الایزا روشی قابل اعتماد برای تشخیص HIV است. چگونه و کجا آزمایش الایزا را انجام دهیم. تشخیص الایزا: ماهیت، تعیین آنتی بادی ها چیست، چگونه انجام می شود و برای چه بیماری هایی موثر است؟ هیجان انگیزترین روش ایمونواسی آنزیمی، الایزای HIV است

HIV آفت نسل ماست. چه روش هایی برای تشخیص HIV وجود دارد، اطلاعات عمیق در مورد آزمایش الایزا برای HIV. چگونه آن را دریافت کنیم، چگونه نتایج تجزیه و تحلیل را تفسیر کنیم.

ویروس نقص ایمنی انسانی یکی از وحشتناک ترین عفونت های نسل ماست.

HIV اثر مخربی بر سیستم ایمنی بدن ما دارد و اگر پیشرفت بیماری به موقع متوقف نشود، می تواند به سندرم نقص ایمنی اکتسابی تبدیل شود. اچ‌آی‌وی از طریق تماس مستقیم بین همسران در طول رابطه جنسی از طریق اندام تناسلی مرد و زن پخش می‌شود. یکی دیگر از علل عفونت ممکن است ورود ویروس به جریان خون باشد. این به دلیل استفاده از ابزار غیراستریل، انتقال خون آلوده و حتی در طول نسل‌ها اتفاق می‌افتد: به کودک از مادر آلوده در طول شیردهی.

تا به حال، دانشمندان در سراسر جهان مغز خود را برای ایجاد نسل جدیدی از دارویی که می تواند ایدز را درمان کند، به کار می گیرند، با این حال، با وجود سرعت سریع پیشرفت علمی، ویروس نقص ایمنی انسانی همچنان در سراسر کره زمین گسترش می یابد.

الایزا - روشی برای تشخیص HIV

دانشمندان قرن بیستم چندین روش را برای تشخیص HIV ابداع کرده‌اند که مهم‌ترین آنها را ایمونواسی آنزیمی می‌دانند. اچ آی وی الایزا نسبتاً اخیراً - در اوایل دهه نود - شروع به انجام کرد. با گذشت زمان، این روش اصلاح شد و جزئیات جدیدی به دست آورد. اکنون قابلیت اطمینان روش ELISA یکی از بالاترین ها است - حدود 98٪. بر این اساس، این روش بیشتر و بیشتر مورد استفاده قرار می گیرد.

الایزا اولین آزمایشی است که بیمار هنگام آزمایش HIV با آن مواجه می شود. روش الایزا وجود آنتی بادی در خون را تعیین می کند. اگر آزمایش وجود آنتی بادی در خون را نشان دهد، ویروس وجود دارد. با این حال، اطلاعات مربوط به این آزمایش باید توسط آزمایش‌های دیگری مانند بلات ایمنی (IB) و آخرین نسل روش - واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) پشتیبانی شود.

آنتی بادی ها ترکیبات پروتئینی خاصی هستند که توسط سلول های پلاسما در واکنش به عفونتی که وارد بدن می شود تولید می شوند (آنتی بادی ها 1-2 ماه پس از عفونت شروع به تشکیل می کنند).

علل HIV

در صورتی که با فردی آلوده به HIV تماس داشته باشید یا خطر عفونت وجود داشته باشد، پزشک برای شما یک ارجاع برای آزمایش می‌نویسد. نسل هایی از افراد در معرض خطر ابتلا به HIV عبارتند از:

• تحت یک دوره درمان تزریقی به مدت یک ماه؛
• داشتن روابط جنسی بدون وسایل حفاظتی خاص؛
• ناقلان عفونت های منتقل شده در طول تماس جنسی؛
• بیماران پس از انجام تزریق یا تزریق خون برای کشف علت لخته شدن خون در دهه هشتاد.

اگر در مورد وضعیت HIV خود شک دارید و در مورد احتمال ابتلا به آن نگرانی دارید، توصیه می شود برای انجام معاینه جامع اچ آی وی سریعا از هر موسسه پزشکی در کشورمان کمک بگیرید. نتایج آزمایش ظرف یک ماه دریافت می شود. به افراد در معرض خطر HIV توصیه می شود هر 4 ماه یک بار آزمایش شوند.

نحوه انجام آزمایش

هیچ آمادگی خاصی برای انجام آزمایش خون برای HIV لازم نیست، اما بهتر است ساده ترین قوانین را دنبال کنید:

• بهتر است عصر غذا نخورید، اما آزمایش را صبح با معده خالی انجام دهید.
• توصیه نمی شود بدن را با کار فیزیکی بیش از حد بارگذاری کنید.
• غذاهای سالم بخورید، مدتی از سیگار و الکل خودداری کنید.
• برای حذف نتایج کاذب آزمایش، نباید پس از درمان بیماری های جدی آزمایش را انجام دهید.

عفونت ویروس نقص ایمنی انسانی یک تشخیص جدی است. اشتباه در تشخیص می تواند منجر به عواقب فاجعه بار شود. تست الایزا برای HIV در دسترس ترین روش تحقیق است، اما در همه موارد آموزنده نیست.

ELISA - سنجش ایمنی متصل به آنزیم. هدف از روش الایزا شناسایی آنتی بادی های ویروس نقص ایمنی در مواد بیولوژیکی است. با استفاده از این روش، می‌توانید حضور خود ویروس‌ها را در مایع ردیابی کنید، بلکه فقط آنتی‌بادی‌هایی را که در پاسخ به حضور آنها تولید می‌شوند، ردیابی کنید. ایمونواسی آنزیمی به طور گسترده ای در تشخیص بیماری های مقاربتی استفاده می شود. به شناسایی بیماری های مقاربتی کمک می کند.

انواع مختلفی از ELISA وجود دارد: نسخه مستقیم، نسخه غیر مستقیم، روش ساندویچ. در هر صورت، این تکنیک مبتنی بر تعیین وجود آنتی بادی است که به عنوان شاخص نفوذ یک عامل خارجی عمل می کند. برای شناسایی این "برچسب ها"، جزء بیولوژیکی با آنزیم ها درمان می شود.

ایمونواسی آنزیمی آنتی بادی ها را با دقت 96-98٪ تعیین می کند، خطا ناچیز است. 2 تا 4 درصد است.

الایزا - روشی برای تشخیص HIV

آزمایش الایزا برای HIV اولین مرحله تشخیص است. آنتی ژن های ویروس نقص ایمنی پروتئین های p24، p15، p17، p31 و گلیکوپروتئین های gp 41، gp55، gp66، gp120، gp160 هستند.

برای تشخیص پروتئین ویروسی، نمونه خون از ورید گرفته می شود. نمونه ای که برای آزمایش خون ELISA ارسال می شود با معرف های ایمونواسی آنزیمی درمان می شود. سرم از خون جدا می شود. اگر در طول مطالعه آنها پیدا شوند، به این معنی است که ویروس از قبل در خون وجود دارد.

خون به شدت با معده خالی اهدا می شود. مصرف غذاهای چرب یا نوشیدن الکل 2 روز قبل از آزمایش توصیه نمی شود. شما باید مصرف داروهای ضد ویروسی را به مدت 14 روز قطع کنید.

مزایای روش:

• هزینه نسبتا کم؛
• پایداری بالای معرف ها؛
• حساسیت بالا؛
• مدت کوتاه؛
• حداقل تاثیر عامل انسانی

سیستم های تست الایزا مدرن بر اساس استانداردهای بین المللی تولید می شوند. این باعث افزایش دقت روش می شود.

ایمونواسی آنزیمی همیشه نتایج قابل اعتمادی به دست نمی دهد. پس از ورود ویروس به خون، مرحله نهفته (پنهان) رشد آغاز می شود. دوره قبل از اینکه ویروس ها شروع به تکثیر کنند و آنتی بادی ها هنوز تشکیل نشده باشند، "زمان پنجره سرم منفی" نامیده می شود. انجام الایزا در این مرحله فایده ای ندارد. اگر عفونت رخ دهد، نتیجه خواهد بود. اینکه ویروس چقدر سریع خود را نشان می دهد بستگی به تعداد سلول های خطرناکی دارد که وارد بدن شده اند. در صورت آمیزش جنسی محافظت نشده یا تزریق خون آلوده، این مدت حداقل خواهد بود.

برای اطمینان بالای HIV ELISA، آزمایش سه بار انجام می شود. آخرین مهلت انجام آزمایش الایزا برای ویروس نقص ایمنی انسانی:

• 6 هفته پس از تماس احتمالی،
• در 3 ماه،
• شش ماه بعد.

الایزا نسل چهارم برای HIV روشی است که در مراحل اولیه عفونت بسیار آموزنده است. می توان آن را در اوایل یک ماه پس از عفونت مشکوک انجام داد. این تست در مقایسه با نسل سوم آنالوگ گران است. بنابراین، در موسسات پزشکی دولتی به عنوان یک روش تشخیصی اضافی استفاده می شود. تست 3 به صورت رایگان انجام می شود و در صورتی که بر اساس نتایج آن پاسخ قطعی داده نشود، بیمار به الایزا نسل چهارم ارجاع داده می شود.

مهم! بلافاصله پس از عفونت، فرد مسری می شود. او برای دیگران خطرناک است، حتی زمانی که هنوز از تشخیص خود اطلاعی ندارد!

اگر ELISA آنتی‌بادی‌هایی را برای آنتی‌ژن‌های HIV نشان داد، باید مطالعات بیشتری انجام شود. این شامل . قابلیت اطمینان این روش 80 درصد است. PCR خون، مایع منی و ترشحات واژن را آزمایش می کند. مایع بیولوژیکی در یک راکتور پزشکی تجزیه می شود و سپس با آنزیم ها درمان می شود. در نتیجه، داده هایی در مورد غلظت سلول های HIV در محیط مایع به دست می آید. به دلیل خطای زیاد (20%)، در صورت مثبت بودن نتیجه، ایمونوبلات نیز انجام می شود.

مرحله بعدی تشخیص، تست Combo (یا ایمونوبلات) است. این یک تست بسیار حساس (98% اطمینان) است که در صورت مبهم بودن نتایج ELISA پس از 6 ماه انجام می شود.

رمزگشایی نتایج ELISA

زمان رمزگشایی از 24 تا 48 ساعت متغیر است. در صورت نیاز به اطلاعات فوری (جراحی لازم است)، رمزگشایی ظرف 2 ساعت انجام می شود. مراکز درمانی استان ها همیشه معرف های لازم را ندارند. نمونه در محل درخواست گرفته می شود، سپس به مرکز منطقه ای منتقل می شود. در چنین شرایطی، نتیجه را می توان در 1-2 هفته پی برد.

نتیجه ایمونواسی آنزیمی می تواند مثبت یا منفی باشد. هیچ گزینه دیگری وجود ندارد

حتی اگر نتیجه الایزا اولیه و مکرر مثبت بود، نمی توان بیمار را آلوده به HIV تشخیص داد. مشمول خطا. دلایل نتیجه مثبت کاذب:

• بیماری های مزمن؛
• بیماری های عفونی طولانی مدت؛
• بارداری.

بنابراین، نتیجه تجزیه و تحلیل باید با مطالعات تکمیلی روشن شود.

اگر بلات ایمنی HIV مثبت (واکنشی) باشد، فرد آلوده به HIV در نظر گرفته می شود، به این معنی که او سالم است.

با گذشت زمان، سلول های ویروس با داروهای تجویز شده سازگار می شوند. برای کنترل، آزمایش الایزا به صورت دوره ای تکرار می شود.

گاهی اوقات ایمونوبلات نتیجه منفی کاذب را نشان می دهد. ابتلا به ویروس نقص ایمنی به مدت 6 ماه (یا بیشتر) بسیار نادر است. این در صورتی امکان پذیر است که مقدار کمی از سلول های ویروس وارد خون شود. در 0.5 درصد از کل موارد، عفونت تنها پس از یک سال قابل تشخیص است. در 99.5٪، در عرض شش ماه پس از عفونت، ELISA یک نتیجه قابل اعتماد خواهد داشت.

حتی با مطالعات بسیار دقیق، هنوز 2 درصد احتمال خطا وجود دارد. ما نباید عامل انسانی را فراموش کنیم. برای رفع احتمال خطا، تست را می توان در 2 موسسه مختلف انجام داد.

S.N. ایگولکینا، V.F. پوزیریف، ال.جی. زینینا، ن.م. دنیسوا، A.N. بورکوف،

A.P. RITE، T.I. اولانوا
LLC "انجمن تحقیق و تولید "سیستم های تشخیصی"،

نیژنی نووگورود
سیستم های تست ایمنی الایزا "DS-ELISA-HBeAg" و "DS-ELISA-anti-HBe" برای تشخیص خاص و پیش بینی نتایج هپاتیت B حاد و مزمن
هپاتیت B یک بیماری عفونی ویروسی است که با علائم شدید مشخص می شود

آسیب التهابی کبد حدود 1 درصد از مرگ و میرها در

دوره حاد بیماری، در 4-10٪ موارد تبدیل به مزمن است

روند با تشکیل احتمالی سیروز بعدی کبد و اولیه

هپاتوکارسینوم ها

علیرغم روند کاهش بروز هپاتیت حاد B، گروهی از بیماران از نظر اپیدمیولوژیک خطرناک که برای اولین بار با هپاتیت ویروسی مزمن تشخیص داده می شوند و همچنین گروهی از ناقلان عامل بیماری همچنان به شکل گیری ادامه می دهند. . پیش آگهی نامطلوب به دلیل بروز بالای هپاتیت B در میان جمعیت سنین باروری و همچنین در بین نوجوانان باقی می ماند.

بنابراین، مسائل مربوط به درمان، پیشگیری و تشخیص هپاتیت B در حال حاضر اهمیت ویژه ای دارد.در حال حاضر، روش های سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم به طور گسترده ای برای شناسایی نشانگرهای این عفونت استفاده می شود. مهمترین نشانگرهای سرولوژیکی HBV شامل آنتی ژن الکترونیکی (HBeAg) و آنتی بادی های آنتی ژن الکترونیکی (anti-HBe) می باشد. HBeAg با آلودگی خون بالا همراه است که نشان دهنده تکثیر فعال ویروس هپاتیت B (HBV) است. مشخص شده است که تیترهای بالای HBeAg مربوط به فعالیت بالای DNA پلیمراز است و همیشه با تشخیص ذرات کامل Dane ترکیب می شود. هنگامی که سرم حاوی HBeAg وارد خون یک فرد سالم می شود، خطر ابتلا به عفونت بسیار بالاتر از بعد از وقوع تبدیل سرمی است.

در هپاتیت B حاد، HBeAg در مراحل اولیه فرآیند عفونی در خون شناسایی می شود، در حال حاضر در اولین تظاهرات بالینی بیماری، یک هفته از ظهور HBsAg عقب می ماند. هپاتیت حاد B (AHB) یک دوره چرخه ای با گردش کوتاه مدت HBeAg مشخص می شود. به زودی، در 2-3 هفته از دوره ایکتریک، ضد HBe ظاهر می شود، که امکان پیش بینی نتیجه مطلوب بیماری را فراهم می کند.

Anti-HBe به مدت 2 تا 5 سال در خون گردش می کند و کمتر برای چندین ماه.

شروع تبدیل HBeAg-antiHBe نشان دهنده کاهش شدید فعالیت است

فرآیند عفونی تشخیص HBeAg در خون بیماران پس از گذشت 2 ماه از بیماری نشان دهنده مزمن شدن روند پاتولوژیک است. در این مورد، آنتی HBe ممکن است سال ها پس از ظهور آنتی بادی های HBcAg تشکیل شود یا اصلاً تشخیص داده نشود.

ظهور آنتی HBe ممکن است ارزش پیش آگهی نامطلوبی داشته باشد

دوره حاد HBV در اشکال شدید، که مربوط به جهش در ناحیه پیش هسته با

تشکیل سویه HBV "e-".

هدف از این کار توسعه بسیار حساس و خاص بود

سیستم های تست ایمونواسی آنزیمی برای تشخیص HBeAg و anti-HBe و ارزیابی ویژگی های اصلی آنها.

مواد و روش ها.

1. سیستم تست ایمونوسوربنت آنزیمی "DS-ELISA-HBeAg". شروع معتبر آزمون

آنتی بادی های پلی کلونال بز برای HBeAg نوترکیب، تولید شده توسط NPO Diagnostic Systems، Nizhny Novgorod، جذب شده در فاز جامد، و یک مزدوج، که آنتی بادی های پلی کلونال بز در برابر HBeAg نوترکیب است، با برچسب پراکسیداز ترب کوهی، تولید شده توسط NPO Diagnostic Novzhnygorods. طرح تجزیه و تحلیل یک "ساندویچ" یک مرحله ای است. زمان کل واکنش 1.5 ساعت است. نمونه سرم بدون رقیق آنالیز می شود.

2. سیستم تست ایمونوسوربنت آنزیمی "DS-ELISA-anti-HBe". اساس آزمون است

HBeAg نوترکیب (AHBV 102)، تولید شده توسط NPO Diagnostic Systems،

نیژنی نووگورود، جذب شده روی فاز جامد و مزدوج ضد IgG با پراکسیداز ترب کوهی، تولید شده توسط سرویس Sorbent، مسکو. واکنش در دو مرحله انجام می شود. سرم آزمایش با رقت 1/10 به آنتی ژن بی حرکت اضافه می شود و پس از انکوباسیون و حذف اجزای غیر متصل، کمپلکس های ایمنی خاص با استفاده از آنتی بادی های مونوکلونال موش بر ضد IgG انسانی نشاندار شده با پراکسیداز ترب کوهی شناسایی می شوند.

3. برای ارزیابی سیستم های آزمایش توسعه یافته، 2178 نمونه سرم استفاده شد

خون از این تعداد، 480 نمونه سرم از اهداکنندگان سالم بود. 1680 نمونه نشان می دهد

نمونه های سرم خون حاوی نشانگرهای مختلف ویروس هپاتیت B هستند.

هجده نمونه در طول زمان از بیماران با تشخیص بالینی هپاتیت حاد ویروسی B به دست آمد. پیش از این، تمام نمونه‌ها برای حضور HBsAg، HBeAg، anti-HBe، anti-HBc با استفاده از سیستم‌های آزمایشی تولید شده توسط NPO Diagnostic Systems، نیژنی نووگورود آزمایش شدند: "ELISA-HBsAg/m"، "DS-ELISA-HBeAg"، " DS-ELISA-anti-HBe، "ELISA-anti-HBc".

4. ارزیابی مقایسه ای از سیستم های تست توسعه یافته با استفاده از انجام شد

داروی تجاری "Monolisa HBe"، تولید شده توسط BIO-RAD، فرانسه؛

نتایج و بحث. NPO "Diagnostic Systems" 2 کیت تشخیصی جدید ایجاد کرده است: "DS-ELISA-HBeAg" و "DS-ELISA-anti-HBe". سیستم تست "DS-ELISA-HBeAg" برای تشخیص آنتی ژن الکترونیکی ویروس هپاتیت B در سرم انسانی (پلاسما) با استفاده از روش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم طراحی شده است و می تواند برای تشخیص های خاص و تعیین فعالیت عفونی استفاده شود. روند، پیش بینی شدت و نتیجه هپاتیت B.

سیستم تست "DS-ELISA-anti-HBe" برای تشخیص آنتی بادی های IgG به آنتی ژن الکترونیکی ویروس هپاتیت B در سرم خون انسان (پلاسما) طراحی شده است و می تواند

در پیش‌بینی سیر فرآیند عفونی و نظارت بر درمان هپاتیت B استفاده می‌شود.

برای مطالعه ویژگی تست های جدید، توزیع مورد ارزیابی قرار گرفت

چگالی نوری (OD) نمونه های سرم خون حاوی و غیر حاوی

HBeAg یا ضد HBe. نمونه‌های سرم خون اهداکنندگان سالم و نمونه‌های سرم خون انتخاب شده برای نشانگرهای مختلف ویروس هپاتیت B استفاده شد.

ایستگاه های انتقال خون نتایج مطالعه نشان داد که این دو جمعیت از هم جدا هستند. مقادیر OD نمونه‌های سرمی فاقد HBeAg از 0.011 تا 0.111 متغیر بود و پیک اصلی نمونه‌های سرم حاوی HBeAg از 2.186 تا 3.186 بود (شکل 1a).

شکل 1a. توزیع OD نمونه های سرم حاوی و غیر حاوی HBeAg در سیستم تست "DS-ELISA-HBeAg"
پیک مربوط به گروه سرمی با OD پایین (0.3-0.6) احتمالاً شامل نمونه های سرمی جمع آوری شده در مراحل اولیه فرآیند عفونی است.

در حال حاضر در طول دوره نهفتگی، HBsAg و HBeAg به طور طبیعی در خون بیماران ثبت می شوند که خطر اپیدمیولوژیک بالقوه آنها را تایید می کند.

محدوده چگالی نوری نمونه های سرم فاقد آنتی HBe

در محدوده 0.002 تا 0.122 بود و پیک اصلی OD نمونه های سرمی حاوی anti-HBe در محدوده 2.431 تا 3.231 بود (شکل 1b).

برنج. 1b. توزیع OD نمونه های سرم حاوی و غیر حاوی آنتی HBe در سیستم تست "DS-ELISA-anti-HBeAg"
ویژگی های توزیع OD نمونه های ضد HBe مثبت مورد مطالعه قرار گرفت

سرم های حاوی ( n=78) و فاقد HBsAg ( n=56).


برنج. 2a. نمونه های سرم HBe مثبت حاوی HBsAg در سیستم تست "DS-ELISA-anti-HBe".

شکل 2b. ویژگی های توزیع OD نمونه های سرم ضد HBe مثبت که حاوی HBsAg نیستند در سیستم تست "DS-ELISA-anti-HBe".
چگالی نوری 87 درصد از نمونه های سرم ضد HBe مثبت که حاوی HBsAg نبودند از 0.41 تا 0.81 متغیر بود (شکل 2b). علاوه بر این، تنها 14 درصد از نمونه های سرم ضد HBe مثبت حاوی HBsAg دارای OD در این محدوده بودند (شکل 2a). مشخص شده است که در مرحله نقاهت دیررس، با واکنش منفی به HBsAg، کاهش تدریجی تیتر آنتی بادی برای HBeAg وجود دارد (شکل 2b). بنابراین، ممکن است که غلظت غالب نمونه های ضد HBe مثبت با OD کمتر از 0.8 مطابقت داشته باشد.

داده های به دست آمده حاکی از پایایی تفکیک مثبت و

نمونه های سرم خون منفی، صرف نظر از مرحله بیماری. حساسیت و ویژگی سیستم‌های آزمایشی «DS-ELISA-HBeAg» و «DS-ELISA-antiHBe» در مقایسه با آزمون «Monolisa HBe» (BIORAD، فرانسه) (جدول 1) مورد بررسی قرار گرفت.

میز 1
ویژگی های مقایسه ای حساسیت و ویژگی

سیستم های تست DS-ELISA-HBeAg و DS-ELISA-antiHB

فهرست مطالب	تعیین HBeAg		تعیین آنتی HBe
	NPO "DS"، DS-IFA-HBeAg	"BIO-RAD" "Monolisa HВe"	NPO "DS" DS-ELISA-antiHBe	"BIO-RAD"
تعداد تحقیق کرد نمونه ها	67	67	32	32
آشکار شد مثبت نمونه ها	47	47	16	16
آشکار شد منفی نمونه ها	20	20	16	16

داده های ارائه شده در جدول 1 تطابق 100% بین نتایج را نشان می دهد.

مشخص شده است که نشانه ترکیبی HBeAg و anti-HBe، به ویژه ارزیابی کمی آنها، اهمیت پیش آگهی بیشتری دارد. افزایش سریع تیتر anti-HBe یک پاسخ ایمنی هومورال فعال را مشخص می کند و عملاً خطر مزمن شدن را از بین می برد. ما تغییرات در محتوای HBeAg/anti-HBe را در نمونه های سرم خون بیماران با تشخیص بالینی "هپاتیت حاد ویروسی B" تجزیه و تحلیل کردیم (جدول 2).

جدول 2
دینامیک تبدیل HBeAg/anti-HBe در بیماران مبتلا به HBV

موضوع بیمار	روز خونگیری*	HBeAg	ضد HBe O.F./O.C.		ضد HBc	ضد HBc IgM
	1	1,4+	2,1+	+	+	+
	12	0,5-	1,0+	+	+	+
	21	0,3-	1,3+	+	+	+
	1	1,2+	1,2+	+	+	+
	5	0,4-	1,0+	+	+	+
	13	0,2-	2,5+	+	+	+
	1	1,2+	0,6-	+	+	+
	21	0,2-	4,6+	+	+	+
	30	0,2-	9,7+	+	+	+
	1	2,1+	0,5-	+	+	+
	8	0,6-	1,1+	+	+	+
	28	0,3-	2,8+	+	+	+
	1	0,7-	2,2+	+	+	+
	8	0,3-	2,2+	+	+	+
	15	0,3-	2,8+	+	+	+
	38	0,2-	3,0+	+	+	+
6	1	1,1+	4,4+	+	+	+
	14	0,5-	3,8+	+	+	+

* از پذیرش تا بیمارستان
تمام نمونه های سرم از نظر وجود نشانگرهای سرولوژیکی مورد آزمایش قرار گرفتند

OGV: HBsAg، anti-HBc، anti-HBc IgM. دوره مشاهده بین 13 تا 38 روز بود. در بیماران شماره 1، شماره 2 و شماره 6، anti-HBe در پس زمینه کاهش تیتر HBeAg تشخیص داده شد. در بیماران شماره 3 و 4، آنتی HBe پس از ناپدید شدن HBeAg از سرم خون به ترتیب در روزهای 21 و 8 ظاهر شد. تجزیه و تحلیل تشخیص HBeAg در سرم خون بیمار شماره 5 پس از بستری در بیمارستان نتیجه منفی نشان داد. در همان زمان، تبدیل به anti-HBe از قبل در روز اول معاینه ثبت شد.

همه افراد تمایل به افزایش در تیتر آنتی بادی های HBeAg را نشان دادند

سرم خون، که امکان پیش بینی پویایی مطلوب بالینی را فراهم می کند

تظاهرات سندرم تنفسی حاد و بهبودی سریع.

مطالعه سیستم های آزمایشی جدید قابلیت اطمینان تشخیصی بالای آنها را نشان داد. نتایج مقایسه DS-ELISA-HBeAg و DS-ELISA-antiHBe با آزمون Monolisa HBe مطابقت 100 درصدی را نشان داد.

هنگام مطالعه نمونه های سرم از بیماران مبتلا به هپاتیت B در پویایی، آزمایشات

حساسیت و ویژگی بالا را تایید کرد.

زمان کم انکوباسیون نمونه های آزمایشی و کونژوگه (1 ساعت) امکان تعیین تاکتیک های صحیح برای انجام اقدامات درمانی را در کوتاه ترین زمان ممکن می سازد. استفاده از سیستم های آزمایشی ایجاد شده آسان و مقرون به صرفه است (50 میکرولیتر سرم برای تعیین HBeAg و 10 میکرولیتر سرم برای تعیین آنتی HBe مورد نیاز است). ویژگی های با کیفیت بالای آزمایش ها به آنها اجازه می دهد تا با موفقیت در پیش بینی روند عفونی و نظارت بر درمان هپاتیت B استفاده شوند.
ادبیات

1.مایر ک.پ.هپاتیت و پیامدهای هپاتیت / K.P. Mayer. – M., GEOTAR, Medicine, 1999.- P.720

2.اونیشچنکو G.G.گسترش هپاتیت ویروسی به عنوان تهدیدی برای امنیت ملی / G.G. اونیشچنکو، L.A. Dementieva // مجله میکروبیولوژی. –1382.-شماره 4.- ص.93-99.

3.سورینسون اس.ن.هپاتیت ویروسی / S.N. Sorinson. - سن پترزبورگ، تزا، 1997.- 306 پ.

4. باومایستر ام.اپی توپ های خاص ویروس هپاتیت B و آنتی ژن و محدودیت های ایمونواسی ضد HВe تجاری / M. Baumeister // مجله ویروس شناسی پزشکی.- 2000.-N 60.- R. 256-263.

5.کین ام.برنامه جهانی برای کنترل عفونت هپاتیت B / M. Kane // واکسن. – 1995.-N131(ضمیمه 1).- R.47-6. شونیچی ساتO. سویه های ویروس هپاتیت B با جهش در محرک هسته در بیماران مبتلا به هپاتیت فولمینانت / Shunichi Sato، Kazuyuki Suzuki // Annals of Internal Medicine. – 1995.- N122.- R.241-248.

7. او جی.-ن. بیولوژی مولکولی آنتی ژن و ویروس هپاتیت B./ J.-N.Ou // مجله گوارش و کبد. – 1997.- شماره 12 (Suppl.1) – R. 178-187.

8.تیولایس پی.ویروس هپاتیت B / P. Tiollais، C. Pourcel، A. Dejean // طبیعت. – 1985. – ص317، 489-495
انتشار: ج.«تشخیص آزمایشگاهی بالینی» - 1384.-شماره 6-ص-34-37

الایزا (ELISA) (ELISA) در دهه 60 قرن گذشته وارد زندگی پزشکی عملی شد. وظیفه اولیه آن تحقیقات بافت شناسی برای اهداف علمی بود که به جستجو و شناسایی ساختار آنتی ژنی سلول های یک موجود زنده خلاصه می شد.

روش الایزا مبتنی بر تعامل آنتی ژن های اختصاصی (AT) و مرتبط با آن (AG) با تشکیل کمپلکس "آنتی ژن-آنتی بادی" است که با استفاده از یک آنزیم شناسایی می شود. این واقعیت دانشمندان را بر آن داشت تا فکر کنند که این روش می تواند برای اهداف تشخیصی برای شناسایی ایمونوگلوبولین های خاص از کلاس های مختلف درگیر در پاسخ ایمنی به یک عفونت خاص استفاده شود. و این یک پیشرفت در تشخیص آزمایشگاهی بالینی بود!

این روش تنها در اوایل دهه 80 و سپس عمدتاً در موسسات تخصصی شروع به استفاده فعال کرد. اولین آنالایزرهای ایمونوآنزیمی مجهز به مراکز و ایستگاه‌های انتقال خون، بیماری‌های عفونی و بیمارستان‌های ونیرولوژی بودند، زیرا ایدز مهیب که در قاره آفریقا متولد شد، در افق ما ظاهر شد و بلافاصله به عفونت‌های "قدیمی" پیوست و نیاز به اقدامات تشخیصی فوری و جستجو داشت. برای داروهای درمانی موثر بر او.

دامنه کاربرد روش الایزا

امکانات ایمونواسی آنزیمی واقعاً گسترده است. اکنون تصور اینکه چگونه می توان بدون چنین تحقیقاتی که به معنای واقعی کلمه در تمام شاخه های پزشکی مورد استفاده قرار می گیرد، دشوار است. به نظر می رسد، الایزا در انکولوژی چه کاری می تواند انجام دهد؟ معلوم می شود که می تواند. و خیلی. توانایی تجزیه و تحلیل برای یافتن نشانگرهای مشخصه انواع خاصی از نئوپلاسم های بدخیم، زمینه ساز تشخیص زودهنگام تومور است، زمانی که به دلیل اندازه کوچک آن هنوز با هیچ روش دیگری مشخص نشده است.

تشخیص آزمایشگاهی بالینی مدرن (CDL)، علاوه بر نشانگرهای تومور، دارای زرادخانه قابل توجهی از پانل های ELISA است و از آنها برای تشخیص شرایط مختلف پاتولوژیک (فرآیندهای عفونی، اختلالات هورمونی) و نظارت بر داروهای دارویی به منظور شناسایی تأثیر آنها بر بدن بیمار استفاده می کند. و اتفاقاً نه تنها انسان. در حال حاضر، ایمونواسی آنزیمی به طور گسترده در خدمات دامپزشکی استفاده می شود، زیرا "برادران کوچک ما" نیز مستعد ابتلا به بسیاری از بیماری ها هستند که گاهی اوقات به شدت از آنها رنج می برند.

بنابراین، ELISA، به دلیل حساسیت و ویژگی آن، می تواند از نمونه خون گرفته شده از ورید تشخیص دهد:

• وضعیت هورمونی (هورمون های تیروئید و آدرنال، هورمون های جنسی)؛
• وجود عفونت های ویروسی و باکتریایی (HIV، B و C، کلامیدیا، سیفلیس، و، و همچنین بسیاری از بیماری های دیگر ناشی از میکروارگانیسم های بیماری زا)؛
• ردپایی از فعالیت حیاتی میکروارگانیسم‌هایی که فرآیند عفونی را آغاز کردند، که با موفقیت به پایان رسید و به مرحله تشکیل پاسخ ایمنی به این پاتوژن منتقل شد. چنین آثاری، یعنی آنتی‌بادی‌ها، در بسیاری از موارد مادام‌العمر در خون باقی می‌مانند و از این طریق فرد را از عفونت مجدد محافظت می‌کنند.

ماهیت الایزا چیست؟

روش ایمونواسی آنزیمی به فرد اجازه می دهد تا نه تنها وجود خود پاتوژن (تجزیه و تحلیل کیفی)، بلکه محتوای کمی آن را در سرم خون بیمار نیز تعیین کند.

دوز ویروسی یا باکتریایی به طور قابل توجهی بر روند فرآیند عفونی و نتیجه آن تأثیر می گذارد، بنابراین تجزیه و تحلیل کمی نقش مهمی در تشخیص و درمان بیماری ها در اشکال و مراحل مختلف دارد.

با این حال، با دانستن مطالعات ایمونواسی آنزیمی به عنوان روش ELISA، ما حتی به این فکر نمی‌کنیم که چگونه می‌تواند چنین طیف وسیعی از میکروارگانیسم‌های ساکن سیاره ما را پوشش دهد، که بسیاری از آنها تهدیدی مستقیم برای سلامت و زندگی انسان‌ها و حیوانات هستند. اما واقعیت این است که ELISA گزینه های زیادی دارد (غیر رقابتی و رقابتی - مستقیم و غیر مستقیم) که هر کدام مشکل خاص خود را حل می کند و بنابراین امکان جستجوی هدفمند را فراهم می کند.

برای شناسایی ایمونوگلوبولین های یک کلاس یا دیگری، از یک پانل پلی استایرن سنتی 96 چاهی (صفحه) استفاده می شود که در چاه های آن پروتئین های نوترکیب جذب شده در فاز جامد متمرکز می شوند. آنتی بادی ها یا آنتی ژن هایی که با سرم خون وارد چاه می شوند یک شی "آشنا" پیدا می کنند و با آن کمپلکسی (AG - AT) تشکیل می دهند که توسط یک مزدوج آنزیمی تثبیت می شود و با تغییر رنگ چاه ظاهر می شود. خواندن نتایج

ایمونواسی آنزیمی با استفاده از سیستم های آزمایشی با ویژگی خاص، ساخته شده در آزمایشگاه های خاص و مجهز به تمام اجزای واکنش دهنده لازم انجام می شود. تحقیقات را می توان با استفاده از ماشین های لباسشویی ("واشر") و اسپکتروفتومترهای خواندنی انجام داد که بیشتر شامل کار دستی است. در دستگاه های تمام اتوماتیک، که دستیار آزمایشگاه را از القای یکنواخت، شستشو و سایر کارهای معمول آزاد می کند، البته، کار سریعتر و راحت تر است، اما همه آزمایشگاه ها نمی توانند چنین تجملی را بپردازند و به روش قدیمی به کار خود ادامه دهند. ماشین های نیمه اتوماتیک

تفسیر نتایج ELISA در صلاحیت پزشک تشخیص آزمایشگاهی است و ویژگی ذاتی تقریباً تمام واکنش های ایمونوشیمیایی برای دادن پاسخ های مثبت یا منفی کاذب نیز باید در نظر گرفته شود.

ویدئو: ایمونواسی مدرن آنزیمی

نتایج الایزا با استفاده از مثال سیفلیس

ایمونواسی آنزیمی برای شناسایی همه اشکال مناسب است و علاوه بر آن در مطالعات غربالگری نیز استفاده می شود. برای انجام تجزیه و تحلیل، از خون وریدی بیمار که با معده خالی گرفته شده است استفاده می شود. این کار از قرص هایی با ویژگی خاص (AB کلاس A، M، G) یا آنتی بادی های کل استفاده می کند.

با توجه به اینکه آنتی بادی ها در سیفلیس در یک توالی خاص تولید می شوند، الایزا می تواند به راحتی به این سوال پاسخ دهد که عفونت در چه زمانی رخ داده و در چه مرحله ای است و تفسیر نتایج به دست آمده را می توان به شکل زیر ارائه کرد:

• IgM مدت زمان فرآیند عفونی را نشان می دهد (ممکن است در هنگام تشدید بیماری های التهابی مزمن ظاهر شود).
• IgA بیان می کند که عفونت بیش از یک ماه پیش رخ داده است.
• IgG نشان می دهد که عفونت در نوسان کامل است یا اخیراً درمان انجام شده است که به راحتی با گرفتن یک خاطره مشخص می شود.

هنگام آزمایش برای سیفلیس، چاه های منفی (و کنترل منفی) بی رنگ می مانند، در حالی که چاه های مثبت (و کنترل مثبت) به دلیل تغییر رنگ کروموژن اضافه شده در طول آزمایش، رنگ زرد روشن را نشان می دهند. با این حال، شدت رنگ همیشه با کنترل منطبق نیست، یعنی ممکن است کمی کم رنگ تر یا کمی مایل به زرد باشد. اینها نتایج مشکوکی هستند که معمولاً با در نظر گرفتن اجباری شاخص های کمی به دست آمده در اسپکتروفتومتر مورد بررسی مجدد قرار می گیرند، اما به طور کلی، رنگ به طور مستقیم با تعداد کمپلکس های ایمنی (Ags و AT های مرتبط) متناسب است. .

هیجان انگیزترین روش ایمونواسی آنزیمی، الایزای HIV است

تحلیل در مورد شاید برای طیف وسیعی از جمعیت جالب‌تر از دیگران باشد، زیرا هنوز نمی‌توان با اطمینان گفت که بسیاری از مشکلات اجتماعی ناپدید شده‌اند (روسپی‌گری، اعتیاد به مواد مخدر و غیره). متأسفانه، HIV نه تنها بر این لایه‌های جامعه انسانی تأثیر می‌گذارد، بلکه می‌توانید تحت شرایط مختلفی که مربوط به بی‌اخلاقی جنسی یا مصرف مواد مخدر نیست، مبتلا شوید. اما اگر نیاز به آزمایش اچ آی وی وجود دارد، نباید بترسید که اطرافیانتان از بازدید شما از چنین آزمایشگاهی مطلع شوند. اکنون افراد آلوده به HIV تحت حمایت قانون هستند و کسانی که شک دارند می توانند به دفاتر ناشناس مراجعه کنند تا بتوانند بدون ترس از تبلیغات و محکومیت مشکل را حل کنند.

روش ایمونواسی آنزیمی مورد استفاده برای تشخیص عفونت HIV یکی از مهم ترین مطالعات استاندارد است که با این حال، از آنجایی که موضوع بسیار ظریف است، شرایط خاصی را می طلبد.

انجام ELISA HIV پس از تماس جنسی، انتقال خون، سایر اقدامات پزشکی که نشان دهنده عفونت هستند و در پایان دوره کمون ("پنجره سرم منفی") منطقی است، اما باید در نظر داشت که این دوره زمانی است. ثابت نیست می تواند در 14-30 روز به پایان برسد، یا می تواند تا شش ماه طول بکشد، بنابراین مقدار متوسط ​​فاصله ای از 45 تا 90 روز در نظر گرفته می شود. خون برای HIV مانند سایر عفونت ها اهدا می شود - از رگ با معده خالی. نتایج بسته به تجمع مواد در آزمایشگاه و حجم کاری آن (از 2 تا 10 روز) آماده خواهد بود، اگرچه اغلب آزمایشگاه ها در همان روز یا روز بعد پاسخ را ارائه می دهند.

از نتایج HIV خود چه انتظاری می توانید داشته باشید؟

ELISA برای عفونت HIV آنتی بادی‌های دو نوع ویروس را شناسایی می‌کند: HIV-1 (در روسیه و سایر کشورهای اروپایی و آسیا شایع‌تر است) و HIV-2 (در غرب آفریقا شایع‌تر است).

وظیفه اچ آی وی الایزا جستجوی آنتی بادی های کلاس G است که در تمام سیستم های آزمایشی شناسایی می شوند، اما در دوره های بعدی، و آنتی بادی های کلاس A و M که در کیت های آزمایش نوترکیب نسل جدید شناسایی می شوند، که یافتن آنتی بادی ها را ممکن می کند. در مراحل اولیه (دوره نهفتگی - "پنجره سرم منفی"). می توانید پاسخ های زیر را از ELISA انتظار داشته باشید:

نتیجه مثبت اولیه: خون باید با استفاده از یک سیستم آزمایشی از همان نوع، اما در صورت امکان از سری متفاوت و توسط شخص دیگری (دستیار آزمایشگاه) مجدداً آزمایش شود.

تکرار (+) شامل خونگیری جدید از بیمار با معاینه مشابه با آنالیز اولیه است.

یک نتیجه مثبت دیگر در معرض تجزیه و تحلیل مرجع است که از کیت های تست بسیار خاص (2-3 عدد) استفاده می کند.

یک نتیجه مثبت در هر دو (یا سه) سیستم برای ایمونوبلات ارسال می شود (همان الایزا، اما به صورت جداگانه با استفاده از کیت های تست با ویژگی بالا انجام می شود).

نتیجه گیری در مورد عفونت HIV فقط بر اساس ایمونوبلات انجام می شود. مکالمه با فرد آلوده به صورت کاملا محرمانه انجام می شود. افشای اسرار پزشکی در روسیه و همچنین سایر کشورها مشمول مجازات کیفری است.

آزمایشات کلامیدیا و سیتومگالوویروس با استفاده از روش ایمونواسی آنزیمی نیز محبوبیت خاصی به دست آورده اند، به این دلیل که تعیین زمان عفونت، مرحله بیماری و اثربخشی اقدامات درمانی را ممکن می سازند.

در حین اجرا، می توان ظاهر آنتی بادی های کلاس های مختلف را در مراحل مختلف وضعیت پاتولوژیک ناشی از یک عامل عفونی مشاهده کرد:

• IgM را می توان تا هفت روز پس از عفونت تشخیص داد.
• IgA نشان می دهد که عفونت بیش از یک ماه در بدن زندگی می کند.
• IgG تشخیص کلامیدیا را تایید می کند و به نظارت بر درمان و تعیین اثربخشی آن کمک می کند. لازم به ذکر است که آنتی بادی های کلاس G بدون توجه به مدت زمان بیماری در بدن باقی می مانند و در گردش هستند، بنابراین، برای تفسیر صحیح تجزیه و تحلیل، باید مقادیر مرجع (هنجارها) را در نظر بگیرید، که به هر حال ، برای هر CDL متفاوت است: با در نظر گرفتن نام تجاری سیستم آزمایش و ویژگی معرف های موجود در مجموعه. مقادیر نرمال در فرم کنار نتیجه ELISA وارد می شود.

در مورد، این تا حدودی متفاوت است: آنتی‌بادی‌های کلاس M بعد از حدود یک ماه و نیم ظاهر می‌شوند، یعنی نتیجه (IgM+) در مرحله عفونت اولیه یا در طول فعال‌سازی مجدد عفونت نهفته مثبت می‌شود و از 4 ماه تا شش ماه.

وجود آنتی بادی های کلاس G مشخصه شروع یک عفونت حاد اولیه یا عفونت مجدد است. تجزیه و تحلیل بیان می کند که ویروس وجود دارد، اما اطلاعاتی در مورد اینکه فرآیند عفونی در چه مرحله ای است ارائه نمی دهد. در همین حال، تعیین تیتر IgG طبیعی نیز مشکلاتی را ایجاد می کند، زیرا کاملاً به وضعیت ایمنی یک فرد خاص بستگی دارد که البته با شناسایی ایمونوگلوبولین های کلاس G ایجاد می شود. با توجه به این رفتار آنتی بادی ها، هنگام تشخیص CMV، نیاز است. برای ارزیابی توانایی آنتی بادی های کلاس G در تعامل با CMV، به منظور "خنثی کردن" آن (AT avidity). در مرحله اولیه بیماری، IgG بسیار ضعیف به آنتی ژن های ویروسی متصل می شود (اشتیاق کم) و تنها پس از آن شروع به نشان دادن فعالیت می کند، بنابراین، می توانیم در مورد افزایش تمایل آنتی بادی ها صحبت کنیم.

می توان در مورد مزایای ایمونواسی آنزیمی بسیار صحبت کرد، زیرا این روش تنها با استفاده از خون وریدی توانسته است بسیاری از مشکلات تشخیصی را حل کند. برای جمع آوری مطالب برای تحقیق نیازی به انتظار طولانی، نگرانی و مشکل نیست. علاوه بر این، سیستم‌های آزمایش برای ELISA همچنان بهبود می‌یابند و روزی دور نیست که آزمایش یک نتیجه 100٪ قابل اعتماد بدهد.

ویدئو: فیلم آموزشی دانشگاه پزشکی دولتی مسکو به نام. سچنوف در مورد اصول الایزا

قیمت در صورت درخواست

شما می توانید با تعیین تعداد، کالایی را به سبد خرید خود اضافه کنید

سازنده: سیستم های تشخیصی

کشور روسیه

واحد Meas.: مجموعه

نوع بسته بندی: جعبه مقوایی

ماده: L-1823

شرح

سیستم تست ایمونواسی آنزیمی برای تشخیص آنتی‌بادی‌های کلاس‌های G، M و A نسبت به ترپونما پالیدوم (T. pallidum) در سرم خون انسان (پلاسما) و مایع مغزی نخاعی به منظور تشخیص سیفلیس، مجموعه کاملی از معرف‌ها برای تعیین 2×96، مناسب برای روش های دستی و آنالایزرهای تست خودکار این روش بر اساس اصل "تله" است، که شامل این واقعیت است که آنتی بادی های ضد ترپونمال خاص از تمام کلاس های موجود در نمونه به طور همزمان به آنتی ژن های نوترکیب متصل می شوند - آنالوگ های پروتئین های ایمنی غالب T. pallidum که در چاه های صفحه ثابت شده اند. و به همان آنتی ژن های نشاندار شده با پراکسیداز ترب کوهی، هنگام جوجه کشی مشترک نمونه های سرم خون انسان (پلاسما) یا مایع مغزی نخاعی و مزدوج. تغییر رنگ مخلوط زیرلایه-کروموژنیک حاوی TMB هنگام افزودن آن به چاهک های صفحه نشان دهنده وجود آنتی بادی های اختصاصی ترپونما پالیدوم در نمونه های آزمایشی است.

هدف عملکردی

تشخیص آنتی‌بادی‌های ترپونما پالیدوم نقش مهمی در تشخیص سیفلیس دارد، زیرا T.pallidum را نمی‌توان از کشت سلولی جدا کرد و نمونه‌هایی برای تعیین مستقیم پاتوژن اغلب در مراحل نهفته و اواخر بیماری در دسترس نیستند. در تشخیص سروزی سیفلیس از تست های غیر ترپونمال (RMP، RPR، VDRL) و ترپونمال (RPGA، RIF، ELISA) استفاده می شود. تست‌های ایمونواسی آنزیمی برای تعیین آنتی‌بادی‌های کل برای غربالگری انبوه خون اهداکننده و برای تشخیص سیفلیس به عنوان بخشی از مجموعه آزمایش‌های سرولوژیکی استفاده می‌شود. پس از درمان موفقیت آمیز، واکنش تست ترپونمال در بیشتر موارد باقی می ماند

مشخصات فنی

مجموعه محتویات:
1. صفحه تاشو پلی استایرن 96 چاهی - 2 عدد،
2. مزدوج یک مایع زرد شفاف است،
3. کنترل مثبت - مایع قرمز شفاف،
4. کنترل منفی - مایع سبز شفاف،
5. محلول شستشو، کنسانتره، pH از 6.9 تا 7.6،
6. TMB یک مایع بی رنگ شفاف است،
7. محلول بستر - مایع شفاف بی رنگ، pH ~ 4.2.
8. معرف توقف (0.2M)،
9. دستورالعمل استفاده و گواهی کیفیت.
شرایط نگهداری: در دمای +2...8 درجه سانتی گراد، انجماد غیرقابل قبول است.
ماندگاری 15 ماه از تاریخ تولید که روی برچسب کیت مشخص شده است.
مطابقت با الزامات TU 9398-182-05941003-2010.
ثبت شده در Roszdravnadzor.