dekrypteringstiden sträcker sig från 24 till 48 timmar. Om det är nödvändigt att få information omgående (operation krävs), utförs avkodning inom 2 timmar. Provinsiella vårdcentraler har inte alltid de nödvändiga reagenserna. Provet tas på ansökningsplatsen, sedan överförs det till det regionala centret. Under sådana omständigheter kan resultatet upptäckas inom 1-2 veckor.

Resultatet av en enzymimmunanalys kan vara antingen positivt eller negativt; det finns inga andra alternativ.

Även om resultatet av den initiala och upprepade ELISA var positivt kan patienten inte erkännas som HIV-infekterad. Med reservation för fel. Orsaker till ett falskt positivt resultat:

• kroniska sjukdomar;
• långvariga infektionssjukdomar;
• graviditet.

Därför bör resultatet av analysen förtydligas genom ytterligare studier.

Om immunblotting är HIV-positiv (reaktiv) anses personen vara HIV-infekterad, vilket betyder att de är friska.

Med tiden anpassar sig viruscellerna till de ordinerade läkemedlen. För att kontrollera, upprepas ELISA-testet med jämna mellanrum.

Ibland visar immunblotting ett falskt negativt resultat. Det är extremt sällsynt att ha immunbristvirus i 6 månader (eller mer). Detta är möjligt om en liten mängd virusceller kommer in i blodet. I 0,5 % av det totala antalet fall kan infektionen diagnostiseras först efter ett år. Hos 99,5 %, inom sex månader efter infektion, kommer ELISA att ge ett tillförlitligt resultat.

Även med mycket noggranna studier finns det fortfarande en 2% risk för fel. Vi får inte glömma den mänskliga faktorn. För att eliminera risken för fel kan testet utföras på 2 olika institutioner.

S.N. IGOLKINA, V.F. PUZYREV, L.G. ZININA, N.M. DENISOVA, A.N. BURKOV,

A.P. RITE, T.I. ULANOVA
LLC "Research and Production Association "Diagnostic Systems",

Nizhny Novgorod
ELISA IMMUNO TESTSYSTEM “DS-ELISA-HBeAg” och “DS-ELISA-anti-HBe” FÖR SPECIFIK DIAGNOS OCH FÖRUTSÄTTNING AV UTSLUT AV AKUT OCH KRONISK HEPATIT B
Hepatit B är en viral infektionssjukdom som kännetecknas av svår

inflammatorisk leverskada. Cirka 1% av dödsfallen inträffar i

akut period av sjukdomen, i 4-10% av fallen sker en omvandling till kronisk

process med eventuell bildning av efterföljande cirros i levern och primära

hepatokarcinom.

Trots trenden mot en minskning av incidensen av akut hepatit B fortsätter en epidemiologiskt farlig grupp patienter som diagnostiseras med kronisk viral hepatit för första gången, liksom en grupp bärare av det orsakande medlet av sjukdomen, att bildas . En ogynnsam prognos kvarstår på grund av den höga förekomsten av hepatit B bland befolkningen i reproduktiv ålder, såväl som bland ungdomar.

Därför är frågorna om behandling, förebyggande och diagnos av hepatit B särskilt relevanta nu. För närvarande används enzymkopplade immunosorbentanalysmetoder i stor utsträckning för att upptäcka markörer för denna infektion. De viktigaste serologiska markörerna för HBV inkluderar e-antigen (HBeAg) och antikroppar mot e-antigen (anti-HBe). HBeAg är associerat med hög blodkontamination, vilket indikerar aktiv replikation av hepatit B-virus (HBV). Det har fastställts att höga titrar av HBeAg motsvarar hög DNA-polymerasaktivitet och alltid kombineras med detektion av kompletta Dane-partiklar. När serum som innehåller HBeAg kommer in i blodet hos en frisk person är risken för infektion många storleksordningar högre än efter serokonversion.

Vid akut hepatit B detekteras HBeAg i blodet i de tidiga stadierna av infektionsprocessen, redan vid de första kliniska manifestationerna av sjukdomen, släpar efter utseendet av HBsAg med en vecka. Akut hepatit B (AHB) av ett cykliskt förlopp kännetecknas av kortvarig cirkulation av HBeAg. Snart, vid 2-3 veckor av den ikteriska perioden, uppträder anti-HBe, vilket gör det möjligt att förutsäga ett gynnsamt resultat av sjukdomen.

Anti-HBe cirkulerar i blodet i 2-5 år, mer sällan i flera månader.

Början av HBeAg-antiHBe serokonversion markerar en kraftig minskning av aktiviteten

infektiös process. Detektering av HBeAg i blodet hos patienter efter 2 månader av sjukdomen indikerar kronicitet av den patologiska processen. I detta fall kan anti-HBe bildas många år efter uppkomsten av antikroppar mot HBcAg eller kanske inte detekteras alls.

Uppkomsten av anti-HBe kan ha ett ogynnsamt prognostiskt värde i

akut period av HBV i svåra former, vilket motsvarar en mutation i pre-core-zonen med

bildning av HBV "e-"-stam.

Målet med detta arbete var att utveckla högkänsliga och specifika

enzymimmunoanalystestsystem för detektion av HBeAg och anti-HBe och bedömning av deras huvudsakliga egenskaper.

Material och metoder.

1. Enzym immunosorbent testsystem “DS-ELISA-HBeAg”. Giltig start av provet

är polyklonala getantikroppar mot rekombinant HBeAg, producerad av NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod, adsorberade på den fasta fasen, och ett konjugat, som är polyklonala getantikroppar mot rekombinant HBeAg, märkt med pepparrotsperoxidas, producerat av NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod. Analysschemat är en enstegs "smörgås" Den totala reaktionstiden är 1,5 timmar. Serumprovet analyseras outspätt.

2. Enzym immunosorbent testsystem "DS-ELISA-anti-HBe". Grunden för testet är

rekombinant HBeAg (AHBV 102), producerad av NPO Diagnostic Systems,

Nizhny Novgorod, sorberad på den fasta fasen och anti-IgG-konjugat med pepparrotsperoxidas, producerat av Sorbent Service, Moskva. Reaktionen sker i två steg. Testserumet sätts till det immobiliserade antigenet i en 1/10-spädning och efter inkubation och avlägsnande av obundna komponenter detekteras specifika immunkomplex med användning av musmonoklonala antikroppar mot humant IgG märkt med pepparrotsperoxidas.

3. För att utvärdera de utvecklade testsystemen användes 2178 serumprover

blod. Av dessa var 480 serumprover från friska donatorer. 1680 prover representerar

är blodserumprover som innehåller olika markörer för hepatit B-viruset.

Arton prover togs över tiden från patienter med en klinisk diagnos av akut viral hepatit B. Tidigare testades alla prover med avseende på närvaron av HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc med testsystem producerade av NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod: "ELISA-HBsAg/m", "DS-ELISA-HBeAg", " DS-ELISA-anti-HBe", "ELISA-anti-HBc".

4. En jämförande bedömning av de utvecklade testsystemen utfördes med hjälp av

kommersiellt läkemedel "Monolisa HBe", producerat av BIO-RAD, Frankrike;

Resultat och diskussion. NPO "Diagnostic Systems" har utvecklat 2 nya diagnostiska kit: "DS-ELISA-HBeAg" och "DS-ELISA-anti-HBe". Testsystemet "DS-ELISA-HBeAg" är utformat för att detektera e-antigenet från hepatit B-viruset i humant serum (plasma) med hjälp av en enzymkopplad immunosorbentanalys och kan användas för specifik diagnostik, för att bestämma aktiviteten hos den smittsamma process som förutsäger svårighetsgraden och resultatet av hepatit B.

Testsystemet "DS-ELISA-anti-HBe" är utformat för att detektera IgG-antikroppar mot e-antigenet från hepatit B-viruset i humant blodserum (plasma) och kan

används för att förutsäga förloppet av den infektiösa processen och övervaka terapi för hepatit B.

För att studera specificiteten hos de nya testerna bedömdes fördelningen

optisk densitet (OD) för blodserumprover som innehåller och inte innehåller

HBeAg eller anti-HBe. Blodserumprover från friska donatorer och blodserumprover valda för olika markörer för hepatit B-virus användes.

blodtransfusionsstationer. Resultaten av studien visade en signifikant separation av de två populationerna. OD-värdena för serumprover som inte innehöll HBeAg varierade från 0,011 till 0,111, och huvudtoppen för serumprover som innehöll HBeAg varierade från 2,186 till 3,186 (Figur 1a).

Fig. la. Fördelning av OD för serumprover som innehåller och inte innehåller HBeAg i testsystemet "DS-ELISA-HBeAg"
Toppen som motsvarar gruppen av sera med låg OD (0,3-0,6) består troligen av serumprover som tagits in i de tidiga stadierna av den infektionsprocess.

Redan under inkubationstiden registreras HBsAg och HBeAg naturligt i blodet hos patienter, vilket bekräftar deras potentiella epidemiologiska fara.

Optisk densitetsintervall för serumprover som inte innehåller anti-HBe

var i intervallet från 0,002 till 0,122, och huvudtoppen OD för serumprover innehållande anti-HBe var i intervallet från 2,431 till 3,231 (Figur Ib).

Ris. Ib. Fördelning av OD för serumprover som innehåller och inte innehåller anti-HBe i testsystemet "DS-ELISA-anti-HBeAg"
Fördelningsegenskaperna för OD för anti-HBe-positiva prover studerades

serum som innehåller ( n=78) och som inte innehåller HBsAg ( n=56).


Ris. 2a. HBe-positiva serumprover som innehåller HBsAg i testsystemet "DS-ELISA-anti-HBe".

Fig. 2b. Funktioner för fördelningen av OD för anti-HBe-positiva serumprover som inte innehåller HBsAg i testsystemet "DS-ELISA-anti-HBe".
De optiska densiteterna för 87 % av anti-HBe-positiva serumprover som inte innehöll HBsAg varierade från 0,41 till 0,81 (Figur 2b). Dessutom hade endast 14 % av anti-HBe-positiva serumprover innehållande HBsAg en OD i detta intervall (Figur 2a). Det är känt att i fasen av sen konvalescens, med negativ reaktivitet mot HBsAg, sker en gradvis minskning av antikroppstitrar mot HBeAg (Figur 2b). Därför är det möjligt att den dominerande koncentrationen av anti-HBe-positiva prover motsvarade en OD på mindre än 0,8.

De erhållna uppgifterna indikerar tillförlitligheten av separationen av positiva och

negativa blodserumprover, oavsett sjukdomsstadium. Känsligheten och specificiteten hos testsystemen "DS-ELISA-HBeAg" och "DS-ELISA-antiHBe" studerades i jämförelse med "Monolisa HBe"-testet (BIORAD, Frankrike) (tabell 1).

bord 1
Jämförande egenskaper för sensitivitet och specificitet

testsystemen DS-ELISA-HBeAg och DS-ELISA-antiHB

Index	Bestämning av HBeAg		Bestämning av antiHBe
	NPO "DS", DS-IFA-HBeAg	"BIO-RAD" "Monolisa HВe"	NPO "DS" DS-ELISA-antiHBe	"BIO-RAD"
Kvantitet forskat prover	67	67	32	32
Avslöjat positiv prover	47	47	16	16
Avslöjat negativ prover	20	20	16	16

Data som presenteras i tabell 1 visar 100% överensstämmelse mellan resultaten.

Det är känt att den kombinerade indikationen HBeAg och anti-HBe, särskilt deras kvantitativa bedömning, har ytterligare prognostisk betydelse. En snabb ökning av anti-HBe-titer kännetecknar ett aktivt humoralt immunsvar och eliminerar praktiskt taget hotet om kronisk sjukdom. Vi analyserade förändringar i HBeAg/anti-HBe-halten i blodserumprover från patienter med en klinisk diagnos av "akut viral hepatit B" (tabell 2).

Tabell 2
Dynamics of HBeAg/anti-HBe seroconversion hos patienter med HBV

Ämne sjuk	Blodsamlingsdag*	HBeAg	anti-HBe O.F./O.C.		Anti-HBc	anti- HBc IgM
	1	1,4+	2,1+	+	+	+
	12	0,5-	1,0+	+	+	+
	21	0,3-	1,3+	+	+	+
	1	1,2+	1,2+	+	+	+
	5	0,4-	1,0+	+	+	+
	13	0,2-	2,5+	+	+	+
	1	1,2+	0,6-	+	+	+
	21	0,2-	4,6+	+	+	+
	30	0,2-	9,7+	+	+	+
	1	2,1+	0,5-	+	+	+
	8	0,6-	1,1+	+	+	+
	28	0,3-	2,8+	+	+	+
	1	0,7-	2,2+	+	+	+
	8	0,3-	2,2+	+	+	+
	15	0,3-	2,8+	+	+	+
	38	0,2-	3,0+	+	+	+
6	1	1,1+	4,4+	+	+	+
	14	0,5-	3,8+	+	+	+

* från inläggning till sjukhus
Alla serumprover testades för närvaron av serologiska markörer

OGV: HBsAg, anti-HBc, anti-HBc IgM. Observationsperioden varierade från 13 till 38 dagar. Hos patienter nr 1, nr 2 och nr 6 detekterades anti-HBe mot bakgrund av en minskning av HBeAg-titern. Hos patienter nr 3 och nr 4 uppträdde anti-HBe efter att HBeAg försvunnit från blodserumet på dag 21 respektive 8. Analys av HBeAg-detektion i blodserumet hos patient nr 5 vid inläggning på sjukhuset visade ett negativt resultat. Samtidigt registrerades konvertering till anti-HBe redan första undersökningsdagen.

Alla försökspersoner visade en tendens till en ökning av titern av antikroppar mot HBeAg i

blodserum, vilket gör det möjligt att förutsäga gynnsam dynamik av klinisk

manifestationer av akut respiratoriskt syndrom och snabb återhämtning.

Studien av de nya testsystemen visade deras höga diagnostiska tillförlitlighet. Resultaten av jämförelsen av DS-ELISA-HBeAg och DS-ELISA-antiHBe visade 100 % överensstämmelse med Monolisa HBe-testet.

När man studerar serumprover från patienter med hepatit B i dynamik, tester

bekräftade hög sensitivitet och specificitet.

Den korta inkubationstiden för testproverna och konjugatet (1 timme) gör det möjligt att bestämma den korrekta taktiken för att utföra terapeutiska åtgärder på kortast möjliga tid. De skapade testsystemen är lätta att använda och ekonomiska (50 μl serum krävs för att bestämma HBeAg och 10 μl serum för att bestämma anti-HBe). Testernas höga kvalitetsegenskaper gör att de framgångsrikt kan användas för att förutsäga förloppet av den infektionsprocess och övervaka behandlingen av hepatit B.
LITTERATUR

1.Mayer K.P. Hepatit och konsekvenser av hepatit / K.P. Mayer. – M., GEOTAR, Medicin, 1999.- P.720

2.Onishchenko G.G. Spridning av viral hepatit som ett hot mot den nationella säkerheten / G.G. Onishchenko, L.A. Dementieva // Journal of Microbiology. –2003.-Nr 4.- S.93-99.

3.Sorinson S.N. Viral hepatit / S.N. Sorinson. - St. Petersburg, Teza, 1997.- 306 P.

4. Baumeister M. Hepatit B-virus e antigenspecifika epitoper och begränsningar av kommersiella anti-HВe-immunanalyser / M. Baumeister // Journal of Medical Virology.- 2000.-N 60.- R. 256-263.

5.Kane M. Globalt program för kontroll av hepatit B-infektion / M. Kane // Vaccin. – 1995.-N131(Suppl. 1).- R.47-6. Shunichi lörO. Hepatit B-virusstammar med mutationer i Core Promoter hos patienter med Fulminant Hepatit / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Annals of Internal Medicine. – 1995.- N122.- R.241-248.

7. Ou J.-N. Molecular biology of hepatitis B virus e antigen./ J.-N.Ou // Journal of Gastroenterology and Hepatology. – 1997.- Nr 12 (Suppl.1) – R. 178-187.

8.Tiollais P. Hepatit B-viruset. / P. Tiollais, C. Pourcel, A. Dejean // Nature. – 1985. – P.317, 489-495
Publicerad: J. “Clinical laboratory diagnostics” - 2005.-Nr 6-P.-34-37

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) kom in i praktisk medicins liv någonstans på 60-talet av förra seklet. Dess första uppgift var histologisk forskning för vetenskapliga ändamål, som gick ut på att söka och identifiera den antigena strukturen hos celler i en levande organism.

ELISA-metoden är baserad på interaktionen mellan specifika (AT) och relaterade antigener (AG) med bildandet av ett "antigen-antikropp"-komplex, som detekteras med hjälp av ett enzym. Detta faktum fick forskare att tro att metoden kan användas i diagnostiska syften för att identifiera specifika immunglobuliner av olika klasser som är involverade i immunsvaret på en viss infektion. Och det var ett genombrott inom klinisk laboratoriediagnostik!

Metoden började användas aktivt först i början av 80-talet, och då främst i specialiserade institutioner. De första immunoenzymanalysatorerna var utrustade med blodtransfusionscentra och stationer, infektionssjukdomar och venerologiska sjukhus, eftersom den formidabla AIDS, född på den afrikanska kontinenten, dök upp vid vår horisont och omedelbart anslöt sig till de "gamla" infektionerna, krävde omedelbara diagnostiska åtgärder och sökandet för terapeutiska läkemedel som påverkar honom.

Tillämpningsområde för ELISA-metoden

Möjligheterna med enzymimmunanalys är verkligen omfattande. Nu är det svårt att föreställa sig hur man kan klara sig utan sådan forskning, som används inom bokstavligen alla grenar av medicinen. Det verkar, vad kan ELISA göra inom onkologi? Det visar sig att det kan. Och mycket. Analysens förmåga att hitta markörer som är karakteristiska för vissa typer av maligna neoplasmer ligger till grund för tidig upptäckt av en tumör, när den ännu inte bestämts med någon annan metod på grund av dess ringa storlek.

Modern klinisk laboratoriediagnostik (CDL), förutom tumörmarkörer, har en betydande arsenal av ELISA-paneler och använder dem för att diagnostisera olika patologiska tillstånd (infektionsprocesser, hormonella störningar) och övervaka farmaceutiska läkemedel för att identifiera deras effekt på patientens kropp och förresten inte bara mänskligt. För närvarande används enzymimmunanalys flitigt inom veterinärtjänster, eftersom "våra småbröder" också är mottagliga för många sjukdomar, som de ibland lider mycket av.

Således kan ELISA, på grund av sin känslighet och specificitet, avgöra från ett blodprov taget från en ven:

• Hormonell status (sköldkörtel- och binjurehormoner, könshormoner);
• Närvaron av virala och bakteriella infektioner (HIV, B och C, klamydia, syfilis och, och, liksom många andra sjukdomar orsakade av patogena mikroorganismer);
• Spår av den vitala aktiviteten hos mikroorganismer som initierade den infektiösa processen, som framgångsrikt slutade och flyttade in i stadiet för att bilda ett immunsvar mot denna patogen. Sådana spår, det vill säga antikroppar, förblir i många fall cirkulerande i blodet livet ut och skyddar därigenom en person från återinfektion.

Vad är kärnan i ELISA?

Enzymimmunanalysmetoden gör det möjligt att bestämma inte bara närvaron av själva patogenen (kvalitativ analys), utan också dess kvantitativa innehåll i patientens blodserum.

Den virala eller bakteriella dosen påverkar avsevärt förloppet av den infektiösa processen och dess resultat, därför spelar kvantitativ analys en viktig roll vid diagnos och behandling av sjukdomar i olika former och stadier.

Men eftersom vi känner till enzymimmunoanalysstudier som ELISA-metoden, tänker vi inte ens på hur den lyckas täcka ett så brett spektrum av mikroorganismer som bor på vår planet, av vilka många utgör ett direkt hot mot människors och djurs hälsa och liv. Men faktum är att ELISA har många alternativ (icke-konkurrenskraftiga och konkurrenskraftiga - direkta och indirekta), som var och en löser sitt eget problem och därmed möjliggör en riktad sökning.

För att identifiera immunglobuliner av en eller annan klass används en traditionell 96-brunnars polystyrenpanel (platta), i vars brunnar sorberade rekombinanta proteiner koncentreras i den fasta fasen. Antikroppar eller antigener som kommer in i brunnen med blodserum hittar ett "bekant" föremål och bildar ett komplex med det (AG - AT), som, fixerat av ett enzymkonjugat, kommer att manifesteras av en förändring i brunnens färg när läsa resultaten.

Enzymimmunanalys utförs med testsystem av en viss specificitet, tillverkade i speciella laboratorier och utrustade med alla nödvändiga reagerande komponenter. Forskning kan utföras med hjälp av tvättmaskiner (”tvättmaskiner”) och avläsningsspektrofotometrar, vilket mestadels involverar manuellt arbete. På helautomatiska maskiner, som befriar laboratorieassistenten från monoton instillation, tvättning och andra rutinuppgifter, är det naturligtvis snabbare och bekvämare att arbeta, men alla laboratorier har inte råd med sådan lyx och fortsätter att arbeta på gammaldags sätt - på halvautomatiska maskiner.

Tolkningen av ELISA-resultat ligger inom laboratoriediagnostisk läkares kompetens och den inneboende egenskapen hos nästan alla immunkemiska reaktioner att ge falskt positiva eller falskt negativa svar måste också beaktas.

Video: modern enzymimmunanalys

ELISA-resultat med användning av exemplet med syfilis

Enzymimmunanalys är lämplig för att identifiera alla former och används dessutom i screeningstudier. För att utföra analysen används patientens venösa blod taget på fastande mage. Arbetet använder tabletter med en viss specificitet (AB klass A, M, G) eller totala antikroppar.

Med tanke på att antikroppar i syfilis produceras i en specifik sekvens kan ELISA enkelt svara på frågan om när infektionen inträffade och i vilket skede processen är, och tolkningen av de erhållna resultaten kan presenteras i följande form:

• IgM indikerar varaktigheten av den infektiösa processen (kan förekomma under exacerbation av kroniska inflammatoriska sjukdomar);
• IgA uppger att infektionen inträffade för mer än en månad sedan;
• IgG indikerar att infektionen är i full gång eller att behandling nyligen genomförts, vilket enkelt avgörs genom att ta en anamnes.

När man testar för syfilis kommer negativa brunnar (och den negativa kontrollen) att förbli färglösa, medan positiva brunnar (och den positiva kontrollen) kommer att visa en klar gul färg på grund av färgförändringen av kromogenen som tillsattes under testet. Färgintensiteten sammanfaller dock inte alltid med kontrollen, det vill säga den kan vara något blekare eller något gulaktig. Dessa är tveksamma resultat, som i regel är föremål för omprövning med obligatorisk hänsyn till de kvantitativa indikatorerna som erhålls på spektrofotometern, men i allmänhet är färgen direkt proportionell mot antalet immunkomplex (associerade Ags och ATs) .

Den mest spännande av enzymimmunoanalyserna är HIV ELISA

Analyser är kanske mer intressanta än andra för en bred befolkningsgrupp, eftersom det fortfarande är omöjligt att med tillförsikt säga att många sociala problem har försvunnit (prostitution, drogberoende, etc.). Tyvärr påverkar hiv inte bara dessa skikt av det mänskliga samhället, du kan bli smittad under olika omständigheter som inte är relaterade till sexuell omoral eller droganvändning. Men om det finns ett behov av ett hiv-test ska du inte vara rädd för att alla runt omkring dig ska veta om ditt besök på ett sådant laboratorium. Nu skyddas hiv-smittade personer enligt lag, och de som tvivlar kan vända sig till anonyma kontor där de kan lösa problemet utan rädsla för publicitet och fördömande.

Enzymimmunanalysmetoden som används för att diagnostisera HIV-infektion är en av de viktigaste standardstudierna, som dock kräver speciella förhållanden, eftersom ämnet är mycket känsligt.

Det är vettigt att utföra HIV ELISA efter sexuell kontakt, blodtransfusion, andra medicinska procedurer som tyder på infektion och i slutet av inkubationsperioden ("seronegativt fönster"), men det bör komma ihåg att denna tidsperiod inte är permanent. Det kan sluta på 14-30 dagar, eller det kan vara upp till sex månader, så medelvärdet anses vara ett intervall från 45 till 90 dagar. Blod doneras för hiv på samma sätt som för andra infektioner - från en ven på fastande mage. Resultaten kommer att vara klara beroende på ackumuleringen av material i laboratoriet och dess arbetsbelastning (från 2 till 10 dagar), även om oftast laboratorier ger svar samma dag eller nästa.

Vad kan du förvänta dig av dina hiv-resultat?

ELISA för HIV-infektion upptäcker antikroppar mot två typer av viruset: HIV-1 (vanligare i Ryssland och andra länder i Europa och Asien) och HIV-2 (vanligare i Västafrika).

HIV-ELISA:s uppgift är att söka efter klass G-antikroppar, som detekteras på alla testsystem, men vid en senare period, och klass A- och M-antikroppar, detekterade på nya generationens rekombinanta testkit, som gör det möjligt att hitta antikroppar. i de tidigaste stadierna (inkubationsperiod - "seronegativt fönster"). Du kan förvänta dig följande svar från ELISA:

Primärt positivt resultat: blodet måste testas igen med ett testsystem av samma typ, men om möjligt av en annan serie och av en annan person (laboratorieassistent);

Upprepad (+) innebär en ny blodtagning från patienten med dess undersökning liknande den primära analysen;

Ett annat positivt resultat är föremål för referensanalys, som använder mycket specifika testkit (2-3 st.);

Ett positivt resultat i båda (eller tre) systemen skickas för immunoblotting (samma ELISA, men utförs individuellt med testkit med särskilt hög specificitet).

Slutsatsen om HIV-infektion görs endast på basis av immunblotting. Ett samtal förs med den smittade personen i full konfidentialitet. Avslöjande av medicinska hemligheter i Ryssland, såväl som i andra länder, är föremål för straffrättsligt straff.

Tester för klamydia och cytomegalovirus med hjälp av enzymimmunoanalysmetoden har också vunnit särskild popularitet, på grund av att de gör det möjligt att bestämma infektionstidpunkten, sjukdomsstadiet och effektiviteten av behandlingsåtgärder.

Under implementeringen kan man också observera utseendet av antikroppar av olika klasser i olika faser av det patologiska tillståndet orsakat av ett smittämne:

• IgM kan detekteras så tidigt som sju dagar efter infektion;
• IgA indikerar att infektionen har levt i kroppen i mer än en månad;
• IgG bekräftar diagnosen klamydia och hjälper till att övervaka behandlingen och fastställa dess effektivitet. Det bör noteras att klass G-antikroppar kvarstår och cirkulerar i kroppen oavsett sjukdomens varaktighet, därför måste du, för att korrekt tolka analysen, ta hänsyn till referensvärdena (normer), som förresten , är olika för varje CDL: med hänsyn till testsystemets märke och specificiteten hos de reagenser som ingår i uppsättningen. Normalvärdena anges i formuläret bredvid ELISA-resultatet.

När det gäller , är detta något annorlunda: klass M-antikroppar uppträder efter ungefär en och en halv månad, det vill säga resultatet (IgM+) blir positivt i fasen av primär infektion eller under reaktivering av en latent infektion och förblir så från 4 månader till sex månader.

Närvaron av klass G-antikroppar är karakteristisk för uppkomsten av en primär akut infektion eller återinfektion. Analysen anger att viruset finns, men ger ingen information om vilket stadium den infektionsprocess befinner sig i. Samtidigt orsakar bestämning av den normala IgG-titern också svårigheter, eftersom det helt beror på immunstatusen hos en viss person, vilket dock fastställs genom identifiering av immunglobuliner av klass G. Med tanke på detta beteende hos antikroppar, vid diagnostisering av CMV, finns det ett behov för att bedöma förmågan hos klass G-antikroppar att interagera med CMV, för att senare "neutralisera" det (AT-aviditet). I det inledande skedet av sjukdomen binder IgG mycket dåligt till virala antigener (låg aviditet) och börjar först då visa aktivitet, därför kan vi prata om en ökning av aviditeten av antikroppar.

Vi kan prata mycket om fördelarna med enzymimmunanalys, eftersom denna metod har lyckats lösa många diagnostiska problem med endast venöst blod. Det behövs inga långa väntan, bekymmer och problem med att samla in material för forskning. Dessutom fortsätter testsystemen för ELISA att förbättras och dagen är inte långt kvar då testet kommer att ge ett 100% tillförlitligt resultat.

Video: utbildningsfilm från Moscow State Medical University uppkallad efter. Sechenov om grunderna i ELISA

Pris på förfrågan

Du kan lägga till en vara i din varukorg genom att ange antal

Tillverkare: Diagnostiksystem

Land Ryssland

Enhet Mått: inställt

Typ av förpackning: kartong

Artikel: L-1823

Beskrivning

Enzymimmunanalystestsystem för att detektera antikroppar av klasserna G, M och A mot Treponema pallidum (T. pallidum) i humant blodserum (plasma) och cerebrospinalvätska i syfte att diagnostisera syfilis, en komplett uppsättning reagenser för 96x2-bestämningar, lämpliga för manuella metoder och automatiska testanalysatorer. Metoden är baserad på "fällan"-principen, som består i det faktum att specifika antitreponemala antikroppar av alla klasser som finns i provet binder samtidigt till rekombinanta antigener - analoger av immundominanta proteiner av T. pallidum, fixerade i brunnarna på plattan, och till samma antigener märkta med peroxidaspepparrot, när man gemensamt inkuberar prover av humant blodserum (plasma) eller cerebrospinalvätska och konjugatet. En förändring i färgen på den substrat-kromogena blandningen som innehåller TMB när den tillsätts till brunnarna på plattan indikerar närvaron av specifika antikroppar mot Treponema pallidum i testproverna

Funktionellt syfte

Detektion av antikroppar mot Treponema pallidum spelar en viktig roll vid diagnosen syfilis, eftersom T. pallidum inte kan isoleras från cellodling, och prover för direkt bestämning av patogenen är ofta otillgängliga i latenta och sena stadier av sjukdomen. Vid serodiagnos av syfilis används icke-treponemala (RMP, RPR, VDRL) och treponemala (RPGA, RIF, ELISA) tester. Enzymimmunoanalystester för att bestämma totala antikroppar används för massscreening av donatorblod och för att diagnostisera syfilis som en del av ett komplex av serologiska tester. Efter framgångsrik terapi kvarstår reaktiviteten hos treponemala tester i de flesta fall

Specifikationer

Ange innehåll:
1. Polystyren 96-brunnars hopfällbar platta - 2 st.,
2. Konjugatet är en transparent gul vätska,
3. Positiv kontroll - transparent röd vätska,
4. Negativ kontroll - transparent grön vätska,
5. Tvättlösning, koncentrat, pH från 6,9 till 7,6,
6. TMB är en transparent färglös vätska,
7. Substratlösning - transparent färglös vätska, pH ~4,2.
8. Stoppa reagens (0,2M),
9. Bruksanvisning och kvalitetscertifikat.
Lagringsförhållanden: vid en temperatur på +2...8°C är frysning oacceptabelt.
Hållbarheten är 15 månader från det produktionsdatum som anges på kitets etikett.
Överensstämmelse med kraven i TU 9398-182-05941003-2010.
Registrerad hos Roszdravnadzor.