Media untuk mengisolasi gonokokus adalah kering. Neisseria - Hem Ltd. Kultur gonore untuk menentukan efektivitas pengobatan

Metode laboratorium banyak digunakan dalam diagnosis penyakit menular seksual pada sistem genitourinari: gonore, sifilis, trikomoniasis, dll. Kehadiran penyakit ini memerlukan tindakan untuk mengidentifikasi penyebab infeksi.

Media nutrisi SVG dimaksudkan untuk isolasi dan budidaya gonokokus saat mempelajari materi dari pasien. Setiap kit dirancang untuk menyiapkan 110 ml media gonokokal, siap digunakan.

Tetapkan isinya

Peralatan untuk memperoleh media nutrisi harus disimpan pada suhu 2 - 8 °C selama tidak lebih dari 12 bulan. Media nutrisi padat dapat disimpan dalam tabung reaksi atau cawan Petri tidak lebih dari 7 hari. Perlengkapan untuk menyiapkan media nutrisi meliputi:

• dasar: agar, ekstrak ragi, pepton, pati, garam;
• aditif selektif: koenzim, lisat eritrosit, antijamur, antibiotik, gula;
• petunjuk penggunaan kit.

Metodologi

Teknik tersebut meliputi beberapa tahapan yang masing-masing harus berlangsung sesuai dengan persyaratan tertentu. Setelah seluruh tahapan diagnosis penyakit selesai dengan metode budidaya patogen pada media gonokokal, hasilnya dicatat setelah 24 jam, 48 jam, dan 72 jam. Pada gonore akut, pertumbuhan gonokokus diamati pada hari pertama, pada gonore kronis - hingga 72 jam.

Pembuatan larutan medium basa untuk diagnosa kultur dilakukan dengan cara menuangkan basa ke dalam wadah berisi air suling (100 ml) untuk selanjutnya dilakukan pembengkakan. Suspensi yang dihasilkan dimasukkan ke dalam penangas air dan diaduk secara berkala hingga basa benar-benar larut, kemudian larutan dididihkan selama 2 menit. Larutan aditif selektif dibuat dengan melarutkannya dalam air suling (10 ml) sambil diaduk.

Media nutrisi siap pakai dibentuk dengan menambahkan larutan aditif selektif ke dalam larutan basa. Media yang dihasilkan dituangkan ke dalam cawan Petri steril. Sebelum melakukan penelitian, media gonokokal harus disimpan selama satu jam pada suhu 37°C. Kemudian bahan tersebut diinokulasi sesuai dengan perintah Kementerian Kesehatan “Tentang penyatuan metode penelitian mikrobiologi (bakteriologis) yang digunakan di laboratorium diagnostik klinis institusi medis.”

Efektivitas metode penelitian bakteriologis di

sangat ditentukan oleh kualitas media nutrisi. DI DALAM

Di negara kita, dua jenis yang paling banyak diuji dan digunakan

media nutrisi: media nutrisi bebas asites dan asites.

Bahan dasar kedua media tersebut adalah meat pentone agar (MPA) dari daging

kelinci atau hati sapi segar. Metode persiapannya

adalah sebagai berikut. Daging kelinci bebas dari lemak dan

tendon, melewati penggiling daging atau dicincang dengan pisau,

ditimbang, diisi dengan air keran bervolume dua kali lipat dan sejenisnya

formulir dibiarkan di lemari es pada suhu 4°C selama sehari untuk ekstraksi.

Kemudian massa dipanaskan sampai mendidih, direbus selama 10 menit, didinginkan dan

saring melalui kain tipis. Ke dalam filtrat tambahkan 2% agar-agar, 1%

pepton dan natrium klorida 0,5%, panaskan hingga agar-agar larut

dan atur pH=7,5-7,6 (alkalinisasi 20%

larutan natrium hidroksida). Didihkan media, saring

melalui saringan kapas, dituangkan ke dalam botol steril atau

labu dan disterilkan dalam autoklaf selama 15-20 menit pada suhu 0,5 atmosfer

pengukur tekanan (112е).

Teknik pembuatan KKL dari hati sapi segar sama saja

hanya merebus massa hati yang hancur dalam air saja

menghasilkan 20 menit, bukan 10.

Dimungkinkan untuk menyiapkan dasar media nutrisi tanpa pepton.

Dalam hal ini, mereka menggunakan metode di atas untuk menyiapkan KKL, namun

pepton dikeluarkan dari komposisinya, daging kelinci cincang direbus

5 menit, bukan 10 menit dan sterilkan media dalam autoklaf selama 10

menit pada 0,8 atmosfer pada pengukur tekanan (117о).

Agar-agar asites

Cairan asites harus diperoleh dari pasien dengan

asites yang disebabkan oleh gagal jantung, dan

diproduksi melalui trocar ke dalam botol steril dan tambahkan 5%

kloroform untuk anestesi. Selama 10 hari, cairan tersebut dicampur

kloroform dengan cara memutar botol, lalu mendiamkannya

suhu kamar sampai kloroform benar-benar mengendap di dasar botol

dan membersihkan cairan. Setelah itu, jika perlu, transparan

cairan asites dituangkan ke dalam labu steril 50 ml dengan

sumbat kapas dan dipasang setiap hari selama 3 hari

penangas air pada suhu 56°C selama 1 jam untuk menguapkan kloroform

melalui sumbat kapas. Setelah memeriksa cairan asites

sterilitas dapat digunakan untuk pengayaan

media nutrisi untuk mengisolasi gonokokus pada konsentrasi 1/3 dan 1/4

volume medium, yang ditentukan secara eksperimental.

Resep media kultur bebas asites

1. MPA dari daging kelinci atau hati sapi segar

(pH=7,4-7,5) - 100 ml, kasein hidrolisat untuk parenteral

nutrisi protein - 2 ml, autolisat ragi - 2 ml, whey

darah sapi - 20 ml (medium KDS-1).

2. MPA dari daging kelinci atau hati sapi segar

(pH=7,4-7,5) - 100 ml, larutan hemohidrolisat 5% - 2 ml,

autolisat ragi - 2 ml, serum darah sapi

sapi - 20 ml (medium GDS-2).

3. MPA dari daging kelinci atau hati sapi segar

(pH=7,4-7,5) - 100 ml, medium 199 untuk kultur jaringan tanpa

antibiotik - 20 ml, autolisat ragi - 2 ml, serum darah

sapi - 20 ml (sedang 199-SDS).

4. MPA dari daging kelinci atau hati sapi segar

(pH=7,4-7,5) - 100 ml, kuning telur ayam segar - 10 ml,

serum darah sapi - 20 ml (media JS).

Kuning telur diperoleh secara steril dari telur ayam diet

sesaat sebelum menyiapkan media. Untuk ini,

Setelah diolah terlebih dahulu dengan alkohol, cangkang dibuka dengan steril

pinset dan tuangkan isi telur ke dalam corong steril. Setelah

Setelah putihnya keluar, kuning telur yang tersisa di corong dipindahkan ke

wadah steril dan pipet ukur ambil secukupnya

produksi volume media nutrisi kuning telur.

Pembuatan autolisat ragi adalah sebagai berikut.

Ragi roti dihancurkan dan dimasukkan ke dalam botol yang lebih besar

volume ragi yang diambil sebanyak 4 - 5 kali, dan dibiarkan autolisis sebanyak dua kali

hari dalam lemari pengering atau termostat pada suhu 60°C. Lalu kental

massa coklat diencerkan dengan tiga volume air keran hangat

air, aduk rata dan sentrifugasi dua kali selama 10 menit

1000 rpm (sampai cairannya jernih). Supernatan

cairan ditiriskan, ditambahkan natrium klorida 0,5%, disesuaikan

pH menjadi 7,4-7,5 dan autoklaf selama 30 menit pada 1 atmosfer

pengukur tekanan (120°). Simpan dalam kemasan kecil di lemari es di

Autolisat ragi dapat diganti dengan larutan 1,5%.

ekstrak ragi pakan (EKD) dalam jumlah yang sama (2 ml) 1,5%

Larutan EKD dibuat di laboratorium dari EKD kering dengan cara dilarutkan dalam

air suling steril. Dimasak dengan cara ini

ekstrak cair dituangkan ke dalam tabung steril dan disterilkan

autoklaf pada suhu 0,5 atmosfer pada pengukur tekanan selama 20 menit.

Di semua media nutrisi di atas, serum darah

sapi bisa digantikan dengan sapi asli biasa

serum untuk media kultur bakteriologis, yang

adalah serum yang sama, tetapi dengan tambahan bahan pengawet.

Persiapan media yang diperkaya

MPA yang terletak di dalam botol atau labu dicairkan dalam air

mandi, dinginkan hingga 56-58° dan tambahkan bahan ke dalamnya

rasio yang ditentukan sebelumnya dalam resep. Diperkaya dengan MPA 3-3.5

ml dituangkan ke dalam tabung reaksi steril, medianya dipotong dan dibasahi

0,5 ml kaldu pepton daging steril atau isotonik

larutan natrium klorida setelah mengeras. Untuk pemeriksaan

Untuk menjamin sterilitas, media ditempatkan dalam termostat pada suhu 35-37°C per hari.

Semua media bebas asites di atas, kecuali media telur, bersifat transparan,

Sangat mudah untuk membedakan koloni mikroorganisme di dalamnya. Rabu,

diperkaya dengan telur, keruh, kuning, tumbuh

Koloninya, khususnya gonokokus, sulit dibedakan. Namun, pertumbuhan

gonococcus berlimpah pada media ini dan koloninya dapat dengan mudah ditemukan

ditemukan dengan memperlakukan pertumbuhan dengan larutan 1%.

dimethylparaphenylenediamine atau reagen oksidase lainnya,

yang mewarnai koloni gonococcus menjadi merah, bagus

kontras dengan latar belakang kuning lingkungan. Penggunaan kuning telur

lingkungan tanpa memperlakukan pertumbuhan mikroorganisme dengan reagen oksidase tidak

Kualitas setiap seri media nutrisi laboratorium baru

produksi harus diperiksa dengan menabur di atasnya

bahan patologis dari pasien dengan bakterioskopik

ditemukan gonokokus.

Umur simpan MPA di lemari es pada suhu 4°C tidak boleh melebihi 1

bulan, lingkungan yang diperkaya - 7 hari.

Karena kenyataan bahwa untuk lingkungan di atas, waktu yang singkat dimungkinkan

penyimpanan, metode produksi telah dikembangkan

media nutrisi bebas asites terliofilisasi, yang berada di bawah

berjudul “Media nutrisi untuk isolasi gonokokus, kering”

Tersedia dalam dua botol: part I (medium base) dan part II

(agen pengayaan). Untuk mempersiapkan lingkungan kerja pada Bagian I

Anda perlu menambahkan 100 ml air suling steril dan panaskan

dalam penangas air pada suhu 100° sampai isi botol larut seluruhnya

(dalam waktu 30 menit). Waktu ekstra untuk menjaga media tetap di dalam air

Tidak perlu mandi, karena ini mengurangi kualitasnya. Bagian II meliputi

24 ml air suling steril (pelarutan pengayaan

zat terjadi segera). Lalu, jika syaratnya terpenuhi

sterilitas, bagian II dipindahkan ke bagian I, didinginkan hingga 56°C,

dicampur, dituangkan ke dalam tabung steril, dipotong dan

melembabkan seperti yang dijelaskan sebelumnya.

Media kering dibuat dari daging kelinci atau hati sapi,

selain zat pengaya yang diberikan pada resep 1 (medium KDS-1)

mengandung asam orotik dengan konsentrasi 1 μg/ml. Rabu

berkualitas tinggi, nyaman untuk digunakan dalam bakteriologis

laboratorium, karena untuk mengubah lingkungan kering menjadi lingkungan kerja diperlukan

hanya air suling steril.

Menggunakan media nutrisi bebas asites dengan penambahan

antibiotik dan asam orotic memberikan hasil yang baik

diagnostik bakteriologis, termasuk ekstragenetik

gonore: gonore pada amandel dan faring, rektum. Antibiotik

ditambahkan untuk menekan pertumbuhan gonokokus yang menyertainya

flora bakteri, yang meningkatkan intensitas pertumbuhan gonokokus,

memfasilitasi deteksi koloni tunggal dan isolasi secara murni

budaya. Tambahkan 20,0 U/ml polimiksin M sulfat dan 6,2 U/ml

ristomisin sulfat; alih-alih yang terakhir, Anda dapat menggunakan

linkomisin hidroklorida - 2 mcg/ml. Asam orotik disuntikkan ke dalamnya

komposisi media nutrisi dalam jumlah 1 μg/ml.

Untuk melakukan ini, ambil sampel asam orotik 1 mg (1000 μg) dan

diencerkan dalam 1,0 ml air suling steril (dapatkan

larutan kerja yang mengandung 1000 mcg yang dapat disimpan

kulkas selama 10 hari) dan disterilkan dalam penangas air 15

menit, lalu ambil 0,1 ml larutan yang dihasilkan dan tambahkan ke dalamnya

100 ml media nutrisi yang diperkaya. Lingkungan dengan antibiotik

harus digunakan bersamaan dengan media bebas antibiotik

(satu tabung reaksi dengan media berisi antibiotik, satu lagi tanpa antibiotik), karena

meski jarang, ada strain gonokokus yang sensitif terhadap

antibiotik di atas.

Media penyimpanan (transportasi).

Komposisi media pengawet : 1) aquades 1 liter,

bebas klorin, 30 g agar-agar; 2) 900 ml sulingan

air bebas klorin, 2 ml asam tioglikolat, 12 ml 1M

larutan natrium hidroksida, 100 ml larutan natrium berair 20%.

fosfat tersubstitusi tunggal, 20 ml larutan klorida 1%.

kalsium. Campuran terakhir (2) ditambahkan ke yang baru disiapkan

agar (1), sesuaikan pH menjadi 7,3-7,4, tuangkan 10 ml medium ke dalamnya

tabung reaksi steril, disterilkan dengan uap mengalir selama 1 jam.

Penyeka kapas pada tongkat atau batang kayu

stainless steel dengan diameter sekitar 2 mm, dipasang di kapas

gabus, rebus selama 20 menit dalam buffer fosfat, pH = 7,4, dan

impregnasi selama 24 jam dalam suspensi berair 1% secara tipis

arang yang dihancurkan. Setelah kering, kapas

dikoreksi, dimasukkan ke dalam tabung bakteriologis

diameter yang sesuai (sama dengan diameter tabung reaksi dengan medium) dan

Sterilkan dalam autoklaf selama 20 menit pada 1 atmosfer (suhu

Untuk menyiapkan buffer fosfat, siapkan dua larutan: 1

larutan - 28,4 g natrium dilarutkan dalam 1 liter air suling

fosfat tersubstitusi (0,2M); 2 solusi - dalam 1 l

larutkan 27,8 g asam sitrat (0,1 M) dalam air suling.

Campurkan 181,7 ml larutan 1 dan 18,3 ml larutan 2.

Produksi tanaman menggunakan media pengawet

dilakukan sebagai berikut. Dokter memeriksa pasien

mengeluarkan tampon dari tabung reaksi, memasukkannya ke tempat penyakit

beberapa detik untuk berendam (Anda bisa melakukan beberapa

gerakan searah jarum jam dan berlawanan arah jarum jam), lepaskan tanpa menyentuhnya

benda-benda di sekitarnya ke dalam tabung reaksi dengan media pengawet. Di atas

Dengan menggunakan sumbat kapas, tabung reaksi ditutup dengan puting karet. Sebelum mengirim

bahan ke laboratorium bakteriologis, kultur disimpan pada suhu 4°C

di lemari es untuk jangka waktu minimum, tetapi tidak lebih dari sehari. Serentak

ambil bahan patologis dan buat apusannya

pemeriksaan bakterioskopik, yang dikirim ke

laboratorium dan kultur. Di laboratorium bakteriologis

segera setelah menerima usap dengan bahan patologis

dikeluarkan dari media penyimpanan dan digunakan untuk disemai di permukaan

media nutrisi miring dalam tabung reaksi. Setiap tampon menghasilkan

inokulasi pada media nutrisi dalam dua tabung reaksi. Menabur di permukaan

media nutrisi harus diproduksi dalam gerakan zigzag

sepanjang permukaan medium, putar kapas. Jika diameter tabung reaksi adalah

media pengawet dan media nutrisinya sama, bisa menggunakan kapas

setelah inokulasi, biarkan dalam tabung reaksi kedua yang bersentuhan

media nutrisi. Tanaman ditempatkan di termostat dan ditanam di

36-37е dalam desikator. Harap dicatat bahwa saat menggunakan

pelestarian lingkungan, pertumbuhan gonokokus dapat terjadi lebih lambat dari pada

inokulasi langsung bahan patologis pada nutrisi

Bekerja dengan tanaman

Budidaya gonokokus dapat dilakukan pada tabung reaksi atau

cawan petri; metode pertama memberikan penghematan yang signifikan

lingkungan. Untuk meningkatkan persentase inokulasi gonokokus, dilakukan inokulasi

media nutrisi ditempatkan dalam termostat dalam desikator dengan konsentrasi 20%

reaksi antara asam sulfat dan natrium bikarbonat: dalam desikator

ditempatkan volume 5 liter gelas dengan 50 ml asam sulfat 10%, in

Gonokokus berbentuk kacang, tersusun berbentuk diplokokus, dikelilingi mikrokapsul, tidak mempunyai flagela, dan tidak membentuk spora, mirip dengan meningokokus. Dinding sel memiliki membran luar, yang proteinnya dibagi menjadi tiga kelompok menurut signifikansi fungsionalnya. Gonokokus dicirikan oleh adanya pili, yang berbeda satu sama lain dalam sifat antigeniknya (16 varian antigenik). Gonokokus dibudidayakan pada media nutrisi yang mengandung protein asli (serum darah, cairan asites). Mereka tumbuh lebih baik pada 3-5% CO2. Koloni transparan dengan tepi halus terbentuk pada ascitagarus. Dari karbohidrat, hanya glukosa yang difermentasi, katalase dan sitokrom oksidase terbentuk - enzim khas Neisseria.

Antigen

Struktur antigenik gonokokus bervariasi. Hal ini disebabkan adanya berbagai varian antigenik pili, yang terbentuk selama perkembangan infeksi.

Patogenisitas dan patogenesis

Gonokokus menempel pada epitel silindris uretra, bagian vagina serviks, rektum, konjungtiva mata, serta sperma dan protozoa (Trichomonas, amoeba). Adhesi terjadi karena pili dan protein membran luar dinding sel. Ciri khas gonokokus adalah kemampuannya untuk menembus leukosit dan berkembang biak di dalamnya. Bagian lipooligosakarida pada dinding sel memiliki efek toksik. Polisakarida kapsular menghambat fagositosis. Berhubungan dengan vili epitel silinder mukosa uretra, dan pada wanita, saluran endoserviks, gonokokus menembus ke dalam sel dengan partisipasi protein dari membran luar dinding sel. Hal ini menyebabkan perkembangan uretritis akut, servisitis dan kerusakan pada serviks, pelengkap (tuba, ovarium) pada wanita, vesikula seminalis, dan kelenjar prostat pada pria. Dengan lokalisasi ekstragenital, gonokokus dapat merusak rektum dan amandel, serta menyebabkan blenorea (konjungtivitis) pada bayi baru lahir. Penularan terjadi pada saat melewati jalan lahir ibu penderita gonore.

Kekebalan

Dengan gonore, terjadi respon imun humoral. Namun antibodi antibakteri yang dihasilkan tidak memiliki sifat pelindung. Selama perjalanan penyakit, IgA terbentuk, yang menekan perlekatan pili patogen ke sel mukosa uretra. Namun, mereka tidak mampu melindungi mukosa dari infeksi berikutnya oleh gonokokus generasi lain, yang berhubungan dengan perubahan struktur antigeniknya. Hal ini menyebabkan infeksi ulang dan kekambuhan, serta penyakit menjadi kronis.

Infeksi gonokokal

Agen penyebab gonore dan blenorrhea N.gonorrhoeae (awalnya diklasifikasikan sebagai gonococcus) termasuk dalam famili Neisseriaceae, genus Neisseria. Pada apusan sekret pasien, gonokokus berbentuk biji kopi, bersifat gram negatif, dan terletak berpasangan baik di dalam leukosit (fagositosis tidak lengkap) maupun di luar sel. Berdasarkan ciri morfologinya, mereka sangat mirip dengan meningokokus. Gonokokus dicirikan oleh polimorfisme - ada sel kecil dan besar, jarang berbentuk batang, mereka sangat pilih-pilih terhadap media nutrisi. Mereka tumbuh lebih baik pada media yang mengandung darah, serum, dan cairan asites. Gonokokus mengandung antigen protein dan polisakarida, yang menurutnya dibagi menjadi 16 serovar, namun belum ditentukan secara rutin laboratorium bakteriologi... Untuk diagnosis mikrobiologis infeksi gonokokal, metode bakterioskopik, bakteriologis, serologis dan alergi digunakan.

Pengambilan bahan untuk penelitian

Untuk melakukan diagnosa bakteriologis dan bakterioskopik secara bermartabat dan berkualitas, penting untuk mengambil bahan klinis dengan benar. Sebagai aturan, itu harus dilakukan oleh dokter.Pada pria, sekret uretra, saluran parauretra, rektum diperiksa, dan, jika diindikasikan, bahan dari orofaring, serta sekret kelenjar prostat setelahnya. pijat. Anda juga dapat memeriksa sedimen dan “benang” urin, tetapi gonokokus lebih jarang terdeteksi di dalamnya. Sebelum mengambil bahan dari uretra, pasien tidak boleh buang air kecil selama 4-5 jam dan tidak menggunakan obat antimikroba dan larutan desinfektan. Pembukaan luar uretra terlebih dahulu diseka dengan kapas steril yang dibasahi dengan larutan natrium klorida 0,85%, kemudian dengan kapas kering. Apusan dibuat bukan dari kotoran yang mengalir bebas, melainkan dari bahan yang diambil dengan cara mengikis mukosa uretra dengan alat bakteriologis atau sendok khusus Volkmann. Dengan keluarnya cairan ringan, perlu dilakukan pijatan awal pada uretra. Pada wanita, bahan diambil dari uretra, saluran paraurethral, ​​leher rahim, rektum, dan, jika diindikasikan, dari orofaring. Pertama, vagina dibersihkan dari sekret, uretra dipijat, dan bahan dikeluarkan dengan cara dikikis dengan alat bakteriologis atau sendok Volkmann. Leher rahim terlebih dahulu dilap dengan kapas steril untuk menghilangkan sumbat lendir. Keluarnya cairan dari saluran serviks diambil dengan menggunakan loop bakteriologis atau pinset. Bahan dari rektum distal diambil dengan menggunakan sendok Volkmann secara membabi buta, yaitu tanpa persiapan apapun dari pasien, atau menggunakan rekoskop atau spekulum rektal.Dalam hal ini bahan yang diteliti diambil langsung dari lokasi lesi yang terlihat. .Dengan gonore orofaringeal, lendir diambil dari orofaring dengan kapas steril pada wadah khusus yang terbuat dari kawat baja.Untuk mendiagnosis lenorea, sekresi konjungtiva dikeluarkan dengan loop bakteriologis. Jarang, gonore dipersulit oleh gonosepsis, endokarditis, atau artritis. Kemudian bahan juslidzhenya adalah darah atau cairan sinovial. Mengingat sensitivitas gonokokus yang tinggi terhadap fluktuasi suhu, bahan uji dikirim ke laboratorium dalam termos atau tas khusus dengan bantalan pemanas.

Pemeriksaan bakterioskopik

Pemeriksaan bakterioskopik adalah metode diagnosis laboratorium gonore dan blenorea yang paling umum, meskipun kurang sensitif dibandingkan dengan isolasi kultur sebenarnya. Hal ini terutama berlaku untuk perjalanan penyakit kronis, ketika bahan uji mengandung sejumlah kecil gonokokus. Namun, dengan pengumpulan bahan yang benar, pemeriksaan pasien yang berulang-ulang, penggunaan metode provokasi, dan penilaian apusan yang berkualitas, pemeriksaan bakterioskopik sering kali memungkinkan diagnosis penyakit dengan cepat dan benar.Dua sediaan apusan tipis dan seragam dibuat dari materi yang sedang dipelajari. Yang satu diwarnai dengan metilen biru, yang kedua diwarnai dengan metode Gram. Jika tidak ada metilen biru, satu noda dapat diwarnai dengan larutan kristal violet 1% atau larutan hijau cemerlang 0,5% selama 1 menit. Kesimpulan tentang keberadaan gonokokus dibuat berdasarkan sifat-sifatnya: warna gram negatif, struktur diplokokus, bentuk biji kopi, lokasi di dalam leukosit.Di bawah pengaruh antibiotik dan obat kemoterapi lainnya, serta pada gonore kronis, morfologinya. dan warna gonokokus bisa berubah. Sel-sel individual memperoleh bentuk dan ukuran yang berbeda (yang disebut bentuk Asch). Selain itu, bahan uji mungkin mengandung kokus gram negatif yang mirip dengan gonokokus dari genus Veillonella. Hal ini sampai batas tertentu membatasi nilai diagnostik metode mikroskop primer.Hasil terbaik dan paling dapat diandalkan diperoleh dengan metode imunofluoresensi. Noda tipis dari sekret pasien difiksasi dalam nyala api pembakar. Serum anti gonokokal berlabel Fluorescein isothiocyanate dioleskan selama 1 jam pada suhu 35 ° C di ruang lembab. Setelah itu, apusan dicuci dua kali dengan larutan buffer, diaplikasikan dengan buffer gliserol dan ditutup dengan kaca penutup. Ketika gonokokus berinteraksi dengan antibodi berlabel, cahaya khas di sekitar sel bakteri terlihat di bawah mikroskop fluoresen.

Penelitian bakteriologis

Indikasi untuk mengisolasi kultur murni gonokokus adalah hasil bakterioskopi negatif yang berulang, adanya mikroorganisme yang mencurigakan untuk gonokokus, tetapi tidak teridentifikasi secara morfologis, serta dapat dipercaya untuk menyembuhkan penyakit tersebut. Sangat penting untuk segera menempatkan tanaman di termostat. Jika tidak mungkin untuk melakukan kultur di tempat pengumpulan bahan, Anda dapat menggantungkan kapas ke dalam tabung reaksi dengan media transportasi Stewart, yang menjamin kelangsungan hidup gonokokus selama pengiriman ke laboratorium. keluar sesuai dengan skema standar di salah satu media nutrisi khusus dalam tabung reaksi atau cawan Petri (CDS, Bailey, agar darah atau serum, media nutrisi kering dari perusahaan Kharkov "Biolek" untuk produksi sediaan bakteri dan obat). Untuk budidaya diagnostik gonokokus di banyak negara, agar “cokelat” juga digunakan. Media terbaik adalah yang berbahan dasar agar daging kelinci atau hati sapi segar. Menambahkan 20 unit/ml polimiksin dan 2 g/ml linkomisin ke dalamnya secara signifikan meningkatkan frekuensi inokulasi gonokokus, karena obat ini menghambat pertumbuhan bakteri lain. Sebelum disemai, semua media dipanaskan dalam termostat selama 15-20 menit. Piring dan tabung reaksi dengan kultur ditempatkan dalam desikator, di mana tercipta atmosfer 20% CO2. Koloni biasanya tumbuh dalam waktu 18-24 jam, tetapi pertumbuhan yang terlambat juga mungkin terjadi. Kemudian hasil panen disimpan dalam termostat (dalam desikator!) hingga 8 hari, diperiksa penampakan pertumbuhannya setiap hari.Koloni gonokokus yang tumbuh berbentuk bulat, agak cembung, tepi halus, permukaan mengkilat, dan berlendir. konsistensi. Warnanya transparan, seperti tetesan embun, hampir tidak berwarna, meski varian keputihan juga bisa terjadi. Koloni yang dihasilkan diperiksa secara makroskopis dan mikroskopis. Pada apusan, gonokokus tersusun berpasangan, tetrad dan berkelompok. Koloni yang khas disubkultur ke dalam serum agar miring untuk mengisolasi kultur murni. Identifikasi akhir dilakukan dengan memperhatikan sifat morfologi, budaya, enzimatik dan antigenik. Secara biokimia, gonokokus kurang aktif. Pada media whey dengan 1,5% berbagai karbohidrat, mereka hanya menguraikan glukosa, tetapi tidak menguraikan maltosa dan sukrosa.Aktivitas oksidase dari kultur yang diisolasi ditentukan dengan menerapkan larutan dimetilparafenilendiamin 1% ke koloni (setelah mikroskop). Koloni oksidase positif mula-mula berubah menjadi merah dan kemudian menjadi hitam.Pembedaan gonokokus dari spesies lain dari genus Neisseria sangat penting dalam diagnosis gonore orofaringeal. Seperti diketahui, pada selaput lendir amandel, mulut dan nasofaring selalu terdapat sejumlah besar Neisseria gram negatif - perwakilan mikroflora manusia normal. Metode yang dapat diandalkan untuk mengidentifikasi gonokokus adalah imunofluoresensi, reaksi lateks dan koaglutinasi, serta penentuan sifat enzimatik. Penentuan kualitatif sensitivitas atau resistensi mikroorganisme terhadap antibiotik dengan menggunakan metode difusi agar menggunakan disk sangat penting untuk meningkatkan frekuensi penemuan gonokokus dalam apusan selama mikroskop primer dan isolasi kultur murni yang lebih andal, terutama di kasus perjalanan penyakit yang lamban dan kronis, metode yang digunakan untuk memprovokasi gonore , yaitu eksaserbasi buatan dari proses patologis, akibatnya sejumlah besar gonokokus muncul dalam sekresi. Metode utama dari metode ini adalah: a) kimia - memasukkan larutan perak nitrat 0,5% ke dalam uretra pada pria, melumasi saluran serviks dengan larutan perak nitrat 2-5%; b) mekanis - penyisipan langsung bougie ke dalam uretra selama 10 menit, atau uretroskopi anterior; c) biologis - injeksi gonovaccine intramuskular dalam jumlah 500 juta badan mikroba atau pirogenal 200 MTD; d) nutrisi - konsumsi makanan asin dan pedas; e) termal - menghangatkan alat kelamin dengan arus induktermik; f) fisiologis - pengambilan apusan saat menstruasi. Lebih baik lagi jika menggabungkan beberapa metode provokasi, misalnya kimia, nutrisi dan biologis. Baru-baru ini, reaksi berantai polimerase telah digunakan untuk mengidentifikasi agen penyebab dengan lebih andal dari gonore. Hal ini memungkinkan Anda untuk mengidentifikasi patogen dalam kasus gonore kronis, ketika pemeriksaan bakterioskopik dan bakteriologis tidak memberikan hasil positif.

Diagnosis serologis

Diagnosis serologis gonore relatif jarang dilakukan, terutama dalam perjalanan kronisnya, ketika studi bakterioskopik dan bakteriologis tidak memberikan hasil positif. Dalam kondisi modern, enzim immunoassay, RNGA dan reaksi Bordet-Gengou (BRS) dilakukan. Antigen untuk reaksi ini adalah: vaksin gonokokus polivalen yang dimatikan dengan panas, vaksin yang dilemahkan dengan ultrasound, fraksi protein dan polisakarida gonokokus, serta antigen piridin. ELISA dan RNGA merupakan reaksi serologis yang sangat spesifik dan dapat diandalkan. Dibandingkan masa lalu, RSK agak kehilangan perannya. Ini tidak memiliki nilai praktis dalam diagnosis gonore akut, karena diobati sebelum pembentukan sejumlah besar antibodi. Umumnya tidak cocok untuk menentukan keandalan pengobatan. Reaksi Bordet-Gengou penting dalam serodiagnosis gonore kronis, terutama dalam bentuknya yang rumit (gonosepsis, metritis, arthritis, prostatitis, dll.) Nilai diagnostik tes alergi agak diremehkan oleh fakta bahwa tes tersebut positif bagi banyak orang. tahun setelah gonore. Untuk menyiapkannya, 0,1 ml vaksin gonokokal segar (100 juta sel mikroba dalam 1 ml) disuntikkan secara intradermal. Setelah 24 jam, terjadi hiperemia, terkadang disertai pembengkakan di bagian tengah.

Pengobatan dan pencegahan

Untuk kemoterapi gonore, antibiotik digunakan: beta-laktam (penisilin, sefalosporin) dan antibiotik lainnya. Pencegahan vaksin gonore tidak dilakukan karena kurangnya vaksin yang efektif. Untuk mencegah blenorea, semua bayi baru lahir diberikan larutan salah satu antibiotik yang tercantum di konjungtiva mata.

Agar dengan penambahan darah, hemoglobin atau bahan tambahan lainnya direkomendasikan untuk isolasi selektif gonokokus.

Menggabungkan**:

** Komposisi telah diverifikasi dan disesuaikan untuk memenuhi parameter yang dibutuhkan

Persiapan:

Campurkan 7,2 g bubuk dalam 100 ml air suling untuk menyiapkan media berkekuatan ganda. Panaskan hingga mendidih untuk melarutkan partikel sepenuhnya. Sterilkan dengan autoklaf pada 1,1 atm (121°C) selama 15 menit. Dinginkan hingga suhu 50°C dan secara aseptik tambahkan 100 ml larutan hemoglobin steril 2% (FD022) dan suplemen GC (FD021) yang telah disiapkan secara terpisah. Aduk rata dan tuang ke dalam cawan Petri. Untuk memberikan sifat selektif, antibiotik yang termasuk dalam aditif berikut dapat ditambahkan ke media: VNC (FD023), VCNT (FD024), Linco T (FD026), Vanco (FD028).

Untuk menyiapkan agar coklat, siapkan media dengan konsentrasi normal dengan mengaduk 3,6 g bubuk dalam 100 ml air suling. Sterilkan, tambahkan hingga 5% (v/v) darah steril yang telah didefibrinasi dan hangatkan media pada suhu 80°C selama 10 menit.

Prinsip dan evaluasi hasil:

Agar-agar dengan tambahan darah atau hemoglobin dan bahan tambahan lainnya ini direkomendasikan untuk isolasi selektif dan budidaya mikroorganisme berbahaya seperti bakteri gonokokus dan Haemophilus influenzae. Johnston mengembangkan agar coklat yang pertumbuhannya dapat diperoleh dalam waktu 24 jam Neisseria gonorrhoeae(1). Kemudian, penulis lain (2) memperbaiki media tersebut dengan memasukkan hemoglobin ke dalam komposisinya.

Agar mengandung pepton khusus - sumber nutrisi bagi mikroorganisme. Pati membantu menetralkan zat beracun yang dihasilkan oleh Neisseria, dan fosfat melawan perubahan pH akibat pembentukan amina, yang juga dapat mempengaruhi pertumbuhan dan kelangsungan hidup mikroorganisme. Hemoglobin berfungsi sebagai sumber faktor X bagi bakteri hemofilik. Aditif lain memperkaya media dengan faktor V (NAD, niconinamide adenine dinucleotide), yang diperlukan untuk Haemophilus influenzae, serta asam amino, vitamin, ion besi, dll., yang merangsang pertumbuhan neisseria patogen.

Jangan gunakan penyeka kapas untuk mengumpulkan bahan. Penaburan dilakukan segera setelah pengumpulan bahan. Hal ini harus dilakukan agar terdapat zona pertumbuhan yang padat dan jarang. Inokulasi diinkubasi pada suhu 37°C dalam atmosfer dengan 5-10% karbon dioksida dan kelembaban 70%. Semua koloni yang mencurigakan harus diuji menggunakan uji biokimia dan/atau serologis.

Kontrol kualitas:

Penampilan bedak:

Bubuk kuning muda homogen yang mengalir bebas.

Kepadatan media jadi:

Suatu medium terbentuk dengan kepadatan yang sesuai dengan gel agar-agar 1,0%.

Warna dan transparansi media jadi:

Dasar medium berwarna kuning muda, transparan atau agak opalescent. Setelah hemoglobin ditambahkan, medium menjadi coklat kecokelatan dan buram jika terbentuk gel di cawan Petri.

Keasaman lingkungan:

Pada 25°C, larutan berair (3,6% b/v) memiliki pH 7,2 ± 0,2.

Properti budaya:

Karakteristik pertumbuhan strain referensi setelah 40-48 jam pada suhu 35-37°C pada agar coklat yang dibuat berdasarkan ini, dengan adanya atmosfer karbon dioksida 5-10% dan kelembaban 70%.

Neisseria gonorrhoeae termasuk dalam famili Neisseriaceae, genus Neisseria. Gonokokus ditemukan oleh Neisser pada tahun 1879 dan seluruh keluarga diberi nama menurut namanya.

Morfologi. Gonokokus adalah diplokokus yang terdiri dari dua kokus berbentuk kacang yang terletak cekung satu sama lain (menyerupai biji kopi). Ukuran gonokokus adalah 1,2-1,3 × 0,7-0,8 mikron. Mereka bersifat polimorfik; selain bakteri berukuran besar, terdapat juga bakteri berbentuk L yang sangat kecil dan tidak beraturan. Gonokokus tidak bergerak dan tidak berspora. Zat berbentuk kapsul ditemukan pada bahan patologis (nanah). Gram negatif. Di bawah pengaruh obat-obatan dan zat lain, mereka dengan cepat berubah: bentuk gram positif muncul. Pada bahan patologis, mereka terletak secara intraseluler (dalam leukosit), tetapi bisa juga berada di luar sel. Mereka dapat ditemukan dalam bentuk kokus individu (lihat Gambar 4).

Penanaman. Gonokokus bersifat aerob. Sangat menuntut media nutrisi. Mereka tumbuh pada media yang mengandung protein asli (manusia) - darah, serum, pada suhu 37°C dan pH 7,2-7,4. Media harus segar dan lembab. Penaburan sebaiknya dilakukan segera setelah pengambilan bahan. Pada medium serum, gonokokus membentuk koloni kecil berukuran 1-2 mm, transparan, mengkilat dengan tepi halus menyerupai tetesan embun. Tidak ada hemolisis dalam media darah. Dalam kaldu whey mereka memberikan sedikit kekeruhan dan lapisan film yang mengendap di dasar tabung reaksi. Jika pertumbuhan buruk setelah 24 jam, tanaman dibiarkan di termostat untuk hari kedua.

Sifat enzimatik. Sifat sakarolitik diekspresikan dengan lemah. Gonokokus hanya memecah satu gula - glukosa, menghasilkan asam. Mereka tidak memiliki sifat proteolitik.

Pembentukan racun. Dinding sel gonokokus mengandung zat beracun - lipopolisakarida (sedikit dipelajari).

Struktur antigenik. Struktur antigeniknya heterogen dan mudah berubah di bawah pengaruh faktor lingkungan. Tidak ada pembagian gonokokus yang diterima secara umum menjadi serovar dan serotipe.

Ketahanan terhadap faktor lingkungan. Di lingkungan luar, gonokokus tidak terlalu stabil. Pada suhu 56-60° C mereka mati. Pada suhu 40° C, kelangsungan hidupnya menurun tajam. Suhu rendah dan pengeringan dengan cepat menghancurkannya. Tapi mereka tetap berada dalam nanah hingga 24 jam Larutan desinfektan - larutan fenol 1%, merkuri klorida 1:1000 membunuh gonokokus dalam beberapa menit. Gonokokus sangat sensitif terhadap garam perak - larutan perak nitrat 1% akan langsung membunuh mereka. Sinar UV membunuh mereka dalam hitungan menit.

Kerentanan hewan. Hewan tidak sensitif terhadap gonokokus. Namun, suntikan toksin gonokokal intraperitoneal ke tikus putih menyebabkan kematian mereka.

Sumber infeksi. Seseorang dengan penyakit gonore.

Rute transmisi. Kontak rumah tangga (seksual), lebih jarang melalui benda yang terkontaminasi (handuk, spons, dll).

Penyakit pada manusia. Gonore dan blenorea.

Patogenesis. Inang alami gonokokus adalah orang yang sakit. Gonokokus menembus selaput lendir uretra (pada wanita, uretra dan leher rahim). Faktor patogenisitas gonokokus adalah adanya pili, yang jika digabungkan dengan mikrovili epitel silindris, memudahkan penetrasi gonokokus ke dalam sel epitel sehingga menyebabkan proses inflamasi akut pada selaput lendir.

Secara klinis penyakit gonore dimanifestasikan oleh nyeri saat buang air kecil, keluarnya nanah dari uretra dan vagina. Penyakit ini bersifat akut, namun terkadang menjadi kronis. Gonokokus dapat menyebabkan konjungtivitis gonore - blenorea (radang bernanah pada selaput lendir mata pada bayi baru lahir). Gonokokus jarang menembus dari uretra ke organ lain, namun terkadang dapat menyebabkan radang sendi, endokarditis, dll.

Kekebalan. Tidak ada resistensi alami terhadap gonokokus. Penyakit yang ditransfer juga tidak menciptakan kekebalan. Fagositosis yang diamati tidak lengkap.

Pencegahan. Pendidikan kesehatan. Meningkatkan tingkat budaya dan higienis. Tidak ada pencegahan khusus. Untuk mencegah blenorea, anak harus disuntik ke dalam kantung konjungtiva segera setelah lahir dengan 1-2 tetes larutan albucid 30%.

Perlakuan. Antibiotik (penisilin, bisilin, streptomisin, dll). Obat sulfonamida juga digunakan. Untuk bentuk kronis, vaksin gonokokal digunakan.

Pertanyaan kontrol

1. Mendeskripsikan sifat morfologi gonokokus.

2. Apa aktivitas enzimatik dan produksi toksin gonokokus?

3. Berapakah resistensi gonokokus. Terhadap obat manakah gonokokus sangat sensitif?

4. Penyakit apa saja yang disebabkan oleh gonokokus dan patogenesisnya.

Pemeriksaan mikrobiologi

Tujuan penelitian: identifikasi antibodi gonokokus dan antigonokokus.

Bahan untuk penelitian

1. Keluarnya cairan dari mukosa uretra pada pria.

2. Keluarnya cairan dari selaput lendir uretra dan leher rahim pada wanita.

3. Keluarnya cairan bernanah dari mata.

4. Darah untuk serum.

Catatan. Untuk pemeriksaan bakterioskopik dan bakteriologis, diambil bahan: 1) sebelum dimulainya pengobatan antibiotik: 2) paling cepat 10 hari setelah berakhirnya pengobatan antibiotik; 3) paling lambat 2 jam setelah buang air kecil terakhir; 4) paling lambat 2 jam setelah douching.

Metode penelitian dasar

1. Mikroskopis (terutama digunakan untuk bentuk akut).

2. Mikrobiologis.

3. Serologis.

Kemajuan penelitian

Hari kedua pembelajaran

Keluarkan tanaman dari termostat dan periksa. Mempelajari koloni. Mereka membuat noda. Jika terdapat diplokokus gram negatif yang mencurigakan, koloni disubkultur ke media miring dalam tabung reaksi (media harus baru disiapkan dan mengandung kondensat dalam jumlah cukup) dan diuji oksidasenya. Untuk melakukan ini, setetes larutan dimetilparafenilendiamin 1% dioleskan ke koloni dengan pipet; koloni berubah warna dari coklat tua menjadi hitam.

Hari ketiga pembelajaran

Kultur dikeluarkan dari termostat, apusan dibuat dari agar miring, diwarnai dengan Gram dan diperiksa secara mikroskopis. Inokulasi pada media Hiss (laktosa, glukosa, manitol dan maltosa). Karbohidrat ini harus mengandung 30% serum darah. Tabung reaksi yang diinokulasi ditempatkan di termostat.

Penelitian hari keempat

Keluarkan tabung dari termostat; jika tidak ada pertumbuhan, biarkan di dalam termostat selama 1-2 hari lagi. Jika ada pertumbuhan maka diperhitungkan hasilnya (Tabel 28).

Diagnosis serologis

Minggu ketiga sakit. Dalam perjalanan penyakit kronis dan kasus yang meragukan, RSC dilakukan dengan menggunakan serum pasien (lihat Bab 12). Kultur gonokokus yang telah dibunuh, yang dibuat dalam kondisi industri, digunakan sebagai antigen. Anda dapat menggunakan reaksi hemaglutinasi tidak langsung (lihat Bab 12).

Pertanyaan kontrol

1. Bahan apa yang digunakan untuk mengidentifikasi gonokokus dan bagaimana cara mendapatkannya?

2. Berapa lama setelah buang air kecil (atau douching pada wanita) bahan dapat diambil untuk penelitian?

3. Metode penelitian manakah yang utama untuk gonore akut dan mana untuk gonore kronis?

4. Kapan dan tes serologis apa yang dilakukan jika dicurigai gonore?

5. Mikroorganisme apa yang perlu membedakan gonokokus?

Dapatkan obat dari gurumu. Pelajari dan buat sketsa gonokokus yang terletak di dalam dan di luar leukosit menggunakan pewarnaan Gram.

Media budaya

kuning telur sedang. Untuk 100 ml MPA daging kelinci tambahkan 15 ml kuning telur (telur ayam segar), 6 ml indikator fenol merah, 1,5 ml gula pasir dilarutkan dalam 1 ml air suling steril.

Media nutrisi asites-agar. Ke dalam filtrat kaldu yang dibuat dari daging kelinci, tambahkan 2% agar, 1% pepton, dan 0,5% natrium klorida. Panaskan hingga agar-agar larut, atur pH menjadi 7,4-7,5, dan basakan dengan natrium hidroksida 20%. Media dididihkan, disaring, dituangkan ke dalam vial steril dan disterilkan dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 115°C.

Resep media kultur bebas asites (MPA pH 7,4-7,5).

1) air daging dari daging kelinci atau hati sapi - 100 ml

hidrolisat kasein - 2 ml

autolisat ragi - 2 ml

serum darah sapi - 20 ml

2) air daging dari daging kelinci atau hati sapi - 100 ml

larutan hemohidrolisat 5% - 2 ml

autolisat ragi - 2 ml

serum sapi - 20 ml

3) air daging dari daging kelinci atau hati sapi - 100 ml

kuning telur ayam - 10 ml

serum darah sapi - 20 ml

Pertumbuhan gonokokus pada media ini melimpah. Koloni gonokokus dapat dideteksi dengan menggunakan uji oksidase, yang berubah menjadi merah, menjadi hitam.