Тахианы үр хөврөлд вирус тариалах. Дэгдээхэйний үр хөврөл дээр тариалах Цусны судсанд халдварлах CAO

Мэдэгдэж буй вирусуудын ихэнх нь дэгдээхэйний үр хөврөлд үржих чадвартай байдаг (Зураг 4). Үр хөврөлийг вирусын төрөл, халдварын арга, судалгааны зорилгоос хамааран 8-14 хоногтойд хэрэглэдэг. Томуугийн вирүсийг 9-10, салхин цэцэг өвчний эсрэг вакциныг 12, гахайн хавдарыг 7 хоногтой тахианы үр хөврөлд тариалж байна. Тахианы үр хөврөлд вирусын нөхөн үржихүй нь үр хөврөлийн янз бүрийн хэсэгт тохиолддог бөгөөд энэ нь вирусын тропизмын онцлогтой холбоотой байдаг. Тахианы үр хөврөлд вирус ургуулах аргыг үйлдвэрийн тариалалтад өргөн ашигладаг.

Тахианы үр хөврөлийн бүтэц, халдварын аргууд: 1 - амнион дахь; 2 - аллантоик хөндий рүү; 3 - шар уутанд. (Микробиологи ба дархлаа судлал. Воробьев А.А. - М. - 1999 засварласан).

Бүрхүүл эсвэл эхийн эд эстэй зэрэгцэн оршдог, үр хөврөл болон түүний хүрээлэн буй орчны хоорондын солилцооны газар болох хамгийн гадна талын үр хөврөлийн мембраныг нэрлэдэг. Хорион.Өндөг гаргадаг зүйлүүдийн хувьд chorion-ийн гол үүрэг нь амьсгалын замын хийн солилцоог хэрэгжүүлэх явдал юм. Хөхтөн амьтдын хувьд chorion нь амьсгалах, хооллох, ялгаруулах, шүүх, бодисын нийлэгжилтэнд оролцдог. Анхан шатны организмд chorion нь хоёрдогч мембран байдаг бол дэвшилтэт организмд энэ нь ургийн мембран юм. Chorion ба амнион хоорондын хөндий нь chorionamniotic юм.

Амнион(Грек Амнион), Амнион уут эсвэл Усны мембран - мөлхөгчид, шувууд, хөхтөн амьтдын үр хөврөлийн үр хөврөлийн мембрануудын нэг.

Хувьслын хувьд амнион нь усан орчноос гадуурх хөгжлийн явцад үр хөврөлийг хатахаас хамгаалах зорилгоор үүссэн. Тиймээс өндөглөдөг сээр нуруутан амьтдыг (мөлхөгчид ба шувууд), мөн хэвлээр явагчдаас гаралтай хөхтөн амьтдыг амниотууд ("Өндөгний бүрхүүлтэй амьтад") гэж ангилдаг. Сээр нуруутан амьтдын өмнөх анги ба дээд ангиуд (цефалокордат, циклостом, загас, хоёр нутагтан) усны орчинд өндөглөдөг тул усны бүрхүүл шаарддаггүй. Эдгээр ангийн амьтдыг анамнийн бүлэгт нэгтгэдэг. Амниотууд нь анамниагаас ялгаатай нь нөхөн үржихүйн болон эрт хөгжилд усны орчин шаарддаггүй тул амниотууд нь усны биетүүдтэй холбогддоггүй. Энэ бол амнионы хувьслын үүрэг юм.

Хөхтөн амьтдыг төрөх үед усны бүрхүүл хагарч, ус урсаж, нярай хүүхдийн бие дэх амнионы үлдэгдлийг ихэвчлэн "цамц" гэж нэрлэдэг бөгөөд энэ нь эрт дээр үеэс аз ба бусад мухар сүсгийн шинж тэмдэг байсаар ирсэн ( Тиймээс, ялангуяа "цамцтай төрсөн" хүмүүсийн тухай Оросын зүйр үг).

Аллантоис (Грек хэлнээс. allantoeid?s - хиам хэлбэртэй) - дээд сээр нуруутан амьтдын үр хөврөлийн амьсгалын эрхтэн; үр хөврөлийн хойд гэдэснээс үүсдэг үр хөврөлийн мембран. Үүнээс гадна аллантоис нь үр хөврөлийг хүрээлэн буй орчинтой хийн солилцох, шингэн хог хаягдлыг гаргахад оролцдог. Аллантуа нь бусад үр хөврөлийн мембран - амнион ба хорионтой хамт өндөр сээр нуруутан амьтад - хөхтөн, шувуу, хэвлээр явагчдын онцлог шинж юм.

Өндгөвчтэй шувууд болон хэвлээр явагчдад аллантоис нь үр хөврөлийн эргэн тойронд бүрхүүлийн хананы дагуу үүсдэг. Мезодерм гэж нэрлэгддэг гаднах давхаргадаа цусны судаснуудын өргөн сүлжээг бий болгож, гадаад орчинтой харьцдаг. Хөхтөн амьтдын хувьд аллантоис нь хүйн ​​хэсэг юм.

Хөгжиж буй тахианы үр хөврөлийг халдварлах хэд хэдэн арга байдаг: chorionallantoic мембран, аллантоик ба амнион хөндий, шар уут, үр хөврөлийн биед.

Chorionallantoic мембран дээрх халдвар нь мембран дээр товруу үүсгэдэг вирусыг (вакцин, салхин цэцэг, герпес симплекс вирус) тусгаарлах, тариалахад ашиглагддаг. Халдвар авахын өмнө өндөг нь овоскопоор тунгалаг, агаарын орон зай, хориоаллантоик мембраны хилийг харандаагаар дүрсэлсэн байдаг. Өндөгний гадаргууг агаарын орон зайн дээгүүр болон халдварын голомтод архи, согтууруулах ундаагаар арчиж, шатааж, иодоор эмчилж, агаарын уутны хөндийд нүх гаргадаг.

Халдварын голомтод бүрхүүлийн мембраныг гэмтээхгүйн тулд бүрхүүлийг зайлуулж, дараа нь хорионаллантоик мембраныг гэмтээхгүйн тулд богино ариутгасан зүүгээр цоолно. Агаарын дэрний хөндийн агаарыг сорж авдаг. Вирусын материалыг (0.05 - 0.2 мл) богино зүү эсвэл Пастерийн пипеткээр туберкулины тариураар хорионантоик мембранд хэрэглэнэ. Бүрхүүлийн нүхийг ариутгасан бүрхүүлтэй шил эсвэл ижил зүссэн бүрхүүлээр хааж, ирмэгийн дагуу хайлсан парафинаар дүүргэнэ. Халдвар авсан үр хөврөлийг тавиур дээр хэвтээ байрлуулж, термостатад өсгөвөрлөнө. Үр хөврөлийг инкубацийн 48 цагийн өмнө нээдэг. Халдвар авсан бүрхүүл дээр янз бүрийн хэлбэрийн цагаан тунгалаг толбо (товруу) олддог.

Аллантоик хөндийд халдвар. Аллантоид нэвтэрсэн вирус нь эндодермисийн эсүүдэд үржиж, дараа нь аллантоисын шингэн рүү шилждэг. Халдвар нь дараахь байдлаар явагддаг: агаарын камерын дээрх бүрхүүлд хусуур эсвэл хайчны үзүүрээр цоолж, дараа нь тариур бүхий зүүг босоо чиглэлд нүхээр оруулдаг. chorionallantoic мембран болон аллантоик хөндийд нэвтэрч, материалыг 0.1 мл-ийн эзэлхүүнтэй шахаж, нүхийг парафинаар дүүргэнэ.

Шар уутанд халдвар.Энэ зорилгоор 5-10 хоногийн настай үр хөврөлийг ашигладаг. Хамгийн түгээмэл хэрэглэгддэг халдварын хоёр арга байдаг. Эхнийх нь дагуу материалыг агаарын орон зайгаар нэвтрүүлдэг. Өндөгний голд нүх гаргаж, баруун талд нь мохоо үзүүртэй тавиур дээр байрлуулж, тариур дээр тавьсан зүүг босоо чиглэлд нүхээр хийж, зүү нь хорионаллантоик мембран, аллантоик мембранаар дамждаг. шар руу хөндий. Шар уутанд 0.1-0.5 мл вирус агуулсан материалыг тарьж болно. Халдвар авсны дараа бүрхүүлийн нүхийг парафинаар дүүргэж, үр хөврөлийг термостатад байрлуулна. Хоёрдахь аргын дагуу шар нь байрлах талын агаарын зайны хил дээр (үр хөврөлийн эсрэг тал) бүрхүүлийн цоорхойг хийж, халдварт бодис тарьдаг. Зүүний чиглэл нь өндөгний төв рүү чиглэсэн байх ёстой.

Вирусын материалаар халдварласан тахианы үр хөврөлийг нэвтрүүлсэн вирусын шинж чанараас хамааран 2-3 хоногийн турш инкубаторт байрлуулна. Өвчтөнөөс авсан дээжээс вирус үүсгэхийн тулд (жишээлбэл, томууг оношлоход хамар залгиурын арчдас) тахианы үр хөврөл сайн орчинг бүрдүүлдэг. Хориоаллантоик мембраны эдэд гарсан өөрчлөлтийн төрлөөр бид ямар вирустай тулгараад байгааг шууд тодорхойлох боломжтой. Салхин цэцэг, герпес вирус нь маш өвөрмөц өөрчлөлтийг өгдөг. Зарим вирус нь дэгдээхэйний үр хөврөлийн янз бүрийн эдэд маш эрчимтэй үржиж, вирусын өвчний лабораторийн оношлогоонд шаардлагатай вирусын эсрэгтөрөгчийг бэлтгэх эхлэлийг өгдөг. Дэгдээхэйний үр хөврөлд үржсэн вирусыг арван найман төрлийн вакцинжуулалтын эх үүсвэр болгон ашигласан.

Орчин үеийн вирус судлалын лабораторид маш өргөн тархсан эсийн өсгөвөрийн эерэг талуудыг үл харгалзан дэгдээхэйний үр хөврөл олон тохиолдолд үндсэн ач холбогдлоо хадгалсаар ирсэн бөгөөд одоо ч ажлын сонгодог материал болж байна. Тахианы үр хөврөл дэх вирусын шинж тэмдэг нь үр хөврөлийн үхэл, аллантоик эсвэл амнион шингэн бүхий шилэн дээр эерэг гемагглютинацийн шинжилгээ, chorion-allantoic мембран дээр голомтот гэмтэл ("товруу") үүсэх замаар хийгддэг. RHA-д.

Хүн, амьтныг халдварладаг олон вирус нь дэгдээхэйний үр хөврөлд их бага хэмжээгээр үржиж чаддаг. Өтгөн бүрхүүл байгаа нь үр хөврөлийг гадаад орчноос бичил биетний нэвтрэлтээс хамгаалдаг.

Тахианы үр хөврөлд вирүсийг өсгөвөрлөх аргыг вируст халдварын лабораторийн оношлогоо, вирусын эсрэг вакцин, оношлогооны бэлдмэлийг үйлдвэрлэхэд ашигладаг. Гэхдээ энэ арга нь сул талуудтай: 1) вирусын халдвар авсны дараа үр хөврөлд тохиолддог эмгэг өөрчлөлтийг динамикаар ажиглах боломжгүй; 2) вирусын халдвартай үр хөврөлийг нээхэд ихэвчлэн харагдахуйц өөрчлөлтүүд илэрдэггүй бөгөөд бусад вирус судлалын аргуудыг (жишээлбэл, гемагглютинацийн урвал) ашиглан эд, үр хөврөлийн шингэнд вирус байгаа эсэхийг илрүүлэх шаардлагатай байдаг. ); 3) тахианы үр хөврөлд тариалах арга нь бүх вируст тохирохгүй. Байгаа дутагдалтай хэдий ч энэ арга нь харьцангуй энгийн, тохиромжтой, хямд бөгөөд вирус судлалын судалгаанд өргөн хэрэглэгддэг. Энэ нь ортомиксовирус, герпесвирус, поксвирустай ажиллахад хамгийн чухал юм.

1.3.1. Тахианы үр хөврөлийн бүтэц

Тахианы үр хөврөл нь шохойн бүрхүүлээр бүрхэгдсэн байдаг - бүрхүүлийн бүрхүүл нь дотроос нь залгадаг. Өндөгний мохоо төгсгөлд энэ нь хуваагдаж, агаарын орон зайг хаадаг. Бүрхүүлийн мембраны доор хорион лантоик мембран байдаг; өндөгний мохоо төгсгөлд бүрхүүлийн мембраны дотор талын дагуу агаарын орон зайг хаадаг; энэ мембран нь цусны судсаар баялаг бөгөөд үр хөврөлийн амьсгалын эрхтний үүрэг гүйцэтгэдэг. Дотор талаас нь аллантосын хөндий нь түүний хажууд байрладаг бөгөөд энэ нь гадагшлуулах эрхтэн бөгөөд үр хөврөлийг хатах, гэмтэхээс хамгаалдаг. Аллантоик хөндий нь амнион шингэнээр дүүрсэн амнион хөндийд байрлах үр хөврөлийг хүрээлдэг. Үр хөврөл нь шар утсаар дамжин шим тэжээлийн гол эх үүсвэр болох шар хүүдийтэй холбогддог.

Хөгжиж буй тахианы үр хөврөлийн биед вирусыг амжилттай тариалахын тулд тодорхой температурын горим (36 0 -38 0), чийгшил (50-70%), түүнчлэн хангалттай агааржуулалт шаардлагатай. Тэд вирусын төрөл, халдварын аргаас хамааран 6-13 хоног хүртэл өсгөвөрлөсөн тодорхой насны тахианы үр хөврөлийг халдварладаг. Үүнийг бэлтгэх шаардлагатай: өндөгний тавиур, архи, иод бүхий хуруу шил, ариутгасан парафин бүхий туршилтын хоолой, нөмрөг, ариутгасан хөвөн, самбай уут, цаасаар ороосон ариутгасан аяга, ариутгасан тариур, зүү, хясаа, зүсэх зүү. Багаж хэрэгслийг архитай шилэнд хийж, бүхэл бүтэн ажлын явцад байрлуулж, заль мэхийн өмнө тэдгээрийг шатаагч дөлөөр шатааж нэмэлт ариутгана. Ажлын өмнө гараа сайтар угааж, самбай маск өмсөхийг зөвлөж байна.

Амьдрах чадвартай үр хөврөлийг овоскопоор тунгалаг өсгөвөрлөсөн өндөгөөр сонгож авдаг. Амьдрах чадвартай үр хөврөл нь хөдөлгөөнтэй, мембраны цусны судаснууд цусаар дүүрдэг. Сонгосон өндөгнүүд нь мохоо төгсгөлд (эсвэл өндөгний хажуу талд) болгоомжтой ариутгагддаг: бүрхүүлийг спиртээр арчиж, иодоор түрхэж, дахин архи, согтууруулах ундаагаар эмчилж, галладаг.

1.3.2. Хориоаллантоик мембран дээр дэгдээхэйний үр хөврөлийн халдвар

Халдварын хувьд 10-12 хоногийн настай тахианы үр хөврөлийг ашигладаг. Халдварын үндсэн үе шатууд:

1. Өндөгийг босоо байрлалтай тавиур дээр байрлуулсан бөгөөд ингэснээр агаарын дэр нь дээд талд, бүрхүүл нь өндөгний мохоо төгсгөлд ариутгагддаг.

2. Агаарын уутны төвөөс дээш бүрхүүлийг зүсэх зүүгээр цоолдог.

3. Үүссэн нүхэнд хайчны мөчрийг оруулж, бүрхүүлийн цонхыг 1.5 см орчим диаметртэй хайчилж авдаг.

4. Нүхний дундуур бүрхүүлийн дотоод хуудсыг зүүгээр болгоомжтой урж, жижиг талбайд (0.5-1 см 2) хальслана.

5. Хориоаллантоик мембран нь Пастерийн пипетк буюу тариураар 0.1-0.2 мл вирус агуулсан материалыг түрхэхэд халдварладаг.

6. Бүрхүүлийн цонхыг тусгай уян хальс эсвэл ариутгасан бүрхүүлийн шилээр хааж, хайлсан парафинаар бэхлэнэ.

Халдвар авсан үр хөврөлийг термостатад босоо байрлалд байрлуулж, 2-3 хоногийн турш өсгөвөрлөсний дараа дараах дүрмийн дагуу задлан шинжилгээг хийнэ.

1. Агаарын зай дээд талд байхаар өндөгийг тавиур дээр байрлуулж, нээлтийн талбайг ариутгана.

2. Ариутгасан хайчаар агаарын хилийн дагуу бүрхүүлийг таслана.

3. Химийн хясаа ашиглан бүрхүүлийг хилийн дагуу арилгана. Ил гарсан chorioallantoic мембран нь бүрхүүлийн ирмэгийн дагуу зүсэгдсэн байна. Үүссэн нүхээр өндөгний бүх агуулгыг аяга эсвэл тавиур руу хийнэ.

4. Бүрхүүлийн дотор үлдсэн chorionallantoic мембраныг хясаагаар болгоомжтой авч, давстай ариутгасан аяганд хийнэ. Энд түүнийг шулуун болгож, аягыг харанхуй дэвсгэр дээр байрлуулж өөрчлөлтийг судалдаг.

Хориоаллантоик мембранаас вирус агуулсан материалыг олж авахын тулд хайчаар буталж, дараа нь кварцын шилтэй зуурмаг дээр нунтаглаж, давсны уусмал нэмнэ. Үүссэн суспензийг 2000 эрг / мин-ээр 10-15 минутын турш центрифуг хийж, дээд давхаргыг вирус агуулсан материал болгон ашигладаг.

Цагаан будаа. 3. Тахианы үр хөврөлийн халдвар

1.3.3. Аллантоик хөндийд халдвар

Халдвар авахын тулд 10-11 хоногийн настай үр хөврөлийг авна. Халдварын үндсэн үе шатууд:

1. Өндөгийг мохоо төгсгөлтэй тавиур дээр байрлуулж, бүрхүүлийг агаарын зайнаас дээш ариутгана.

2. Мохоо үзүүрийн голд бүрхүүлийг зүсэх зүүгээр цоолоно.

3. Вирусын шингэрүүлэлт агуулсан тариурын зүүг нүхэнд хийнэ. Зүүг босоо чиглэлд агаарын дэрний түвшнээс 2-3 мм-ээр урагшлуулж, дараа нь 0.1-0.2 мл материалыг тарина.

4. Бүрхүүлийн нүхийг хайлсан ариутгасан парафинаар битүүмжилнэ.

Халдвар авсан үр хөврөлийг термостатад ихэвчлэн 2 хоног байлгадаг. Өндөгийг нээхээс өмнө 4 0 С-т хөргөгчинд хонуулна. Нээх ажлыг дараах дарааллаар гүйцэтгэнэ.

1. Өндөгийг тавиур дээр байрлуулж, агаарын дэр нь дээд талд, бүрхүүл нь дээр нь ариутгагддаг.

2. Хайч ашиглан бүрхүүлийг агаарын орон зайн хилээс бага зэрэг таслав.

3. Бүрхүүлийн мембраныг хясаагаар болгоомжтой авч, дараа нь савгүй газарт хориоаллантоик мембраныг Пастерийн пипеткээр цоолж, аллантой шингэнийг сорно.

4. Аллантоик шингэнийг ариутгасан туршилтын хоолойд хийж, нэг хэсгийг нь шөлөнд тарьж нян судлалын үргүйдлийн эсэхийг шалгана.

Үр хөврөлийг вирусын төрөл, халдварын аргаас хамааран 8-14 хоногтойд хэрэглэдэг. Тахианы үр хөврөлийн нөхөн үржихүй нь үр хөврөлийн янз бүрийн хэсэгт тохиолддог Халдвар авах арга: хориоаллантой мембран, аллотоз ба амнион мембран, шар хүүдий, үр хөврөлийн биед.

29. Эд эсийн өсгөвөр.

Бэлтгэх техникээс хамааран 3 төрлийн эс байдаг.

Нэг давхарга нь химийн хувьд төвийг сахисан шилний гадаргуу дээр моно давхарга хэлбэрээр үржих чадвартай;

Түдгэлзүүлэх, шим тэжээлийн орчны бүх эзлэхүүн дэх размн-I;

Эрхтэн - анхны бүтцийг хадгалсан эрхтэн, эд эсийн бүхэл бүтэн хэсгүүд.

Анхдагч эсийн өсгөвөрийг бэлтгэх нь хэд хэдэн үе шатаас бүрдэнэ: эдийг нунтаглах, эсийг салгах, үүссэн суспензийг трипсинээс угаах.

Заалт:

- цитопатик үйлдэл - микроскопоор харагдах эсийн морфологийн өөрчлөлт, шилнээс татгалзах хүртэл.

Вирусын нэгдэл нь цитоплазм эсвэл эсийн цөмд вирусын хэсгүүдийн хуримтлал эсвэл вирусын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг салгах явдал юм.

Товруу нь доройтсон эсүүдээс бүрдэх хязгаарлагдмал газар нутаг юм. Тэд толботой эсийн дэвсгэр дээр цайвар толбо хэлбэрээр харагдана.

өнгөт дээж

Гемадсорбци гэдэг нь эсийн өсгөвөрт цусны улаан эсийг гадаргуу дээрээ шингээх чадвар юм.

Хөндлөнгийн оролцоо.

30. Бактериофагийн ангилал, химийн найрлага.

Бактериофагууд нь бактерийн эсүүдэд нэвтэрч, тэдгээрийг уусгах чадвартай бактерийн вирус юм. Тэдгээр нь зулзагануудын хэлбэртэй, зарим нь шоо утас шиг хэлбэртэй байдаг. Эдгээр нь икосаэдр толгой ба сүүлний процессоос бүрдэнэ. Каудын процессын дотор цилиндр хэлбэртэй саваа, гадна талд нь бүрээстэй, процесс нь богино нуруутай зургаан өнцөгт суурь хавтангаар төгсдөг. Фагууд нь нуклейн хүчил ба уурагаас тогтдог. Сперматозон хэлбэрийн фагуудад хоёр судалтай ДНХ нь толгойн дотор мушгиа хэлбэрээр нягт бэхлэгдсэн байдаг. Уургууд нь бүрхүүлийн нэг хэсэг юм. Бүтцийн уургуудаас гадна фагийн эстэй харилцан үйлчлэхэд оролцдог нуклейн хүчил, ферментийн уурагтай холбоотой дотоод уураг олдсон.

31. Хортой фагууд болон тэдгээрт мэдрэмтгий бактерийн эсийн харилцан үйлчлэлийн үйл явц.

Хортой фагууд зөвхөн литик циклээр л тоогоор нэмэгддэг. Хортой бактериофаг эстэй харьцах үйл явц нь хэд хэдэн үе шатаас бүрдэнэ: бактериофаг эсэд шингээх, эсэд нэвтрэх, фагийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн биосинтез ба тэдгээрийн угсралт, эсээс бактериофаг гарах.

Эхлээд бактериофагууд нь бактерийн эсийн гадаргуу дээрх фагийн өвөрмөц рецепторуудтай холбогддог. Фагийн сүүл нь түүний төгсгөлд байрлах ферментийн тусламжтайгаар (ихэвчлэн лизоцим) эсийн мембраныг уусгаж, агшиж, толгойд агуулагдах ДНХ нь эсэд тарьдаг бол бактериофагийн уургийн бүрхэвч гадна талд үлддэг. . Тарьсан ДНХ нь эсийн бодисын солилцоог бүрэн өөрчлөхөд хүргэдэг: бактерийн ДНХ, РНХ, уургийн нийлэгжилт зогсдог. Бактериофагийн ДНХ нь өөрийн транскриптаза ферментийг ашиглан хуулбарлаж эхэлдэг бөгөөд энэ нь бактерийн эсэд нэвтэрсний дараа идэвхждэг. Эхлээд эрт, дараа нь хожуу мРНХ-ууд нийлэгждэг бөгөөд тэдгээр нь эзэн эсийн рибосомд орж, эрт (ДНХ полимеразууд, нуклеазууд) ба хожуу (капсид ба сүүлний уураг, лизоцим, АТФаза ба транскриптаза) бактериофагийн уургууд нийлэгждэг. Бактериофагийн ДНХ-ийн хуулбар нь хагас консерватив механизмын дагуу явагддаг бөгөөд өөрийн ДНХ полимеразуудын оролцоотойгоор явагддаг. Хожуу уургийн нийлэгжилт, ДНХ-ийн репликаци дууссаны дараа эцсийн үйл явц явагдана - фагийн тоосонцор боловсорч гүйцсэн эсвэл фагийн ДНХ-ийн бүрхүүлийн уурагтай нэгдэж, боловсорч гүйцсэн халдварт фагийн тоосонцор үүсдэг.

Choriallantoic мембран дээрх халдвар.Энэ арга нь хамгийн түгээмэл хэрэглэгддэг аргуудын нэг юм. Үүний гол давуу тал нь олон тооны вирусууд chorioallantoic мембран дээр үржихдээ түүний өвөрмөц өөрчлөлтийг үүсгэж, янз бүрийн морфологийн цагаан товруу хэлбэрээр гэмтэл үүсгэдэг.

10-12 хоногтой үр хөврөлийг халдварын үед хэрэглэдэг. Ихэнхдээ chorioallantoic мембран нь агаарын уутны дээгүүр эсвэл өндөгний хажуугийн бүрхүүлд нүх гаргах замаар нэвтэрдэг.

Агаарын орон зайн хажуугийн хорионаллантоик мембран дээрх халдварын үндсэн үе шатууд:

1. Өндөг нь босоо байрлалтай тавиур дээр байрладаг
агаарын дэр дээшээ байхаар)"; гүйцэтгэнэ
өндөгний мохоо төгсгөлд бүрхүүлийг болгоомжтой ариутгана.

2. Агаарын уутны төвөөс дээш бүрхүүлийн хатгалт хийдэг
задлах зүү ашиглан.

3. Үүссэн нүхэнд хайчны салбарыг оруулах ба
1.5 см диаметртэй бүрхүүлийн цонхыг хайчилж ав. (Үүнд
бүрхүүлийн хэсгүүдийг өндөг дотор оруулахыг бүү зөвшөөр).

4. Хийсэн нүхээр дотор талын хуудас харагдана
бүрхүүлийн мембран, энэ нь нүдээр болгоомжтой урагдсан байдаг
хясаа эсвэл зүүгээр жижиг хэсэгт хуулж ав (0.5-1
см 2), chorioallantoic мембраныг ил гаргах.

5. Chorioallantoic мембраны халдварыг үүсгэдэг
түүнд 0.1-0.2 мл вирус агуулсан материал түрхэж
(жишээ нь, vaccinia вирус) Пастерийн пипетк ашиглан
эсвэл тариур.

6. Бүрхүүлийн цонхыг тусгай уян харимхайгаар хаадаг
хальс, ариутгасан бүрхүүл эсвэл шил
cap. Шил ба малгайг бүрхүүлд бэхлэх зориулалттай
хайлсан парафин хэрэглэнэ.

Халдвар авсан үр хөврөлийг термостатад босоо байрлалд байрлуулж, 2-3 хоногийн турш өсгөвөрлөсний дараа дараах дүрмийн дагуу задлан шинжилгээг хийнэ.

1. Өндөг нь агаарт байхаар тавиур дээр байрладаг
зай нь дээд давхарт байсан, газар ариутгаж байна
зохих боловсруулалт хийснээр удахгүй болох задлан шинжилгээ
архи, иод.

2. Кино, таглаа, таглааг авсны дараа
ариутгасан хайч нь агаарын хилийн дагуу бүрхүүлийг таслав
зай.

3. хясаа ашиглан бүрхүүлийг арилгана.
Хориоаллантоик мембран ил гарсан (үүн дээр
харагдахуйц өөрчлөлтүүд) бүрхүүлийн ирмэгийн дагуу зүсэгдсэн байна. дамжуулан
үүссэн нүхэнд өндөгний бүх агуулгыг аяганд хийнэ
эсвэл тавиур.

4. Бүрхүүлийн дотор үлдсэн choriallantoic
бүрхүүлийг хясаагаар болгоомжтой авч, дотор нь байрлуулна
давстай ариутгасан аяга. Энд түүнийг
аягыг харанхуй газар байрлуулж шулуун, өөрчлөлтийг судлах
дэвсгэр.

Хориоаллантоик мембранаас вирус агуулсан материалыг олж авахын тулд хайчаар буталж, дараа нь кварцын шилтэй зуурмаг дээр нунтаглаж, давсны уусмал нэмнэ. Үүссэн суспензийг 2000 эрг / мин-д 10-15 минутын турш центрифуг хийж, дээд давхаргыг хэрэглэнэ! вирус агуулсан материал (бактерийн бохирдол байхгүй эсэхийг заавал шалгах шаардлагатай).

Аллантоик хөндийд халдвар.Энэ арга

энгийн байдлаараа ялгардаг бөгөөд энэ нь вирусыг их хэмжээгээр хуримтлуулахад хувь нэмэр оруулдгаараа үнэ цэнэтэй юм. Халдварын хувьд үр хөврөлийг ихэвчлэн 10 хоногтойд нь авдаг. Аллантой хөндийд халдварын үндсэн үе шатууд:

}. Өндөгийг мохоо төгсгөлтэй тавиур дээр байрлуулж, бүрхүүлийг агаарын зайнаас дээш ариутгана.

2. Мохоо үзүүрийн голд бүрхүүлийн хатгалт хийдэг
задлах зүү ашиглан.

3. Шингэрүүлсэн бодис агуулсан тариурын зүүг нүхэнд хийнэ
вирус (жишээлбэл, томуугийн вирус). Зүүг дотор нь урагшлуулна
босоо чиглэл нь агаарын түвшнээс 2-3 мм-ээс доош
уутанд хийгээд дараа нь ОД-0.2 мл материалыг тарина.

4. Бүрхүүлийн нүх нь битүүмжлэгдсэн байна
хайлсан ариутгасан парафин.

Халдвар авсан үр хөврөлийг термостатад ихэвчлэн 2 хоног байлгадаг. Нээхээс өмнө өндөгийг 4 ° -ын температурт хөргөгчинд шөнийн турш байрлуулна. Нээлтийн ажиллагааг дараах дарааллаар гүйцэтгэнэ.

1. Өндөгийг тавиур дээр байрлуулсан бөгөөд агаарын дэр нь дээд талд, бүрхүүл нь дээр нь ариутгагддаг;

2. Хайч ашиглан бүрхүүлийг бага зэрэг өндөрт зүснэ
агаарын орон зайн хил хязгаар.

3. Дараа нь хясаатай хясаа болгоомжтой арилгана
яагаад chorioallantoic мембраныг Пастерээр цоолдог вэ?
судас байхгүй газарт пипеткээр соруулж, аллантоикийг сорно
шингэн (энэ нь 5-6 мл залгах чадвартай).

4. Аллантой шингэнийг ариутгасан шингэнд шилжүүлнэ
туршилтын хоолой, нэг хэсгийг нь шалгахын тулд шөлөнд тарьдаг
нян судлалын үргүйдэл.

Томуугийн вирүс, түүнчлэн гахайн хавдар, вакциныг тариалахад аллантогийн хөндийд халдварын аргыг ихэвчлэн ашигладаг.

Амнион хөндий дэх халдвар

Энэ аргыг гүйцэтгэхэд илүү төвөгтэй бөгөөд өмнөх аргуудаас арай бага ашиглагддаг. Үүний онцлог нь зарим пневмотроп вирус (жишээлбэл, томуугийн вирус, гахайн хавдар) халдвар авсан үед сүүлийнх нь зөвхөн амнион мембраны эсүүдэд төдийгүй үр хөврөлийн амьсгалын зам, уушигны эдэд үрждэг бөгөөд халдвар авсан шингэн байдаг. нэвтэрдэг. 7-12 хоногтой үр хөврөлийг халдварын үед хэрэглэдэг. Амнион хөндийд халдварыг задгай аргаар, материалыг нэвтрүүлэхийн тулд бүрхүүлд харьцангуй том нүх гаргах эсвэл бүрхүүлийн цооролтоор халдвар авах үед хаалттай аргаар хийдэг.

Тэдний эхнийх нь илүү гэмтэлтэй, хоёр дахь нь найдвартай биш, учир нь сохроор ажилладаг тул амнионы хөндийд зүү оруулах боломжгүй байдаг.

Нээлттэй халдварын техник:

1. Өндөгийг тавиур дээр тавьж, ариутгана
мохоо төгсгөлийн хэсэгт бүрхүүлүүд.

2. Бүрхүүлийн агаарын орон зайн төвөөс дээш
Цонхыг хайчаар 2 см хөндлөн огтолж ав
chorioallantoic мембран дээрх халдварын хувьд).

3. Бүрхүүлийн дотоод навчийг болгоомжтой арилгана
хясаатай бүрхүүл, сэдвийг ил гаргах
choriallantoic мембран.

Жижиг нүхийг хайчилж ав
цусны судас байхгүй газарт choriallantoic мембран, нүдний хясаа зүсэлтэнд оруулдаг. Амнион мембраныг хясаагаар барьж, амнион уутыг chorioallantoic мембраны гадаргуу дээр гаргаж авдаг.

5. Энэ байрлалд амнион мембраныг барьж,
амнионы хөндийд халдвар үүсгэж, тариурыг 0.1-ээр нэвтрүүлнэ.
0.2 мл вирусын шингэрүүлэлт.

6. Бүрхүүлийн нүхийг ариутгасан малгайгаар хаадаг
эсвэл хучих хуудас, тэдгээрийн бэхэлгээний зориулалтаар ашиглах ба
хайлсан парафин бүхий өндөгийг битүүмжлэх.

Халдвар авсан үр хөврөлийг 2 өдрийн турш өсгөвөрлөж, эхний өдөр нас барсан хүмүүсийг устгана (бүрхүүл дэх цонхоор ажиглалт хийдэг). Нээлтийн дараа үр хөврөлийг хөргөгчинд 4 градусын температурт шөнийн турш хадгална.

Амнион хөндийд халдвар авах үр хөврөл нээх арга:

1. Удахгүй болох задлан шинжилгээний газрыг ариутгасны дараа таслав
агаарын уутны ирмэгээс бага зэрэг дээгүүр бүрхүүл.

2. Хориоаллантоик мембраныг цоолох
Пастерийн пипеткээр ба аллантой шингэнийг зайлуулна.

3. Амнион уутыг хясаагаар шүүрч авах, цоолох
түүний бүрхүүл нь тариурын зүү эсвэл Пастерийн соруур болон
амнетик шингэнийг сорж авдаг (0.5-аас 1.5 мл хүртэл). At
халдвартай үр хөврөлийн шингэн нь үүлэрхэг байх ёстой
жирийн үр хөврөл шиг тунгалаг байдаг.

4. Авсан шингэнийг ариутгасан туршилтын хоолойд хийнэ, 0.1-
Үүнээс 0.3 мл-ийг шөлөнд тарьж нян судлалын эсрэг тэмцдэг
үргүйдэл.

Вирус судлалын хөгжилд тахианы үр хөврөлд вирус тариалах аргыг нэвтрүүлэх нь чухал ач холбогдолтой байв. Вирусыг нөхөн үржихийн тулд 7-12 хоногтой тахианы үр хөврөлийг 37 хэмийн температурт термостатад өсгөвөрлөнө. Үр хөврөлийг зөв хөгжүүлэхэд шаардлагатай нөхцөл бол тодорхой агаарын чийгшлийг дагаж мөрдөх явдал юм. устай савыг термостатад байрлуулах замаар. Тахианы үр хөврөлд вирус тариалах нь үр хөврөлийн янз бүрийн газарт халдвар авсан байдаг.

1) chorion-allantoic мембран дээр;

2) аллантоын хөндийд;

3) амнион хөндий рүү;

4) шар уутанд хийнэ.

Тахианы үр хөврөлийн халдварыг ариутгасан багаж ашиглан хайрцагт хийдэг. Халдварын өмнө тахианы үр хөврөлийг согтууруулах ундаагаар норгосон хөвөн арчдасаар хоёр удаа арчина.

Chorion-allantoic мембран дээрх халдвар. Халдваргүйжүүлсний дараа өндөгийг мохоо төгсгөлөөс нь хясааны хэсгийг сайтар таслаж, бүрхүүлийн мембраныг арилгадаг - энэ нь chorion-allatiois бүрхүүлийг илрүүлдэг. 0.1-0.2 мл хэмжээтэй халдварт бодисыг тариур эсвэл Пастерийн пипеткээр chorion-allantoic мембранд хэрэглэнэ. Халдварын дараа нүхийг таглаагаар хааж, тахианы үр хөврөлийн хоорондох зайг парафинаар дүүргэнэ. Өндөгний нөгөө талд халдварт бодисын нэр, халдвар авсан огноог энгийн харандаагаар бичдэг.

Амнион хөндий дэх халдвар.Өндөг нь өндгөвчтэй, хажуу талдаа chorion-allantois нь том судасгүй байдаг газрыг сонгоно. Энэ хэсгийг харандаагаар тэмдэглэв. Өндөгийг тавиур дээр хэвтээ байрлалд байрлуулж, халдваргүйжүүлж, тусгай ариутгасан жадаар нүх гаргадаг. Тэгээдбүрхүүлийг 2-3 мм-ийн гүнд байрлуулж, халдвартай материал бүхий зүүг ижил зайд амнион хөндийд шууд оруулдаг. Тарьсан шингэнийг буцааж урсахаас сэргийлэхийн тулд эхлээд агаарын уутны дээгүүр хатгалт хийдэг. Үүний дараа хоёр нүхийг парафинаар дүүргэнэ.

Аллантоик хөндийд халдвар.Халдварыг мөн сүүдэртэй хайрцагт хийдэг. Агаарын орон зайг тэмдэглэж, агаарын зайн дээрх бүрхүүлийг халдваргүйжүүлж, материалтай тариурын зүүг бүрхүүлийн нүхээр үр хөврөл рүү чиглүүлнэ. Хэрэв зүү нь аллантосын хөндийд орсон бол үр хөврөлийн сүүдэрт шилжилт ажиглагдаж байна. Халдварын дараа нүхийг парафинаар дүүргэнэ.

Халдвар, шар уутанд.Бүрхүүлийг халдваргүйжүүлдэг. Өндөгийг мохоо үзүүрийг баруун тийш нь тавиад шар өнгийн тэмдэг нь дээшээ харуулна. Төв хэсэгт байрлах агаарын камерын дээгүүр нүх цоолборлодог. Бүрхүүлийн бүрхүүлийн нүхээр хэвтээ чиглэлд 2-3 мм-ийн гүнд тариурын зүү оруулдаг бөгөөд энэ нь шар уутанд ордог. Материалыг 0.2-0.3 мл-ийн хэмжээгээр тарина. Материалыг нэвтрүүлсний дараа нүхийг лаваар бүрсэн байна.

Температурын горим ба инкубацийн үргэлжлэх хугацаа нь вирусын биологийн шинж чанараас хамаарна. Өвчтэй өндөгийг өдөр бүр шалгаж, үр хөврөлийн амьдрах чадварыг шалгахын тулд өндөгний дурангийн шинжилгээ хийдэг. Хэрэв үр хөврөл эхний өдөр үхдэг бол үүний шалтгаан нь ихэвчлэн халдварын үед гэмтэл байдаг. Ийм өндөгийг туршлагаас олж авдаг. Халдвар авсан үр хөврөлд вирус байгаа эсэх нь халдвар авсан тахианы үр хөврөлийн chorion-allantoic мембран дахь онцлог өөрчлөлтөөр тодорхойлогддог. Гемагпотинжуулах идэвхгүй вирусыг RSK ашиглан илрүүлдэг. Халдвар авсан үр хөврөлийн аллантоик эсвэл амнион шингэн дэх вирусыг илрүүлэхийн тулд RHA байрлуулна.