ELISA adalah metode yang dapat diandalkan untuk mendiagnosis HIV. Bagaimana dan di mana mengikuti tes ELISA. Diagnostik ELISA: apa intisari, penentuan antibodi, bagaimana cara melakukannya dan untuk penyakit apa efektif? Enzim immunoassay yang paling menarik adalah ELISA HIV

HIV adalah momok generasi kita. Metode apa yang ada untuk mendiagnosis HIV, informasi mendalam tentang tes ELISA untuk HIV. Bagaimana cara mengambilnya, bagaimana menafsirkan hasil analisisnya.

Human immunodeficiency virus adalah salah satu infeksi yang paling mengerikan bagi generasi kita.

HIV berdampak buruk pada sistem kekebalan tubuh kita, dan jika perkembangan penyakit ini tidak dihentikan tepat waktu, HIV dapat berubah menjadi sindrom imunodefisiensi didapat (acquired immunodeficiency syndrome). HIV menular melalui kontak langsung antar pasangan saat berhubungan seksual melalui alat kelamin pria dan wanita. Penyebab infeksi lainnya mungkin adalah virus yang memasuki aliran darah. Hal ini terjadi karena penggunaan alat yang tidak steril, transfusi darah yang terkontaminasi, dan bahkan lintas generasi: kepada anak dari ibu yang terinfeksi saat menyusui.

Hingga saat ini, para ilmuwan di seluruh dunia sedang memutar otak untuk menciptakan obat generasi baru yang dapat menyembuhkan AIDS, namun meskipun kemajuan ilmu pengetahuan pesat, virus human immunodeficiency virus terus menyebar ke seluruh planet.

ELISA – metode untuk mendiagnosis HIV

Para ilmuwan generasi abad ke-20 telah mengembangkan beberapa metode untuk mendiagnosis HIV, yang paling penting adalah enzim immunoassay. ELISA HIV mulai dilakukan relatif baru - pada awal tahun sembilan puluhan. Seiring waktu, metode ini disempurnakan dan memperoleh detail baru. Sekarang keandalan metode ELISA adalah salah satu yang tertinggi - sekitar 98%. Oleh karena itu, metode ini semakin sering digunakan.

ELISA adalah tes pertama yang ditemui pasien saat melakukan tes HIV. Metode ELISA menentukan keberadaan antibodi dalam darah. Jika tes menemukan adanya antibodi dalam darah, maka virus tersebut ada. Namun informasi mengenai tes ini harus didukung dengan tes lain, seperti imunobloting (IB) dan metode generasi terbaru – reaksi berantai polimerase (PCR).

Antibodi adalah senyawa protein khusus yang diproduksi oleh sel plasma sebagai reaksi adanya infeksi yang masuk ke dalam tubuh (antibodi mulai terbentuk 1-2 bulan setelah infeksi).

Penyebab HIV

Dokter Anda akan memberi Anda rujukan untuk tes jika Anda pernah melakukan kontak dengan seseorang yang terinfeksi HIV atau ada risiko infeksi. Generasi orang yang berisiko tertular HIV meliputi:

• menjalani pengobatan suntikan selama sebulan;
• melakukan hubungan seksual tanpa alat perlindungan khusus;
• pembawa infeksi yang ditularkan melalui hubungan seksual;
• pasien setelah menjalani transfusi darah atau suntikan untuk menemukan penyebab pembekuan darah pada tahun delapan puluhan.

Jika Anda ragu dengan status HIV Anda dan kekhawatiran akan kemungkinan tertular, disarankan agar Anda segera mencari bantuan dari institusi medis mana pun di negara kita untuk melakukan pemeriksaan HIV secara menyeluruh. Hasil tes diterima dalam waktu satu bulan. Orang yang berisiko terkena HIV dianjurkan untuk dites setiap 4 bulan.

Bagaimana cara menjalani tes

Tidak diperlukan persiapan khusus untuk melakukan tes darah HIV, tetapi lebih baik mengikuti aturan paling sederhana:

• Lebih baik tidak makan di malam hari, tetapi mengikuti tes dengan perut kosong di pagi hari;
• Tidak disarankan membebani tubuh dengan pekerjaan fisik;
• makan makanan sehat, pantang rokok dan alkohol untuk sementara waktu;
• Untuk mengecualikan hasil tes yang salah, Anda sebaiknya tidak melakukan tes setelah mengobati penyakit serius.

Infeksi virus imunodefisiensi manusia adalah diagnosis yang serius. Kesalahan dalam diagnosis dapat menyebabkan konsekuensi yang berbahaya. Tes ELISA untuk HIV adalah metode penelitian yang paling mudah diakses, namun tidak informatif di semua kasus.

ELISA – uji imunosorben terkait-enzim. Tujuan dari metode ELISA adalah untuk mendeteksi antibodi terhadap virus imunodefisiensi pada bahan biologis. Dengan menggunakan metode ini, Anda tidak dapat melacak keberadaan virus itu sendiri di dalam cairan, tetapi hanya antibodi yang dihasilkan sebagai respons terhadap keberadaan virus tersebut. Immunoassay enzim banyak digunakan dalam diagnosis PMS. Ini membantu untuk mengidentifikasi penyakit menular seksual.

Ada beberapa jenis ELISA: versi langsung, versi tidak langsung, metode sandwich. Bagaimanapun, teknik ini didasarkan pada penentuan keberadaan antibodi, yang berfungsi sebagai indikator penetrasi zat asing. Untuk mengidentifikasi “tanda” ini, komponen biologis diolah dengan enzim.

Immunoassay enzim menentukan antibodi dengan akurasi 96-98%, kesalahannya tidak signifikan. Itu adalah 2 – 4%.

ELISA – metode untuk mendiagnosis HIV

Tes ELISA untuk HIV adalah diagnosis tahap pertama. Antigen virus imunodefisiensi adalah protein p24, p15, p17, p31 dan glikoprotein gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.

Untuk mendeteksi protein virus, sampel darah diambil dari vena. Sampel yang dikirim untuk tes darah ELISA diperlakukan dengan reagen enzim immunoassay. Serum diisolasi dari darah. Jika selama penelitian ditemukan, berarti virus tersebut sudah ada di dalam darah.

Darah disumbangkan secara ketat saat perut kosong. Tidak dianjurkan makan makanan berlemak atau minum alkohol 2 hari sebelum tes. Anda harus berhenti minum obat antivirus selama 14 hari.

Keuntungan dari metode ini:

• biaya yang relatif rendah;
• stabilitas reagen yang tinggi;
• sensitivitas tinggi;
• durasi pendek;
• pengaruh minimal dari faktor manusia.

Sistem pengujian ELISA modern diproduksi sesuai dengan standar internasional. Ini meningkatkan keakuratan metode ini.

Immunoassay enzim tidak selalu memberikan hasil yang dapat diandalkan. Setelah virus memasuki aliran darah, tahap perkembangan laten (tersembunyi) dimulai. Periode sebelum virus mulai berkembang biak dan antibodi belum terbentuk disebut “waktu jendela seronegatif”. Tidak ada gunanya melakukan ELISA pada tahap ini. Jika terjadi infeksi, akibatnya adalah. Seberapa cepat virus muncul tergantung pada berapa banyak sel berbahaya yang masuk ke dalam tubuh. Dengan hubungan seksual tanpa kondom atau transfusi darah yang terkontaminasi, periode ini akan sangat singkat.

Untuk keandalan ELISA HIV yang tinggi, tes dilakukan tiga kali. Batas waktu pengambilan tes ELISA untuk human immunodeficiency virus:

• 6 minggu setelah kemungkinan kontak,
• dalam 3 bulan,
• enam bulan kemudian.

ELISA generasi ke-4 untuk HIV merupakan metode yang paling informatif pada tahap awal infeksi. Ini dapat dilakukan paling cepat 1 bulan setelah dugaan infeksi. Tes ini mahal dibandingkan dengan analog generasi ke-3. Oleh karena itu, di institusi medis publik, ini digunakan sebagai metode diagnostik tambahan. Tes 3 dilakukan secara gratis, jika berdasarkan hasil tidak dapat diberikan jawaban pasti, pasien dirujuk ke ELISA generasi ke-4.

Penting! Segera setelah infeksi, seseorang menjadi menular. Dia berbahaya bagi orang lain, bahkan ketika dia belum mengetahui diagnosisnya!

Jika ELISA menunjukkan antibodi terhadap antigen HIV, penelitian tambahan harus dilakukan. Ini termasuk . Keandalan metode ini adalah 80%. PCR menguji darah, air mani dan keputihan. Cairan biologis dipecah dalam reaktor medis dan kemudian diolah dengan enzim. Hasilnya, diperoleh data konsentrasi sel HIV dalam media cair. Karena kesalahannya besar (20%), jika hasilnya positif, dilakukan imunobloting tambahan.

Tahap diagnosis selanjutnya adalah tes Combo (atau immunoblotting). Ini adalah tes yang sangat sensitif (keyakinan 98%), yang dilakukan jika hasil ELISA tidak jelas setelah 6 bulan.

Menguraikan hasil ELISA

Waktu dekripsi berkisar antara 24 hingga 48 jam. Jika perlu mendapatkan informasi segera (diperlukan pembedahan), decoding dilakukan dalam waktu 2 jam. Pusat kesehatan provinsi tidak selalu memiliki reagen yang diperlukan. Sampel diambil di tempat permohonan, kemudian dipindahkan ke pusat regional. Dalam keadaan seperti itu, hasilnya bisa diketahui dalam 1-2 minggu.

Hasil dari immunoassay enzim dapat positif atau negatif; Tidak ada pilihan lain.

Sekalipun hasil ELISA awal dan ulang positif, pasien tidak dapat dikenali sebagai terinfeksi HIV. Tunduk pada kesalahan. Alasan hasil positif palsu:

• penyakit kronis;
• penyakit menular jangka panjang;
• kehamilan.

Oleh karena itu, hasil analisis harus diperjelas dengan penelitian tambahan.

Jika immunoblotting HIV positif (reaktif), maka orang tersebut dianggap terinfeksi HIV, artinya sehat.

Seiring waktu, sel-sel virus beradaptasi dengan obat yang diresepkan. Untuk pengendaliannya, tes ELISA diulangi secara berkala.

Terkadang imunoblotting menunjukkan hasil negatif palsu. Sangat jarang terjadi penyakit immunodeficiency virus selama 6 bulan (atau lebih). Hal ini dimungkinkan jika sejumlah kecil sel virus masuk ke dalam darah. Dalam 0,5% dari total jumlah kasus, infeksi baru dapat didiagnosis setelah satu tahun. Pada 99,5%, dalam waktu enam bulan setelah infeksi, ELISA akan memberikan hasil yang dapat diandalkan.

Bahkan dengan penelitian yang sangat akurat, masih ada kemungkinan kesalahan sebesar 2%. Kita tidak boleh melupakan faktor manusia. Untuk menghilangkan kemungkinan kesalahan, pengujian dapat dilakukan di 2 institusi berbeda.

S.N. IGOLKINA, V.F. PUZYREV, L.G. ZININA, N.M. DENISOVA, A.N. BURKOV,

AP RITE, TI. ULANOVA
LLC "Asosiasi Penelitian dan Produksi "Sistem Diagnostik",

Nizhny Novgorod
SISTEM UJI IMUNO ELISA “DS-ELISA-HBeAg” dan “DS-ELISA-anti-HBe” UNTUK DIAGNOSIS KHUSUS DAN PREDIKSI HASIL HEPATITIS B AKUT DAN KRONIS
Hepatitis B merupakan penyakit infeksi virus yang ditandai dengan gejala yang parah

kerusakan hati inflamasi. Sekitar 1% kematian terjadi di

periode akut penyakit, pada 4-10% kasus terjadi transformasi menjadi kronis

proses dengan kemungkinan pembentukan sirosis hati berikutnya dan primer

hepatokarsinoma.

Meskipun ada kecenderungan penurunan kejadian hepatitis B akut, kelompok pasien yang secara epidemiologis berbahaya yang didiagnosis dengan hepatitis virus kronis untuk pertama kalinya, serta kelompok pembawa agen penyebab penyakit, terus terbentuk. . Prognosis yang kurang baik masih terjadi karena tingginya kejadian hepatitis B di kalangan penduduk usia subur, serta di kalangan remaja.

Oleh karena itu, permasalahan pengobatan, pencegahan dan diagnosis hepatitis B menjadi sangat relevan saat ini.Saat ini, metode uji imunosorben terkait enzim banyak digunakan untuk mendeteksi penanda infeksi ini. Penanda serologis HBV yang paling penting meliputi e-antigen (HBeAg) dan antibodi terhadap e-antigen (anti-HBe). HBeAg dikaitkan dengan kontaminasi darah yang tinggi, menunjukkan replikasi aktif virus hepatitis B (HBV). Telah ditetapkan bahwa titer HBeAg yang tinggi berhubungan dengan aktivitas DNA polimerase yang tinggi dan selalu dikombinasikan dengan deteksi partikel Dane yang lengkap. Ketika serum yang mengandung HBeAg memasuki darah orang sehat, risiko infeksi jauh lebih tinggi dibandingkan setelah terjadinya serokonversi.

Pada hepatitis B akut, HBeAg terdeteksi dalam darah pada tahap awal proses infeksi, sudah pada manifestasi klinis pertama penyakit, tertinggal seminggu dari munculnya HBsAg. Hepatitis B akut (AHB) dalam perjalanan siklik ditandai dengan sirkulasi HBeAg jangka pendek. Segera, pada 2-3 minggu periode ikterik, anti-HBe muncul, yang memungkinkan untuk memprediksi hasil penyakit yang baik.

Anti-HBe bersirkulasi dalam darah selama 2-5 tahun, lebih jarang selama beberapa bulan.

Timbulnya serokonversi HBeAg-antiHBe menandai penurunan aktivitas yang tajam

proses infeksi. Deteksi HBeAg dalam darah pasien setelah 2 bulan sakit menunjukkan proses patologis yang kronis. Dalam kasus ini, anti-HBe dapat terbentuk bertahun-tahun setelah munculnya antibodi terhadap HBcAg atau mungkin tidak terdeteksi sama sekali.

Munculnya anti-HBe mungkin memiliki nilai prognosis yang buruk

periode akut HBV dalam bentuk parah, yang berhubungan dengan mutasi pada zona pra-inti dengan

pembentukan strain “e-” HBV.

Tujuan dari pekerjaan ini adalah untuk mengembangkan yang sangat sensitif dan spesifik

sistem uji immunoassay enzim untuk mendeteksi HBeAg dan anti-HBe serta penilaian karakteristik utamanya.

Bahan dan metode.

1. Sistem uji imunosorben enzim “DS-ELISA-HBeAg”. Awal tes yang valid

adalah antibodi kambing poliklonal terhadap HBeAg rekombinan, diproduksi oleh NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod, teradsorpsi ke fase padat, dan konjugat, yaitu antibodi kambing poliklonal terhadap HBeAg rekombinan, diberi label dengan horseradish peroxidase, diproduksi oleh NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod. Skema analisisnya adalah “sandwich” satu tahap, total waktu reaksi adalah 1,5 jam. Sampel serum dianalisis tanpa diencerkan.

2. Sistem uji imunosorben enzim “DS-ELISA-anti-HBe”. Dasar dari tes ini adalah

HBeAg rekombinan (AHBV 102), diproduksi oleh NPO Diagnostic Systems,

Nizhny Novgorod, diserap pada fase padat dan konjugat anti-IgG dengan peroksidase lobak, diproduksi oleh Sorbent Service, Moskow. Reaksi berlangsung dalam dua tahap. Serum uji ditambahkan ke antigen yang diimobilisasi dalam pengenceran 1/10 dan, setelah inkubasi dan penghilangan komponen yang tidak terikat, imunokompleks spesifik dideteksi menggunakan antibodi monoklonal tikus terhadap IgG manusia yang diberi label dengan horseradish peroxidase.

3. Untuk mengevaluasi sistem pengujian yang dikembangkan, 2178 sampel serum digunakan

darah. Dari jumlah tersebut, 480 merupakan sampel serum dari donor sehat. 1680 sampel mewakili

adalah sampel serum darah yang mengandung berbagai penanda virus hepatitis B.

Delapan belas sampel diperoleh dari waktu ke waktu dari pasien dengan diagnosis klinis virus hepatitis B akut. Sebelumnya, seluruh sampel diuji keberadaan HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc menggunakan sistem pengujian yang diproduksi oleh NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod: “ELISA-HBsAg/m”, “DS-ELISA-HBeAg”, “ DS-ELISA-anti-HBe", "ELISA-anti-HBc".

4. Penilaian komparatif terhadap sistem pengujian yang dikembangkan dilakukan dengan menggunakan

obat komersial "Monolisa HBe", diproduksi oleh BIO-RAD, Perancis;

Hasil dan Diskusi. NPO "Sistem Diagnostik" telah mengembangkan 2 kit diagnostik baru: "DS-ELISA-HBeAg" dan "DS-ELISA-anti-HBe". Sistem pengujian “DS-ELISA-HBeAg” dirancang untuk mendeteksi e-antigen virus hepatitis B dalam serum manusia (plasma) menggunakan uji imunosorben terkait-enzim dan dapat digunakan untuk diagnosis spesifik, menentukan aktivitas virus menular. proses, memprediksi tingkat keparahan dan hasil dari hepatitis B.

Sistem pengujian “DS-ELISA-anti-HBe” dirancang untuk mendeteksi antibodi IgG terhadap e-antigen virus hepatitis B dalam serum darah manusia (plasma) dan dapat

digunakan dalam memprediksi jalannya proses infeksi dan memantau terapi hepatitis B.

Untuk mempelajari kekhususan tes baru, distribusinya dinilai

kepadatan optik (OD) sampel serum darah mengandung dan tidak mengandung

HBeAg atau anti HBe. Sampel serum darah dari donor sehat dan sampel serum darah yang dipilih untuk berbagai penanda virus hepatitis B digunakan.

stasiun transfusi darah. Hasil penelitian menunjukkan adanya pemisahan yang signifikan pada kedua populasi. Nilai OD sampel serum yang tidak mengandung HBeAg berkisar antara 0,011 hingga 0,111, dan puncak utama sampel serum yang mengandung HBeAg berkisar antara 2,186 hingga 3,186 (Gambar 1a).

Gambar 1a. Distribusi OD sampel serum yang mengandung dan tidak mengandung HBeAg pada sistem pengujian “DS-ELISA-HBeAg”
Puncak yang sesuai dengan kelompok serum dengan OD rendah (0,3-0,6) mungkin terdiri dari sampel serum yang dikumpulkan pada tahap awal proses infeksi.

Selama masa inkubasi, HBsAg dan HBeAg secara alami terdaftar dalam darah pasien, yang menegaskan potensi bahaya epidemiologisnya.

Kisaran kepadatan optik sampel serum tidak mengandung anti-HBe

berada pada kisaran 0,002 hingga 0,122, dan OD puncak utama sampel serum yang mengandung anti-HBe berada pada kisaran 2,431 hingga 3,231 (Gambar 1b).

Beras. 1b. Distribusi OD sampel serum yang mengandung dan tidak mengandung anti-HBe pada sistem pengujian “DS-ELISA-anti-HBeAg”
Fitur distribusi OD sampel anti-HBe positif dipelajari

serum yang mengandung ( N=78) dan tidak mengandung HBsAg ( N=56).


Beras. 2a. Sampel serum HBe positif yang mengandung HBsAg dalam sistem pengujian “DS-ELISA-anti-HBe”.

Gambar.2b. Fitur distribusi OD sampel serum anti-HBe-positif yang tidak mengandung HBsAg dalam sistem pengujian “DS-ELISA-anti-HBe”.
Kepadatan optik 87% sampel serum anti-HBe-positif yang tidak mengandung HBsAg berkisar antara 0,41 hingga 0,81 (Gambar 2b). Selain itu, hanya 14% sampel serum anti-HBe-positif yang mengandung HBsAg yang memiliki OD dalam kisaran ini (Gambar 2a). Diketahui bahwa pada fase pemulihan akhir, dengan reaktivitas negatif terhadap HBsAg, terjadi penurunan titer antibodi terhadap HBeAg secara bertahap (Gambar 2b). Oleh karena itu, ada kemungkinan bahwa konsentrasi dominan sampel anti-HBe-positif berhubungan dengan OD kurang dari 0,8.

Data yang diperoleh menunjukkan keandalan pemisahan positif dan

sampel serum darah negatif, apa pun stadium penyakitnya. Sensitivitas dan spesifisitas sistem uji “DS-ELISA-HBeAg” dan “DS-ELISA-antiHBe” dipelajari dibandingkan dengan uji “Monolisa HBe” (BIORAD, Prancis) (Tabel 1).

Tabel 1
Karakteristik komparatif sensitivitas dan spesifisitas

sistem uji DS-ELISA-HBeAg dan DS-ELISA-antiHB

Indeks	Penentuan HBeAg		Penentuan antiHBe
	NPO "DS", DS-IFA-HBeAg	"BIO-RAD" "Monolisa HВe"	NPO "DS" DS-ELISA-antiHBe	"BIO-RAD"
Kuantitas diteliti sampel	67	67	32	32
Terungkap positif sampel	47	47	16	16
Terungkap negatif sampel	20	20	16	16

Data yang disajikan pada Tabel 1 menunjukkan hasil yang 100% setuju.

Diketahui bahwa kombinasi indikasi HBeAg dan anti-HBe, terutama penilaian kuantitatifnya, mempunyai signifikansi prognostik tambahan. Peningkatan titer anti-HBe yang cepat menandakan respon imun humoral yang aktif dan menghilangkan ancaman kronik. Kami menganalisis perubahan kandungan HBeAg/anti-HBe dalam sampel serum darah dari pasien dengan diagnosis klinis “virus hepatitis B akut” (Tabel 2).

Meja 2
Dinamika serokonversi HBeAg/anti-HBe pada pasien HBV

Subjek sakit	Hari pengambilan darah*	HBeAg	anti-HBe O.F./O.C.		Anti-HBc	Anti- IgM HBc
	1	1,4+	2,1+	+	+	+
	12	0,5-	1,0+	+	+	+
	21	0,3-	1,3+	+	+	+
	1	1,2+	1,2+	+	+	+
	5	0,4-	1,0+	+	+	+
	13	0,2-	2,5+	+	+	+
	1	1,2+	0,6-	+	+	+
	21	0,2-	4,6+	+	+	+
	30	0,2-	9,7+	+	+	+
	1	2,1+	0,5-	+	+	+
	8	0,6-	1,1+	+	+	+
	28	0,3-	2,8+	+	+	+
	1	0,7-	2,2+	+	+	+
	8	0,3-	2,2+	+	+	+
	15	0,3-	2,8+	+	+	+
	38	0,2-	3,0+	+	+	+
6	1	1,1+	4,4+	+	+	+
	14	0,5-	3,8+	+	+	+

* dari masuk ke rumah sakit
Semua sampel serum diuji keberadaan penanda serologis

OGV: HBsAg, anti-HBc, IgM anti-HBc. Periode pengamatan berkisar antara 13 hingga 38 hari. Pada pasien No. 1, No. 2 dan No. 6, anti-HBe terdeteksi dengan latar belakang penurunan titer HBeAg. Pada pasien No. 3 dan No. 4, anti-HBe muncul setelah HBeAg menghilang dari serum darah masing-masing pada hari ke 21 dan 8. Analisis deteksi HBeAg pada serum darah pasien No. 5 saat masuk rumah sakit menunjukkan hasil negatif. Sedangkan konversi ke anti HBe sudah tercatat pada hari pertama pemeriksaan.

Semua subjek menunjukkan kecenderungan peningkatan titer antibodi terhadap HBeAg B

serum darah, yang memungkinkan untuk memprediksi dinamika klinis yang menguntungkan

manifestasi sindrom pernafasan akut dan pemulihan yang cepat.

Studi terhadap sistem pengujian baru menunjukkan keandalan diagnostiknya yang tinggi. Hasil perbandingan DS-ELISA-HBeAg dan DS-ELISA-antiHBe menunjukkan kesesuaian 100% dengan uji Monolisa HBe.

Saat mempelajari sampel serum dari pasien hepatitis B secara dinamis, tes

mengkonfirmasi sensitivitas dan spesifisitas yang tinggi.

Waktu inkubasi sampel uji dan konjugat yang singkat (1 jam) memungkinkan untuk menentukan taktik yang tepat untuk melakukan tindakan terapeutik dalam waktu sesingkat-singkatnya. Sistem pengujian yang dibuat mudah digunakan dan ekonomis (diperlukan 50 μl serum untuk menentukan HBeAg dan 10 μl serum untuk menentukan anti-HBe). Karakteristik tes yang berkualitas tinggi memungkinkan tes tersebut berhasil digunakan dalam memprediksi jalannya proses infeksi dan memantau terapi hepatitis B.
LITERATUR

1.Mayer K.P. Hepatitis dan Akibat Hepatitis / K.P. Mayer – M., GEOTAR, Kedokteran, 1999.- Hal.720

2.Onishchenko G.G. Penyebaran virus hepatitis sebagai ancaman terhadap keamanan nasional / G.G. Onishchenko, L.A. Dementieva // Jurnal Mikrobiologi. –2003.-No.4.- Hal.93-99.

3.Sorinson S.N. Virus hepatitis / S.N.Sorinson. - SPb., Teza, 1997.- 306 hal.

4. Baumeister M. Virus Hepatitis B e Epitop Spesifik Antigen dan Keterbatasan Immunoassay Anti-HВe Komersial / M. Baumeister // Journal of Medical Virology.- 2000.-N 60.- R. 256-263.

5.Kane M. Program global untuk pengendalian infeksi hepatitis B / M. Kane // Vaksin. – 1995.-N131(Tambahan 1).- R.47-6. Shunichi SatHAI. Strain Virus Hepatitis B dengan Mutasi pada Promotor Inti pada Penderita Hepatitis Fulminan / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Annals of Internal Medicine. – 1995.- N122.- R.241-248.

7. Ou J.-N. Biologi molekuler virus hepatitis B e antigen./ J.-N.Ou // Jurnal Gastroenterologi dan Hepatologi. – 1997.- No.12 (Lampiran 1) – R.178-187.

8.Tiolais P. Virus hepatitis B. / P. Tiollais, C. Pourcel, A. Dejean // Alam. – 1985. – Hal.317, 489-495
Diterbitkan: J. “Diagnostik laboratorium klinis” - 2005.-No.6-P.-34-37

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) memasuki kehidupan pengobatan praktis di suatu tempat pada tahun 60an abad yang lalu. Tugas awalnya adalah penelitian histologis untuk tujuan ilmiah, yang bermuara pada pencarian dan identifikasi struktur antigenik sel-sel organisme hidup.

Metode ELISA didasarkan pada interaksi antigen spesifik (AT) dan antigen terkait (AG) dengan pembentukan kompleks “antigen-antibodi”, yang dideteksi menggunakan enzim. Fakta ini mendorong para ilmuwan untuk berpikir bahwa metode tersebut dapat digunakan untuk tujuan diagnostik guna mengidentifikasi imunoglobulin spesifik dari berbagai kelas yang terlibat dalam respons imun terhadap infeksi tertentu. Dan itu merupakan terobosan dalam diagnostik laboratorium klinis!

Metode ini mulai digunakan secara aktif hanya pada awal tahun 80-an, dan kemudian terutama di lembaga-lembaga khusus. Alat analisa imunoenzim pertama dilengkapi dengan pusat dan stasiun transfusi darah, rumah sakit penyakit menular dan venereologi, karena AIDS yang dahsyat, yang lahir di benua Afrika, muncul di cakrawala kita dan segera bergabung dengan infeksi “lama”, memerlukan tindakan diagnostik segera dan pencarian. untuk obat terapeutik yang mempengaruhinya.

Lingkup penerapan metode ELISA

Kemungkinan enzim immunoassay sangat luas. Sekarang sulit membayangkan bagaimana seseorang dapat melakukannya tanpa penelitian semacam itu, yang digunakan di semua cabang kedokteran. Sepertinya, apa yang bisa dilakukan ELISA dalam onkologi? Ternyata bisa. Dan banyak lagi. Kemampuan analisis untuk menemukan penanda karakteristik jenis neoplasma ganas tertentu mendasari deteksi dini suatu tumor, padahal belum dapat ditentukan dengan metode lain karena ukurannya yang kecil.

Diagnostik laboratorium klinis modern (CDL), selain penanda tumor, memiliki gudang panel ELISA yang signifikan dan menggunakannya untuk mendiagnosis berbagai kondisi patologis (proses infeksi, gangguan hormonal) dan memantau obat-obatan farmasi untuk mengidentifikasi pengaruhnya terhadap tubuh pasien. dan, omong-omong, bukan hanya manusia. Saat ini, enzim immunoassay banyak digunakan dalam pelayanan kedokteran hewan, karena “adik kita” juga rentan terhadap banyak penyakit, yang terkadang sangat mereka derita.

Jadi, ELISA, karena sensitivitas dan spesifisitasnya, dapat ditentukan dari sampel darah yang diambil dari vena:

• Status hormonal (hormon tiroid dan adrenal, hormon seks);
• Adanya infeksi virus dan bakteri (HIV, B dan C, klamidia, sifilis, dan, serta banyak penyakit lain yang disebabkan oleh mikroorganisme patogen);
• Jejak aktivitas vital mikroorganisme yang mengawali proses infeksi, yang berhasil diakhiri dan memasuki tahap pembentukan respon imun terhadap patogen tersebut. Jejak tersebut, yaitu antibodi, dalam banyak kasus tetap bersirkulasi dalam darah seumur hidup, sehingga melindungi seseorang dari infeksi ulang.

Apa inti dari ELISA?

Metode immunoassay enzim memungkinkan seseorang untuk menentukan tidak hanya keberadaan patogen itu sendiri (analisis kualitatif), tetapi juga kandungan kuantitatifnya dalam serum darah pasien.

Dosis virus atau bakteri secara signifikan mempengaruhi jalannya proses infeksi dan hasilnya, sehingga analisis kuantitatif memainkan peran penting dalam diagnosis dan pengobatan penyakit dalam berbagai bentuk dan tahapan.

Namun, mengetahui studi enzim immunoassay sebagai metode ELISA, kita bahkan tidak memikirkan bagaimana metode ini dapat mencakup begitu banyak mikroorganisme yang menghuni planet kita, banyak di antaranya menimbulkan ancaman langsung terhadap kesehatan dan kehidupan manusia dan hewan. Namun faktanya ELISA memiliki banyak pilihan (non-kompetitif dan kompetitif - langsung dan tidak langsung), yang masing-masing memecahkan masalahnya sendiri dan, dengan demikian, memungkinkan dilakukannya pencarian yang ditargetkan.

Untuk mengidentifikasi imunoglobulin dari satu kelas atau lainnya, panel (pelat) polistiren 96 sumur tradisional digunakan, di dalam sumur di mana protein rekombinan yang diserap terkonsentrasi dalam fase padat. Antibodi atau antigen yang masuk ke dalam sumur dengan serum darah menemukan objek yang “familiar” dan membentuk kompleks dengannya (AG - AT), yang jika difiksasi oleh konjugat enzim, akan dimanifestasikan oleh perubahan warna sumur ketika membaca hasilnya.

Immunoassay enzim dilakukan dengan menggunakan sistem pengujian dengan spesifisitas tertentu, diproduksi di laboratorium khusus dan dilengkapi dengan semua komponen reaksi yang diperlukan. Penelitian dapat dilakukan dengan menggunakan mesin cuci (“washers”) dan pembacaan spektrofotometer yang sebagian besar melibatkan tenaga kerja manual. Pada mesin otomatis penuh, yang membebaskan asisten laboratorium dari pekerjaan monoton, mencuci, dan tugas rutin lainnya, tentu saja lebih cepat dan nyaman untuk bekerja, tetapi tidak semua laboratorium mampu mendapatkan kemewahan seperti itu dan terus bekerja dengan cara lama - aktif mesin semi-otomatis.

Interpretasi hasil ELISA berada dalam kompetensi dokter diagnostik laboratorium, dan sifat yang melekat pada hampir semua reaksi imunokimia untuk memberikan jawaban positif palsu atau negatif palsu juga harus diperhitungkan.

Video: immunoassay enzim modern

Hasil ELISA menggunakan contoh sifilis

Immunoassay enzim cocok untuk mengidentifikasi semua bentuk, dan, sebagai tambahan, digunakan dalam studi skrining. Untuk melakukan analisis, digunakan darah vena pasien yang diambil saat perut kosong. Pekerjaannya menggunakan tablet dengan spesifisitas tertentu (AB kelas A, M, G) atau antibodi total.

Mengingat antibodi pada sifilis diproduksi dalam urutan tertentu, maka ELISA dapat dengan mudah menjawab pertanyaan kapan infeksi terjadi dan pada tahap apa prosesnya, dan interpretasi hasil yang diperoleh dapat disajikan dalam bentuk berikut:

• IgM menunjukkan durasi proses infeksi (mungkin muncul selama eksaserbasi penyakit inflamasi kronis);
• IgA menyatakan bahwa infeksi terjadi lebih dari sebulan yang lalu;
• IgG menunjukkan bahwa infeksi sedang berlangsung atau pengobatan baru saja dilakukan, yang mudah ditentukan dengan melakukan anamnesis.

Pada pengujian sifilis, sumur negatif (dan kontrol negatif) akan tetap tidak berwarna, sedangkan sumur positif (dan kontrol positif) akan menunjukkan warna kuning cerah akibat perubahan warna kromogen yang ditambahkan selama pengujian. Namun intensitas warnanya tidak selalu sesuai dengan kontrol, yaitu mungkin sedikit lebih pucat atau agak kekuningan. Ini adalah hasil yang meragukan, yang biasanya harus diperiksa ulang dengan pertimbangan wajib terhadap indikator kuantitatif yang diperoleh pada spektrofotometer, tetapi secara umum, warnanya berbanding lurus dengan jumlah kompleks imun (Ags dan AT terkait) .

Enzim immunoassay yang paling menarik adalah ELISA HIV

Analisis terhadap hal ini mungkin lebih menarik dibandingkan analisis lainnya bagi sebagian besar masyarakat, karena masih belum mungkin untuk mengatakan dengan pasti bahwa banyak masalah sosial telah hilang (prostitusi, kecanduan narkoba, dll.). Sayangnya, HIV tidak hanya mempengaruhi lapisan masyarakat ini saja; Anda dapat tertular melalui berbagai keadaan yang tidak terkait dengan percabulan atau penggunaan narkoba. Namun jika tes HIV diperlukan, Anda tidak perlu takut semua orang di sekitar Anda akan mengetahui kunjungan Anda ke laboratorium tersebut. Sekarang orang yang terinfeksi HIV dilindungi oleh hukum, dan mereka yang memiliki keraguan dapat beralih ke kantor anonim di mana mereka dapat menyelesaikan masalah tanpa takut akan publisitas dan kecaman.

Metode immunoassay enzim yang digunakan untuk mendiagnosis infeksi HIV adalah salah satu penelitian standar yang paling penting, namun memerlukan kondisi khusus, karena topiknya sangat rumit.

Masuk akal untuk melakukan ELISA HIV setelah kontak seksual, transfusi darah, prosedur medis lain yang menunjukkan adanya infeksi, dan pada akhir masa inkubasi (“jendela seronegatif”), namun harus diingat bahwa periode waktu ini tidak tepat. konstan. Bisa berakhir dalam 14-30 hari, atau bisa bertahan hingga enam bulan, sehingga nilai rata-rata dianggap selang waktu 45 hingga 90 hari. Darah disumbangkan untuk HIV dengan cara yang sama seperti untuk infeksi lainnya - dari pembuluh darah saat perut kosong. Hasilnya akan siap tergantung pada akumulasi bahan di laboratorium dan beban kerjanya (dari 2 hingga 10 hari), meskipun seringkali laboratorium memberikan jawaban pada hari yang sama atau berikutnya.

Apa yang dapat Anda harapkan dari hasil tes HIV Anda?

ELISA untuk infeksi HIV mendeteksi antibodi terhadap dua jenis virus: HIV-1 (lebih umum di Rusia dan negara-negara lain di Eropa dan Asia) dan HIV-2 (lebih umum di Afrika Barat).

Tugas ELISA HIV adalah mencari antibodi kelas G, yang terdeteksi pada semua sistem pengujian, tetapi pada periode selanjutnya, dan antibodi kelas A dan M, terdeteksi pada alat tes rekombinan generasi baru, yang memungkinkan untuk menemukan antibodi. pada tahap paling awal (masa inkubasi - "jendela seronegatif"). Anda dapat mengharapkan jawaban berikut dari ELISA:

Hasil positif primer: darah harus diperiksa ulang dengan menggunakan sistem pengujian yang sejenis, tetapi bila memungkinkan serinya berbeda dan oleh orang lain (asisten laboratorium);

Berulang (+) melibatkan pengambilan darah baru dari pasien dengan pemeriksaan yang mirip dengan analisis utama;

Hasil positif lainnya tunduk pada analisis referensi, yang menggunakan alat tes yang sangat spesifik (2-3 buah);

Hasil positif pada kedua (atau tiga) sistem dikirim untuk imunobloting (ELISA yang sama, tetapi dilakukan secara individual menggunakan alat tes dengan spesifisitas tinggi).

Kesimpulan tentang infeksi HIV dibuat hanya berdasarkan imunobloting. Percakapan dilakukan dengan orang yang terinfeksi dengan kerahasiaan penuh. Pengungkapan rahasia medis di Rusia, serta di negara lain, dapat dikenakan hukuman pidana.

Tes untuk klamidia dan sitomegalovirus menggunakan metode enzim immunoassay juga mendapatkan popularitas khusus karena memungkinkan untuk menentukan waktu infeksi, stadium penyakit dan efektivitas tindakan pengobatan.

Selama implementasi, seseorang juga dapat mengamati munculnya antibodi dari berbagai kelas pada fase berbeda dari kondisi patologis yang disebabkan oleh agen infeksi:

• IgM dapat dideteksi sejak tujuh hari setelah infeksi;
• IgA menunjukkan bahwa infeksi telah hidup di dalam tubuh selama lebih dari sebulan;
• IgG memastikan diagnosis klamidia dan membantu memantau pengobatan serta menentukan efektivitasnya. Perlu dicatat bahwa antibodi kelas G tetap dan bersirkulasi di dalam tubuh terlepas dari durasi penyakitnya, oleh karena itu, untuk menafsirkan analisis dengan benar, Anda perlu mempertimbangkan nilai referensi (norma), yang, antara lain, , berbeda untuk setiap CDL: dengan mempertimbangkan merek sistem pengujian dan kekhususan reagen yang disertakan dalam set. Nilai normal dimasukkan pada formulir di sebelah hasil ELISA.

Sedangkan untuk , ini agak berbeda: antibodi kelas M muncul setelah sekitar satu setengah bulan, yaitu hasil (IgM+) menjadi positif pada fase infeksi primer atau selama reaktivasi infeksi laten dan tetap demikian dari 4 bulan hingga enam bulan.

Adanya antibodi kelas G merupakan ciri timbulnya infeksi akut primer atau infeksi ulang. Analisis tersebut menyatakan bahwa virus tersebut ada, namun tidak memberikan informasi pada tahap apa proses penularannya. Sementara itu, penentuan titer IgG normal juga menimbulkan kesulitan, karena sepenuhnya bergantung pada status kekebalan seseorang, namun ditentukan dengan mengidentifikasi imunoglobulin kelas G. Mengingat perilaku antibodi ini, ketika mendiagnosis CMV, diperlukan suatu kebutuhan. untuk menilai kemampuan antibodi kelas G untuk berinteraksi dengan CMV, untuk kemudian “menetralisirnya” (AT avidity). Pada tahap awal penyakit, IgG berikatan sangat buruk dengan antigen virus (aviditas rendah) dan baru kemudian mulai menunjukkan aktivitas, sehingga kita dapat berbicara tentang peningkatan aviditas antibodi.

Kita dapat berbicara banyak tentang keunggulan enzim immunoassay, karena metode ini telah berhasil menyelesaikan banyak masalah diagnostik hanya dengan menggunakan darah vena. Tidak perlu menunggu lama, khawatir dan kesulitan dalam mengumpulkan bahan untuk penelitian. Selain itu, sistem pengujian untuk ELISA terus ditingkatkan dan tidak lama lagi pengujian tersebut akan memberikan hasil yang 100% dapat diandalkan.

Video: film pendidikan Universitas Kedokteran Negeri Moskow dinamai demikian. Sechenov tentang dasar-dasar ELISA

Harga berdasarkan permintaan

Anda dapat menambahkan item ke keranjang Anda dengan menentukan jumlahnya

Pabrikan: Sistem diagnostik

Negara Rusia

Satuan Ukuran: set

Jenis kemasan: kotak kardus

Artikel: L-1823

Keterangan

Sistem uji immunoassay enzim untuk mendeteksi antibodi kelas G, M dan A terhadap Treponema pallidum (T. pallidum) dalam serum darah manusia (plasma) dan cairan serebrospinal untuk tujuan diagnosis sifilis, satu set reagen lengkap untuk penentuan 96x2, cocok untuk metode manual dan penganalisis pengujian otomatis. Metode ini didasarkan pada prinsip “perangkap”, yang terdiri dari fakta bahwa antibodi antitreponemal spesifik dari semua kelas yang ada dalam sampel berikatan secara bersamaan dengan antigen rekombinan - analog dari protein imunodominan T. pallidum, yang dipasang di lubang pelat, dan untuk antigen yang sama berlabel lobak peroksidase, ketika bersama-sama menginkubasi sampel serum darah manusia (plasma) atau cairan serebrospinal dan konjugatnya. Perubahan warna campuran substrat-kromogenik yang mengandung TMB ketika ditambahkan ke dalam lubang pelat menunjukkan adanya antibodi spesifik terhadap Treponema pallidum dalam sampel uji.

Tujuan fungsional

Deteksi antibodi terhadap Treponema pallidum memainkan peran penting dalam diagnosis sifilis, karena T. pallidum tidak dapat diisolasi dari kultur sel, dan sampel untuk penentuan patogen secara langsung seringkali tidak tersedia pada tahap penyakit laten dan akhir. Dalam serodiagnosis sifilis, digunakan tes non-treponemal (RMP, RPR, VDRL) dan treponemal (RPGA, RIF, ELISA). Tes immunoassay enzim untuk menentukan antibodi total digunakan untuk skrining massal darah donor dan untuk mendiagnosis sifilis sebagai bagian dari tes serologis yang kompleks. Setelah terapi berhasil, reaktivitas tes treponema dalam banyak kasus tetap ada

Spesifikasi

Tetapkan konten:
1. Pelat polistiren 96 lubang yang dapat dilipat - 2 pcs.,
2. Konjugatnya berupa cairan berwarna kuning transparan,
3. Kontrol positif - cairan merah transparan,
4. Kontrol negatif - cairan hijau transparan,
5. Larutan pencuci, konsentrat, pH 6,9 hingga 7,6,
6. TMB adalah cairan bening tidak berwarna,
7. Larutan substrat - cairan transparan tidak berwarna, pH ~4,2.
8. Hentikan reagen (0,2M),
9. Petunjuk penggunaan dan sertifikat mutu.
Kondisi penyimpanan: pada suhu +2...8°C, pembekuan tidak dapat diterima.
Umur simpan adalah 15 bulan sejak tanggal produksi yang tertera pada label kit.
Pemenuhan persyaratan TU 9398-182-05941003-2010.
Terdaftar di Roszdravnadzor.