زراعة الفيروسات في أجنة الدجاج. زراعة أجنة الدجاج على الإصابة بالتهاب الأوعية الدموية CAO

معظم الفيروسات المعروفة لديها القدرة على التكاثر في جنين الدجاج (الشكل 4). يتم استخدام الأجنة التي تتراوح أعمارها بين 8 إلى 14 يومًا، اعتمادًا على نوع الفيروس وطريقة العدوى وأهداف البحث. يتم زراعة فيروسات الأنفلونزا في 9-10 أيام، ولقاحات الجدري - في 12 يومًا، والنكاف - في أجنة الدجاج لمدة 7 أيام. يحدث تكاثر الفيروس في أجنة الدجاج في أجزاء مختلفة من الجنين، وذلك بسبب خصائص انتحاء الفيروس. تُستخدم تقنية زراعة الفيروس في جنين الدجاج على نطاق واسع في الزراعة الصناعية.

تركيب جنين الدجاج وطرق إصابته: 1 - في السلى. 2 - في التجويف السقاء. 3 - في كيس الصفار. (علم الأحياء الدقيقة والمناعة. حرره Vorobyov A.A. - M. - 1999).

يسمى الغشاء الخارجي خارج الجنين، المجاور للقشرة أو أنسجة الأم، وبالتالي يعمل كمكان للتبادل بين الجنين وبيئته، المشيماء.في الأنواع التي تضع البيض، تتمثل الوظيفة الرئيسية للمشيماء في إجراء تبادل الغازات التنفسية. في الثدييات، يشارك المشيماء في التنفس والتغذية والإفراز والترشيح وتخليق المواد. في الكائنات البدائية، المشيماء هو غشاء ثانوي، وفي الكائنات المتقدمة هو غشاء الجنين. التجويف بين المشيماء والسلى هو التجويف المشيمائي السلوي.

أمنيون(باليونانية Amnion)، الكيس الأمنيوسي أو الغشاء المائي - أحد الأغشية الجنينية الموجودة في أجنة الزواحف والطيور والثدييات.

من الناحية التطورية، نشأ السلى لحماية الأجنة من الجفاف أثناء النمو خارج البيئة المائية. لذلك، تُصنف الحيوانات الفقارية التي تضع البيض (الزواحف والطيور)، وكذلك الثدييات المنحدرة من الزواحف، على أنها حيوانات سلوية ("الحيوانات ذات أغشية البيض"). تضع الطبقات السابقة والفئات العليا من الفقاريات (رأسيات الحبليات، وسيكلوستوم، والأسماك، والبرمائيات) بيضها في البيئة المائية، لذا فهي لا تحتاج إلى قشرة مائية. يتم دمج هذه الفئات من الحيوانات في مجموعة فقر الدم. على عكس فقر الدم، لا يحتاج السلى إلى بيئة مائية للتكاثر والنمو المبكر، وبالتالي لا يرتبط السلوي بالمسطحات المائية. هذا هو الدور التطوري للسلى.

أثناء ولادة الثدييات، ينفجر غشاء الماء، ويتدفق الماء، وغالباً ما يطلق على بقايا السلى على جسم المولود الجديد اسم "القميص"، وهو علامة على الحظ السعيد وغيرها من الخرافات في كل مكان منذ القدم. مرات (وبالتالي، على وجه الخصوص، المثل الروسي عن أولئك الذين "ولدوا في قميص").

السقاء (من الكلمة اليونانية السقاء - على شكل سجق) هو عضو الجهاز التنفسي الجنيني في الفقاريات العليا. الغشاء الجرثومي الذي يتطور من المعى الخلفي للجنين. بالإضافة إلى ذلك، يشارك السقاء في تبادل الغازات بين الجنين والبيئة وإطلاق النفايات السائلة. يعد السقاء، إلى جانب الأغشية الجنينية الأخرى - السلى والمشيماء، سمة مميزة للفقاريات الأعلى - الثدييات والطيور والزواحف.

في الطيور والزواحف المبيضة، يتطور السقاء حول الجنين على طول جدران الصدفة. في طبقته الخارجية، التي تسمى الأديم المتوسط، يقوم بتكوين شبكة واسعة من الأوعية الدموية التي يتفاعل من خلالها مع البيئة الخارجية. في الثدييات، السقاء هو جزء من الحبل السري.

هناك عدة طرق لإصابة جنين الدجاج النامي بالعدوى: على الغشاء المشيمي، في التجاويف السقاء والسلوي، والكيس المحي، وجسم الجنين.

تُستخدم عدوى الغشاء المشيمائي السئائي لعزل وزراعة الفيروسات التي تشكل لويحات على الأغشية (فيروسات اللقاحات، والجدري، والهربس البسيط). قبل الإصابة، يتم فحص البويضات باستخدام منظار المبيض، ويتم تحديد حدود المجال الجوي والغشاء المشيمائي بقلم رصاص. يتم مسح سطح البويضة فوق المجال الجوي وفي موقع الإصابة بالكحول وحرقه ومعالجته باليود ويتم عمل ثقب في تجويف الكيس الهوائي.

في موقع الإصابة، تتم إزالة القشرة حتى لا تتلف الغشاء التحتي، ثم يتم ثقبها بإبرة معقمة قصيرة حتى لا تتلف الغشاء المشيميائي. يتم امتصاص الهواء من تجويف الكيس الهوائي. يتم تطبيق المادة الفيروسية (0.05 - 0.2 مل) على الغشاء المشيمائي باستخدام حقنة السلين بإبرة قصيرة أو ماصة باستور. يتم تغطية الثقب الموجود في القشرة بغطاء زجاجي معقم أو نفس القطعة المنشورة من القشرة وتمتلئ الحواف بالبارافين المنصهر. يتم وضع الأجنة المصابة أفقيًا على حامل ويتم احتضانها في منظم الحرارة. يتم تشريح الأجنة في موعد لا يتجاوز 48 ساعة من الحضانة. توجد على الغشاء المصاب بقع بيضاء معتمة ذات أشكال مختلفة (لويحات).

العدوى في التجويف السقاء. يتكاثر الفيروس المُدخل إلى السقاء في خلايا الأديم الباطن، ثم يمر إلى السائل السقاء. تتم العدوى بالطريقة التالية: يتم عمل ثقب في القشرة فوق حجرة الهواء بطرف مشرط أو مقص، وبعد ذلك يتم إدخال إبرة مع محقنة من خلال الفتحة في الاتجاه العمودي، والتي تمر عبر الغشاء المشيمائي السقاء ويدخل إلى التجويف السقاء، يتم حقن المادة في حجم 0.1 مل ويتم ملء الحفرة بالبارافين.

العدوى في كيس الصفار.ولهذا الغرض، يتم استخدام الأجنة التي يتراوح عمرها من 5 إلى 10 أيام. الأكثر شيوعا هي طريقتان للعدوى. وفقا للأول، يتم إدخال المادة عبر المجال الجوي. يتم عمل ثقب في وسط البويضة، ويتم وضعها على حامل بحيث يكون الطرف الحاد إلى اليمين، ويتم إدخال إبرة متصلة بحقنة من خلال الثقب في اتجاه عمودي، وتمر الإبرة عبر الغشاء المشيمائي السئائي، التجويف السقاء في صفار البيض. يمكن حقن من 0.1 إلى 0.5 مل من المواد المحتوية على الفيروس في كيس الصفار. بعد الإصابة، يتم ملء الثقب الموجود في القشرة بالبارافين ويتم وضع الجنين في منظم الحرارة. وفقًا للطريقة الثانية ، عند حدود المجال الجوي على الجانب الذي يقع فيه الصفار (الجانب المقابل للجنين) ، يتم عمل ثقب في القشرة يتم من خلاله إدخال المواد المعدية. يجب أن يكون اتجاه الإبرة نحو مركز البيضة.

يتم وضع جنين الدجاج المصاب بمادة فيروسية في الحاضنة لمدة 2-3 أيام، حسب طبيعة الفيروس المدخل. من أجل تطوير الفيروسات من العينات المأخوذة من المريض (على سبيل المثال، مسحات البلعوم الأنفية المستخدمة لتشخيص الأنفلونزا)، يوفر جنين الدجاج بيئة جيدة. من خلال نوع التغييرات، على سبيل المثال، في أنسجة الغشاء المشيمائي، يمكننا تحديد نوع الفيروس الذي نتعامل معه بشكل مباشر. تنتج فيروسات الجدري والهربس تغيرات مميزة للغاية. تتكاثر بعض الفيروسات بشكل مكثف للغاية في أنسجة مختلفة من جنين الكتكوت وتوفر المادة الأولية لتحضير المستضدات الفيروسية اللازمة للتشخيص المختبري للأمراض الفيروسية. تم استخدام الفيروسات التي تنتشر في أجنة الدجاج كمواد أولية لإنتاج ثمانية عشر نوعًا من لقاحات التطعيم.

على الرغم من الجوانب الإيجابية لمزارع الخلايا، التي أصبحت منتشرة على نطاق واسع في مختبرات علم الفيروسات الحديثة، فقد احتفظ جنين الدجاج في كثير من الحالات بأولويته ويستمر في العمل كمواد كلاسيكية للعمل. يتم تحديد الفيروس في جنين الدجاج عن طريق موت الجنين، وهو تفاعل تراص دموي إيجابي على الزجاج مع السائل السقاء أو السائل السلوي، عن طريق تكوين آفات بؤرية ("لويحات") على الغشاء المشيمي السقاء، وكذلك في RHA.

يمكن للعديد من الفيروسات التي تصيب الإنسان والحيوان أن تتكاثر بدرجة أكبر أو أقل في جنين الكتكوت. وجود قشرة كثيفة يحمي الجنين من الكائنات الحية الدقيقة من البيئة الخارجية.

وتستخدم طريقة زراعة الفيروسات في أجنة الدجاج في التشخيص المختبري للعدوى الفيروسية، وكذلك لإنتاج اللقاحات الفيروسية والأدوية التشخيصية. لكن هذه الطريقة لها عيوب: 1) من المستحيل ملاحظة التغيرات المرضية التي تحدث في الجنين بعد الإصابة بالفيروس في الديناميكيات. 2) عند فتح جنين مصاب بفيروس، غالبًا لا يتم اكتشاف أي تغييرات مرئية ومن الضروري اكتشاف وجود الفيروس في أنسجة وسوائل الجنين باستخدام طرق فيروسية أخرى (على سبيل المثال، تفاعل التراص الدموي)؛ 3) طريقة الزراعة في أجنة الدجاج غير مناسبة لجميع الفيروسات. وعلى الرغم من العيوب الموجودة، فإن هذه الطريقة بسيطة نسبيًا ومريحة ورخيصة وتستخدم على نطاق واسع في الدراسات الفيروسية. يكون الأمر أكثر أهمية عند العمل مع فيروسات orthomyxoviruses وفيروسات الهربس وفيروسات الجدري.

1.3.1. هيكل جنين الدجاج

جنين الدجاج مغطى بقشرة كلسية - قشرة يجاورها غشاء القشرة من الداخل. في النهاية الحادة للبيضة تتشعب وتحتوي على مجال هوائي. يوجد تحت غشاء القشرة غشاء مشيمي، في النهاية الحادة للبيضة، يمتد على طول الجانب الداخلي لغشاء القشرة، ويحيط بالمجال الهوائي، هذا الغشاء غني بالأوعية الدموية ويعمل كعضو تنفسي للجنين. ويجاوره من الداخل التجويف السقاء، وهو عضو إفرازي ويحمي الجنين من الجفاف والإصابة. يحيط التجويف السقاء بالجنين الموجود في تجويف السلى المملوء بالسائل الأمنيوسي. ومن خلال الحبل المحي، يتصل الجنين بالكيس المحي، وهو المصدر الرئيسي للعناصر الغذائية.

لنجاح زراعة الفيروسات في جسم أجنة الدجاج النامية، يلزم وجود نظام درجة حرارة معين (36 0 -38 0)، والرطوبة (50-70٪)، وكذلك التهوية الكافية. وتصاب أجنة الدجاج بعمر معين بالعدوى، ويتم تحضينها لمدة تتراوح بين 6 إلى 13 يومًا، حسب نوع الفيروس وطريقة العدوى. من الضروري تحضير: حامل البيض، قوارير الكحول واليود، أنبوب اختبار مع البارافين المعقم، قصاصات الغطاء، أكياس من الصوف القطني المعقم والشاش، حاويات معقمة ملفوفة بالورق، محاقن معقمة، إبر، ملاقط، إبر تشريح. يتم وضع الأدوات في كوب من الكحول، حيث تبقى طوال العمل بأكمله، قبل كل معالجة، يتم تعقيمها بالإضافة إلى إطلاق النار في لهب الموقد. يتم غسل اليدين جيداً قبل العمل، وينصح بارتداء قناع الشاش.

يتم اختيار الأجنة القابلة للحياة للعمل عن طريق فحص البيض المحتضن بالمنظار. الجنين القابل للحياة متحرك، والأوعية الدموية في الغشاء مملوءة بالدم. يتم تطهير البيض المختار تمامًا من الطرف الحاد (أو على جانب البيضة): تُمسح القشرة بالكحول، وتُدهن باليود، وتُعاد معالجتها بالكحول وتُطهى.

1.3.2. إصابة جنين الفرخ على الغشاء المشيمي

تستخدم أجنة الدجاج بعمر 10-12 يوم للعدوى. المراحل الرئيسية للعدوى:

1. توضع البيضة على حامل في وضع عمودي بحيث يكون الكيس الهوائي في الأعلى، ويتم تعقيم القشرة عند الطرف الحاد للبيضة.

2. يتم عمل ثقب في القشرة فوق مركز الكيس الهوائي باستخدام إبرة تشريح.

3. يتم إدخال فك المقص في الفتحة الناتجة ويتم قطع نافذة يبلغ قطرها حوالي 1.5 سم في القشرة.

4. من خلال الفتحة، قم بتمزيق الورقة الداخلية للقشرة بعناية بإبرة ثم انزعها في منطقة صغيرة (0.5-1 سم 2).

5. تتم إصابة الغشاء المشيمائي السئائي بوضع 0.1-0.2 مل من المادة المحتوية على الفيروس عليه باستخدام ماصة أو حقنة باستور.

6. النافذة الموجودة في القشرة مغطاة بفيلم مرن خاص أو غطاء زجاجي معقم ومثبتة بالبارافين المنصهر.

توضع الأجنة المصابة في جهاز تنظيم الحرارة في وضع عمودي وتحضن لمدة 2-3 أيام، وبعد ذلك يتم إجراء تشريح للجثة وفقا للقواعد التالية:

1. توضع البيضة على حامل بحيث يكون المجال الهوائي في الأعلى، ويتم تعقيم مكان الفتح.

2. باستخدام مقص معقم، قم بقطع القشرة على طول حدود المجال الجوي.

3. باستخدام الملقط، قم بإزالة القشرة على طول الحدود. يتم قطع الغشاء المشيمائي المكشوف على طول حافة الصدفة. من خلال الفتحة الناتجة، اسكب محتويات البيضة بالكامل في كوب أو صينية.

4. تتم إزالة الغشاء المشيمائي المتبقي داخل القشرة بعناية باستخدام ملاقط ووضعه في كوب معقم بمحلول ملحي. وهنا يقومون بتصويبه ودراسة التغييرات من خلال وضع الكأس على خلفية داكنة.

للحصول على مادة تحتوي على الفيروس من الغشاء المشيمي، يجب سحقها بالمقص ثم طحنها في ملاط ​​مع زجاج الكوارتز، مع إضافة محلول ملحي. يتم طرد المعلق الناتج عند 2000 دورة في الدقيقة لمدة 10-15 دقيقة ويتم استخدام المادة الطافية كمادة تحتوي على فيروس.

أرز. 3. إصابة أجنة الدجاج

1.3.3. العدوى في التجويف السقاء

يتم أخذ أجنة بعمر 10-11 يومًا للعدوى. المراحل الرئيسية للعدوى:

1. يتم وضع البيضة على حامل بحيث يكون الطرف الحاد للأعلى ويتم تعقيم القشرة فوق المجال الهوائي.

2. يتم عمل ثقب في القشرة في منتصف الطرف الحاد باستخدام إبرة تشريح.

3. يتم إدخال إبرة حقنة تحتوي على مخفف للفيروس في الحفرة. يتم إدخال الإبرة في اتجاه عمودي بمقدار 2-3 ملم تحت مستوى كيس الهواء ثم يتم حقن 0.1-0.2 مل من المادة.

4. يتم إغلاق الثقب الموجود في القشرة باستخدام البارافين المعقم المذاب.

يتم حفظ الأجنة المصابة في جهاز تنظيم الحرارة عادة لمدة يومين. قبل الفتح، يوضع البيض في الثلاجة طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. ويتم الفتح بالترتيب التالي:

1. توضع البيضة على حامل بحيث يكون الكيس الهوائي في الأعلى، ويتم تعقيم القشرة الموجودة فوقها.

2. باستخدام المقص، يتم قطع القشرة قليلاً فوق حدود المجال الجوي.

3. قم بإزالة غشاء القشرة بعناية باستخدام الملقط، وبعد ذلك يتم ثقب الغشاء المشيمي السقاء بماصة باستور في المكان الذي لا توجد فيه أوعية، ويتم امتصاص السائل السقاء فيه.

4. يتم نقل السائل السقاء إلى أنبوب اختبار معقم، ويتم تلقيح جزء منه في المرق لاختبار العقم البكتريولوجي.

يتم استخدام الأجنة في عمر 8 إلى 14 يومًا، حسب نوع الفيروس وطريقة الإصابة. يحدث التكاثر في أجنة الدجاج في أجزاء مختلفة من الجنين طرق العدوى: على الغشاء المشيمي، في الغشاء الخيفي والسلوي، الكيس المحي، جسم الجنين.

29. زراعة الأنسجة.

اعتمادا على تقنية التحضير، هناك 3 أنواع من الخلايا:

يمكن للزجاج أحادي الطبقة أن يتكاثر على سطح الزجاج المحايد كيميائيًا في شكل طبقة أحادية؛

تعليق، ينتشر في كامل حجم الوسط المغذي؛

الأعضاء عبارة عن قطع كاملة من الأعضاء والأنسجة التي تحتفظ ببنيتها الأصلية.

إعداد ثقافة الخلية الأولية يتكون من عدة مراحل: طحن الأنسجة، وفصل الخلايا، وغسل التعليق الناتج من التربسين.

إشارة:

- تأثير الاعتلال الخلوي - التغيرات المورفولوجية في الخلايا المرئية تحت المجهر، حتى الرفض من الزجاج.

الادراج الفيروسية هي تراكم الجزيئات الفيروسية أو انفصال المكونات الفيروسية في السيتوبلازم أو نواة الخلايا.

اللويحات هي مناطق محدودة تتكون من خلايا تنكسية. تظهر على شكل بقع ضوئية على خلفية الخلايا الملونة.

اختبار اللون

امتصاص الدم هو قدرة مزارع الخلايا على امتصاص خلايا الدم الحمراء على سطحها.

التشوش.

30. التصنيف والتركيب الكيميائي للبكتيريا.

العاثيات هي فيروسات بكتيرية لها القدرة على اختراق الخلايا البكتيرية والتسبب في انحلالها. لديهم شكل الشرغوف، وبعضها يشبه الخيط المكعب. وهي تتكون من رأس عشروني الوجوه وذيل. يوجد داخل العملية الذيلية قضيب أسطواني، وفي الخارج يوجد غمد، وتنتهي العملية بصفيحة قاعدية سداسية ذات أشواك قصيرة. تتكون العاثيات من الحمض النووي والبروتين. في العاثيات التي على شكل حيوانات منوية، يكون الحمض النووي المزدوج مكتظًا بإحكام في حلزون داخل الرأس. البروتينات جزء من القشرة. بالإضافة إلى البروتينات الهيكلية، تم اكتشاف البروتينات الداخلية المرتبطة بالحمض النووي وبروتينات الإنزيم المشاركة في تفاعل العاثيات مع الخلية.

31. عملية تفاعل بين العاثيات الخبيثة والخلية البكتيرية الحساسة لها

لا يمكن أن يزيد عدد العاثيات الخبيثة إلا من خلال الدورة التحللية. تتكون عملية التفاعل بين العاثيات القاتلة والخلية من عدة مراحل: امتزاز العاثيات على الخلية، اختراق الخلية، التخليق الحيوي لمكونات العاثيات وتجميعها، وإطلاق العاثيات من الخلية.

في البداية، ترتبط العاثيات بمستقبلات محددة على سطح الخلية البكتيرية. يقوم ذيل العاثي، بمساعدة الإنزيمات الموجودة في نهايته (الليزوزيم بشكل أساسي)، بإذابة غشاء الخلية محليًا، وينقبض، ويتم حقن الحمض النووي الموجود في الرأس في الخلية، بينما تظل القشرة البروتينية للعاثية بالخارج. يؤدي حقن الحمض النووي إلى إعادة هيكلة كاملة لعملية التمثيل الغذائي للخلية: حيث يتوقف تخليق الحمض النووي البكتيري والحمض النووي الريبي (RNA) والبروتينات. يبدأ نسخ الحمض النووي للعاثية باستخدام إنزيم النسخ الخاص به، والذي يتم تنشيطه بعد دخول الخلية البكتيرية. أولاً، يتم تصنيع الرنا المرسال المبكر ثم المتأخر، والذي يدخل ريبوسومات الخلية المضيفة، حيث يتم تصنيع بروتينات البكتيريا المبكرة (بوليميرات الحمض النووي، النيوكلياز) والمتأخرة (بروتينات القفيصة والذيل، إنزيمات الليزوزيم، ATPase والنسخ). يحدث تكرار الحمض النووي للبكتيريا وفقًا لآلية شبه محافظة ويتم إجراؤه بمشاركة بوليميرات الحمض النووي الخاصة به. بعد تخليق البروتينات المتأخرة والانتهاء من تكرار الحمض النووي، تبدأ العملية النهائية - نضوج جزيئات العاثيات أو مزيج الحمض النووي العاثي مع بروتين الغلاف وتكوين جزيئات العاثيات المعدية الناضجة.

عدوى الغشاء المشيمائي.هذه الطريقة هي واحدة من الأكثر استخداما. ميزتها الرئيسية هي أن عددًا من الفيروسات ، عندما تتكاثر على الغشاء المشيميائي ، تسبب تغيرات مميزة ، وتشكل آفات على شكل لويحات بقع بيضاء من أشكال مختلفة.

تستخدم الأجنة بعمر 10-12 يوم للعدوى. عادة، يتم اختراق الغشاء المشيمائي السئائي عن طريق إحداث ثقب في القشرة فوق الكيس الهوائي أو على جانب البيضة.

المراحل الرئيسية للعدوى على الغشاء المشيميائي من الفضاء الجوي:

1. يتم وضع البيضة على حامل في وضع عمودي
بحيث تكون الوسادة الهوائية في الأعلى)"؛ نفذ
تعقيم شامل للقشرة عند الطرف الحاد للبيضة.

2. يتم ثقب القشرة فوق مركز الكيس الهوائي.
باستخدام إبرة تشريح.

3. يتم إدخال فك المقص في الفتحة الناتجة و
قطع نافذة في القشرة يبلغ قطرها حوالي 1.5 سم. (حيث
لا تسمح لقطع القشرة بالدخول إلى داخل البيضة).

4. من خلال الثقب المصنوع، تكون الورقة الداخلية مرئية
غشاء القشرة، ممزق بعناية بالعين
ملاقط أو إبرة وتقشر في منطقة صغيرة (0.5-1
سم 2)، وفضح الغشاء المشيمي.

5. يصيب الغشاء المشيمي
وذلك بوضع 0.1-0.2 مل من المادة المحتوية على الفيروس عليها
(على سبيل المثال، فيروس الوقس) باستخدام ماصة باستور
أو حقنة.

6. النافذة الموجودة في الغلاف مغلقة بمرونة خاصة
فيلم، ساترة معقمة أو الزجاج
قبعة. لربط الزجاج والغطاء بالصدفة
استخدام البارافين المنصهر.

توضع الأجنة المصابة في جهاز تنظيم الحرارة في وضع عمودي وتحضن لمدة 2-3 أيام، وبعد ذلك يتم إجراء تشريح للجثة وفقا للقواعد التالية:

1. توضع البيضة على حامل حتى يخرج الهواء منها
كانت المساحة في الأعلى، ويتم تعقيم المكان
الافتتاح القادم عن طريق المعالجة المناسبة
الكحول واليود.

2. بعد إزالة الفيلم، ساترة أو غطاء،
باستخدام مقص معقم، قطع القشرة على طول حدود الهواء
فضاء.

3. باستخدام الملقط، قم بإزالة القشرة.
الغشاء المشيمائي المكشوف (والذي قد
تكون تغييرات مرئية) يتم قطعها على طول حافة الصدفة. خلال
الحفرة التي تشكلت، صب محتويات البيضة بأكملها في الكأس
أو صينية.

4. الأنسجة المشيمية المتبقية داخل الصدفة
تتم إزالة القشرة بعناية باستخدام الملقط ووضعها فيها
كوب معقم بمحلول ملحي. ها هو
قم بتصويب ودراسة التغييرات عن طريق وضع الكأس على مكان مظلم
خلفية.

للحصول على مادة تحتوي على الفيروس من الغشاء المشيمي، يجب سحقها بالمقص ثم طحنها في ملاط ​​مع زجاج الكوارتز، مع إضافة محلول ملحي. يتم طرد المعلق الناتج عند 2000 دورة في الدقيقة لمدة 10-15 دقيقة ويتم استخدام الطاف! كمادة تحتوي على فيروسات (يلزم إجراء اختبار إلزامي لعدم وجود تلوث بكتيري).

العدوى في التجويف السقاء.هذه الطريقة

ويتميز ببساطته وقيمته لأنه يساهم في تراكم الفيروس بشكل كبير. عادة ما يتم أخذ أجنة عمرها 10 أيام للعدوى. المراحل الرئيسية للعدوى في التجويف السقاء:

}. يتم وضع البيضة على حامل بحيث تكون النهاية الحادة للأعلى ويتم تعقيم القشرة فوق المجال الجوي.

2. في وسط النهاية الحادة، يتم عمل ثقب في الصدفة
باستخدام إبرة تشريح.

3. يتم إدخال إبرة المحقنة التي تحتوي على مادة مخففة في الحفرة
فيروس (مثل فيروس الأنفلونزا). الإبرة متقدمة في
الاتجاه الرأسي 2-3 ملم تحت مستوى الهواء
كيس ثم حقن OD-0.2 مل من المادة.

4. يتم إغلاق الثقب الموجود في القشرة باستخدام
البارافين المعقم المذاب.

يتم حفظ الأجنة المصابة في جهاز تنظيم الحرارة عادة لمدة يومين. قبل الفتح، يوضع البيض في الثلاجة طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات. يتم الافتتاح بالترتيب التالي:

1. توضع البيضة على حامل بحيث يكون الكيس الهوائي في الأعلى، ويتم تعقيم القشرة الموجودة فوقها؛

2. باستخدام المقص، قم بقص القشرة إلى أعلى قليلاً
حدود المجال الجوي.

3. قم بإزالة القشرة بعناية باستخدام الملقط، ثم
لماذا يتم ثقب الغشاء المشيمائي باستخدام باستور؟
ماصة في المكان الذي لا توجد فيه أوعية، وامتص السقاء
سائل (يمكنك جمع 5-6 مل).

4. يتم نقل السائل السقاء إلى مكان معقم
أنبوب اختبار، ويتم تلقيح جزء منه في المرق للتحقق منه
العقم البكتريولوجي.

غالبًا ما تُستخدم طريقة عدوى التجويف السقاء لزراعة فيروس الأنفلونزا، وكذلك النكاف واللقاح.

العدوى في تجويف السلى

يعد تنفيذ هذه الطريقة أكثر صعوبة ويتم استخدامها بشكل أقل تكرارًا إلى حد ما من الطرق السابقة. تكمن خصوصيتها في أنه عند الإصابة ببعض الفيروسات الرئوية (على سبيل المثال، فيروسات الأنفلونزا والنكاف)، تتكاثر هذه الأخيرة ليس فقط في خلايا غشاء السلى، ولكن أيضًا في الجهاز التنفسي وأنسجة الرئة للجنين، حيث يتجمع السائل المصاب يخترق. تستخدم الأجنة بعمر 7-12 يومًا للعدوى. يتم إجراء العدوى في التجويف السلوي باستخدام الطريقة المفتوحة، عندما يتم عمل ثقب كبير نسبيًا في القشرة لإدخال المواد، أو الطريقة المغلقة، عندما تتم العدوى من خلال ثقب القشرة.

الأول منهم أكثر صدمة، والثاني أقل موثوقية، لأنه يتصرف بشكل أعمى، ليس من الممكن دائما إدخال إبرة في تجويف السلى.

تقنية العدوى المفتوحة:

1. توضع البيضة على حامل ويتم تعقيمها
قذيفة في منطقة نهاية حادة.

2. فوق مركز المجال الجوي في القشرة
باستخدام المقص، قم بقطع نافذة قطرها 2 سم (مثل
للعدوى على الغشاء المشيميائي).

3. قم بإزالة الورقة الداخلية للقشرة بعناية
الغشاء باستخدام الملقط، وكشف الجزء السفلي
الغشاء المشيمي.

استخدم المقص لقطع فتحة صغيرة
الغشاء المشيمائي السئائي في مكان لا توجد فيه أوعية دموية، ويتم إدخال ملاقط العين في القطع. يتم الإمساك بغشاء السلى باستخدام ملاقط ويتم سحب الكيس السلوي للخارج على سطح الغشاء المشيمائي السئائي.

5. تثبيت الغشاء السلوي في هذا الوضع،
تصيب تجويف السلى عن طريق الحقن 0.1-
0.2 مل من تخفيف الفيروس.

6. يتم إغلاق الثقب الموجود في القشرة بغطاء معقم.
أو تغطية الزجاج، وذلك باستخدام لإصلاحها و
ختم البيضة مع البارافين المنصهر.

يتم تحضين الأجنة المصابة لمدة يومين، ويتم التخلص من الأجنة الميتة خلال اليوم الأول (يتم إجراء الملاحظات من خلال نافذة في القشرة). بعد الفتح، تُحفظ الأجنة طوال الليل في الثلاجة عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.

تقنية فتح الجنين أثناء الإصابة في التجويف السلوي:

1. بعد تعقيم موقع التشريح القادم، قم بقطعه
قذيفة أعلى قليلا من حافة كيس الهواء.

2. يتم ثقب الغشاء المشيمائي السئائي
ماصة باستور وإزالة السائل السقاء.

3. الاستيلاء على الكيس الأمنيوسي بالملاقط وثقبه
غشائها بإبرة حقنة أو ماصة باستور و
يتم امتصاص السائل الأمنيوسي (من 0.5 إلى 1.5 مل). ش
الجنين المصاب، يجب أن يكون السائل غائما، في هذه الأثناء
مثل الجنين الطبيعي فهو شفاف.

4. يتم نقل السائل المأخوذ إلى أنبوب اختبار معقم، 0.1-
يتم تلقيح 0.3 مل منه في المرق للتحكم البكتريولوجي
العقم.

كان لإدخال طرق زراعة الفيروسات في أجنة الدجاج أهمية كبيرة في تطور علم الفيروسات. لتكاثر الفيروس، يتم استخدام أجنة الدجاج التي يتراوح عمرها من 7 إلى 12 يومًا، ويتم تحضينها في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية. والشرط الضروري للتطور السليم للجنين هو الحفاظ على رطوبة هواء معينة، والتي يمكن إنشاؤها عن طريق وضع وعاء به ماء في منظم الحرارة. تتم زراعة الفيروسات في أجنة الدجاج في أماكن مختلفة من الجنين المصاب:

1) على الغشاء المشيمي السقائي.

2) في التجويف السقاء.

3) في التجويف السلوي.

4) في كيس الصفار.

تتم إصابة أجنة الدجاج في صندوق باستخدام أدوات معقمة. قبل: يتم مسح أجنة الدجاج مرتين بقطعة قطن مبللة بالكحول.

عدوى الغشاء المشيمي السقاء. بعد تطهير البويضة، قم بقطع قطعة من القشرة بعناية من النهاية الحادة، وقم بإزالة غشاء القشرة السفلية - وهذا يكشف عن الغشاء المشيمي الطيوي. يتم تطبيق مادة معدية بكمية 0.1-0.2 مل على الغشاء المشيمي السقائي باستخدام حقنة أو ماصة باستور. بعد الإصابة، يتم إغلاق الحفرة بغطاء ويتم ملء الفجوة بينها وبين جنين الدجاج بالبرافين. على الجانب الآخر من البيضة، اكتب اسم المادة المعدية وتاريخ الإصابة بقلم رصاص بسيط.

العدوى في التجويف السلوي.يتم تنظير البويضة ويتم تحديد منطقة على الجانب الجانبي حيث يكون المشيماء السقاء خاليًا من الأوعية الدموية الكبيرة. تم تحديد هذه المنطقة بقلم رصاص. يتم وضع البيض على حامل في وضع أفقي، ويتم تطهيره ويتم ثقبه برمح معقم خاص. وقذيفة إلى عمق 2-3 ملم، يتم من خلالها إدخال إبرة تحتوي على مادة معدية على نفس المسافة مباشرة في التجويف السلوي. لمنع السائل المحقون من التدفق مرة أخرى، يتم إجراء ثقب أولاً فوق كيس الهواء. وبعد ذلك يتم ملء كلا الفتحتين بالبارافين.

العدوى في التجويف السقاء.تتم العدوى أيضًا في صندوق مظلل. يتم تحديد المجال الجوي، ويتم تطهير القشرة الموجودة فوق المجال الجوي ويتم إدخال إبرة حقنة تحتوي على مادة من خلال ثقب في القشرة باتجاه الجنين. إذا دخلت الإبرة التجويف السقاء، فسيتم ملاحظة إزاحة ظل الجنين. بعد الإصابة، يتم ملء الحفرة بالبارافين.

العدوى في كيس الصفار.يتم تطهير القشرة. يتم وضع البيضة على الحامل بحيث تكون النهاية الحادة إلى اليمين بحيث تكون علامة الصفار متجهة للأعلى. يتم عمل ثقب في المنتصف فوق غرفة الهواء. يتم إدخال إبرة المحقنة من خلال ثقب في القشرة في اتجاه أفقي حتى عمق 2-3 مم، والتي تدخل الكيس المحي. تدار المادة بحجم 0.2-0.3 مل. بعد إدخال المادة يتم تشميع الثقب.

تعتمد درجة الحرارة ومدة الحضانة على الخصائص البيولوجية للفيروس. يتم فحص البويضات المصابة يوميًا وتنظيرها للتأكد من صلاحية الجنين. إذا ماتت الأجنة في اليوم الأول، فعادة ما يكون السبب هو الصدمة أثناء العدوى. يتم فقس مثل هذا البيض من التجربة. يتم تحديد وجود الفيروس في الجنين المصاب من خلال التغيرات المميزة في الغشاء المشيمي السقائي لجنين الدجاج المصاب. يتم الكشف عن الفيروسات التي ليس لها نشاط هيمابوتيناتينج باستخدام RSC. للكشف عن الفيروس في السائل السقاء أو السائل الأمنيوسي للأجنة المصابة، يتم إجراء RGA.