كم من الوقت بعد الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية سيظهر اختبار الدم، والتوقيت، والنتائج، وأنواع الاختبارات. مبادئ استخدام تشخيص PCR لفيروس نقص المناعة البشرية PCR لفيروس نقص المناعة البشرية حيث يمكنك الحصول عليه

وصف

طريقة التحديد التحديد الكمي، PCR مع الكشف في الوقت الحقيقي.

المواد قيد الدراسة بلازما الدم (EDTA)

زيارة منزلية متاحة

تحديد فيروس نقص المناعة البشرية من النوع 1 RNA في بلازما الدم بواسطة PCR مع الكشف في الوقت الحقيقي. تم إجراء الدراسة باستخدام معدات من هوفمان-لاروش (سويسرا) باستخدام تقنية موحدة مع إعداد العينات الآلي.

دراسة تركيز الحمض النووي الريبي لفيروس نقص المناعة البشرية من النوع 1 في الدم، والذي يستخدم للتنبؤ ومراقبة فعالية العلاج.

فيروس نقص المناعة البشرية (HIV) هو العامل المسبب لمتلازمة نقص المناعة المكتسب (الإيدز). يمكن أن تنتقل عدوى فيروس نقص المناعة البشرية عن طريق الاتصال الجنسي، عن طريق الدم ومنتجات الدم الملوثة، أو من الأم المصابة إلى جنينها. بعد مرور ما بين 3 إلى 6 أسابيع من الإصابة بالعدوى، عادة ما تتطور متلازمة حادة قصيرة الأمد، وتتميز بأعراض تشبه أعراض الأنفلونزا ومستويات عالية من تفير الدم في الدم المحيطي. في معظم الحالات، تتطور الاستجابة المناعية الخاصة بفيروس نقص المناعة البشرية وانخفاض في تفير الدم في البلازما، عادة خلال 4 إلى 6 أسابيع بعد ظهور الأعراض. بعد الانقلاب المصلي (ظهور أجسام مضادة محددة)، تبدأ مرحلة مستقرة سريريًا بدون أعراض، والتي يمكن أن تستمر لسنوات. تتميز الفترة الخالية من الأعراض بمستوى منخفض من تفير الدم المستمر في البلازما وانخفاض تدريجي في مستويات الخلايا الليمفاوية التائية CD4 +، مما يؤدي لاحقًا إلى تطور نقص المناعة الشديد والعدوى الانتهازية المتعددة وتولد الأورام والموت. في الأشخاص الذين ثبتت إصابتهم بعدوى فيروس العوز المناعي البشري -1، يُستخدم القياس الكمي لمستوى الحمض النووي الريبي لفيروس العوز المناعي البشري -1 في الدم بغرض تشخيص ومراقبة العلاج المضاد للفيروسات القهقرية.

المؤشرات التحليلية:

الخصوصية السريرية للاختبار: 100%، بفاصل ثقة 99.6-100%.

حساسية الاختبار: من 20 نسخة/مل.

نطاق الاختبار الخطي: 20 – 1*10 7 نسخ/مل

يتم تحليل الأنواع الفرعية للمجموعة M وO (HIV-1).

مؤشرات للاستخدام

تم تصميم الاختبار للاستخدام في إدارة المرضى المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية -1، بالتزامن مع البيانات السريرية والعلامات المخبرية الأخرى لتطور المرض. يُستخدم الاختبار للتنبؤ (استنادًا إلى مستويات الحمض النووي الريبوزي (HIV-1) الأساسية) أو لمراقبة فعالية العلاج المضاد للفيروسات القهقرية (استنادًا إلى التغيرات في مستويات الحمض النووي الريبي (HIV-1) في البلازما على مدار العلاج المضاد للفيروسات القهقرية).

تحذير: الاختبار ليس مخصصًا لفحص فيروس نقص المناعة البشرية -1 في الدم ومنتجات الدم أو للتشخيص المؤكد للإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية -1.

تفسير النتائج

يحتوي تفسير نتائج البحث على معلومات للطبيب المعالج وليس تشخيصًا. لا ينبغي استخدام المعلومات الواردة في هذا القسم للتشخيص الذاتي أو العلاج الذاتي. يقوم الطبيب بإجراء تشخيص دقيق باستخدام نتائج هذا الفحص والمعلومات الضرورية من مصادر أخرى: التاريخ الطبي، نتائج الفحوصات الأخرى، إلخ.

وحدات القياس: كمية فيروس نقص المناعة البشرية المكتشف من النوع 1 RNA، معبرًا عنها بـ C/ml (نسخ/مل). تتوافق نسخة واحدة من الحمض النووي الريبي (HIV-1) مع 1.67 وحدة دولية (IU) وفقًا للمعيار الدولي الأول لمنظمة الصحة العالمية لفيروس نقص المناعة البشرية (HIV-1 RNA) في اختبارات الكشف عن الحمض النووي (NIBSC 97/656).

تفسير النتيجة:

• "لم يتم الكشف عنه": لم يتم الكشف عن فيروس نقص المناعة البشرية-1 RNA أو أن القيمة أقل من حد الحساسية للطريقة (20 نسخة/مل). يتم تفسير النتيجة على أنها "لم يتم اكتشاف فيروس نقص المناعة البشرية-1 RNA"؛
• < 20 C/ml (копий/мл): HIV-1 РНК выявлена в концентрации на пределе чувствительности метода, количественная характеристика в копиях/мл с удовлетворительной точностью невозможна;
• من 20 إلى 10000000 درجة مئوية/مل (نسخ/مل): القيمة التي تم الحصول عليها تقع ضمن النطاق الخطي، والنتيجة موثوقة؛
• > 10,000,000 C/ml (نسخ/ml): يتم تفسير النتيجة على النحو التالي: "تم اكتشاف فيروس نقص المناعة البشرية-1 RNA عند التركيز المشار إليه خارج الحد الأعلى للنطاق الخطي؛ تم إجراء الاختبار عند تخفيف 1:X.

يرجى ملاحظة أنه قد يتم زيادة الوقت اللازم لإجراء اختبارات PCR عند إجراء الاختبارات التأكيدية.

يعد فيروس نقص المناعة البشرية PCR أحد أكثر الطرق إفادة للتشخيص الوراثي الجزيئي. تساعد هذه الطريقة على تحديد أنواع مختلفة من الأمراض المعدية والأمراض الموروثة لدى المريض. تنطبق نفس طريقة التشخيص في حالة اختبار المادة الحيوية لوجود فيروس نقص المناعة البشرية، وهو مرض خطير يتطور طوال حياة المريض. وبمساعدة طبية، كان تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من بين الاختبارات الموصى بها والتي يتم إجراؤها على أساس مدفوع الأجر في حالات الاشتباه في الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية. ومع ذلك، فإن موثوقية الدراسة لها ما يبررها فقط في 80 من أصل 100 حالة.

تشخيصات PCR لفيروس نقص المناعة البشرية تعني تفاعل البوليميراز المتسلسل. لدراسة هذا النوع، يتم استخدام أنواع مختلفة من المواد البيولوجية. ومنها الدم، بالإضافة إلى إمكانية استخدام إفرازات مهبل المريضة أو السائل المنوي عند الرجال.

انتباه! لا يستخدم اللعاب في تحليل PCR في تشخيص فيروس نقص المناعة البشرية. ويعتبر هذا النهج غير فعال، لأن الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية تكون في الحد الأدنى من التركيز في هذه المادة. وينطبق الشيء نفسه على البول والعرق والدموع.

مؤشر الدراسة الموصوفة هو اختبار ELISA الإيجابي المزدوج (مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم). سيتم مناقشة المهام البديلة في وقت لاحق.

تفاصيل حول جوهر التحليل

يعتمد اختبار PCR لفيروس نقص المناعة البشرية على قدرة الحمض النووي على التكاثر بشكل مستقل. تتكون الخلايا الحية من البروتين وهذه الأحماض نفسها، أي RNA وDNA. تعمل الجزيئات كحراس للشفرة الوراثية.
عند التركيز المنخفض للجزيئات الفيروسية (HIV) في المادة الحيوية، لا تشمل العينة سلاسل الحمض النووي بأكملها (الحمض النووي الريبي منقوص الأكسجين)، ولكن فقط مكوناتها، والتي تسمى النيوكليوتيدات. يسمح لك التحليل باكتشاف حتى البقايا الصغيرة من خلايا الفيروس. وهذه الحقيقة هي التي تفسر قدرة تفاعل البوليميراز المتسلسل على إظهار النتائج في المراحل المبكرة - بعد عدة أسابيع من الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية.

يمكن توقع أفضل النتائج من تفاعل البوليميراز المتسلسل عند فحص الدم الوريدي. يتم هضم العينة باستخدام المعدات. ثم تخضع الأجزاء للمعالجة الأنزيمية. تتحد المواد التفاعلية مع جزيئات الحمض النووي الفيروسي لتكرارها. ويزداد عدد هذه العناصر وفقا لمبدأ السلسلة حتى يصبح وجودها (وليس الأجسام المضادة) في دم المريض ملحوظا لفنيي المختبرات. لا تعمل أي من طرق التشخيص الحالية على نفس المبدأ تمامًا.

مكونات التفاعل

باستخدام طريقة PCR، يمكنك معرفة تطور الفيروس في الجسم مسبقًا. لماذا لا يمكن تسميتها شائعة في مجال الطب المجاني ويتم تنفيذها في كل مكان؟ الحقيقة هي أن اختبار فيروس نقص المناعة البشرية هذا مكلف للغاية ويتطلب المكونات التالية:

• مصفوفة الحمض النووي الريبي منقوص الأكسجين بما في ذلك قطعة الحمض النووي المعدة للتضخيم؛
• اثنين من الاشعال (لكل قطعة سلسلة)؛
• مكون بوليميريز نشط كيميائيًا لتسريع بلمرة الجزيئات الفيروسية؛
• ديوكسيريبونوكليوسيد ثلاثي الفوسفات.
• جزيئات المغنيسيوم ثنائية التكافؤ (مشحونة)؛
• حل خاص لتهيئة الظروف الملائمة، وضمان المستوى المناسب للحموضة، وتركيز الملح، وعدد جزيئات المغنيسيوم في السائل.

انتباه! ولحماية العينة من الحرارة الزائدة، تضاف كمية صغيرة من الفازلين إلى المادة التي تحتوي على دهون وبالتالي درجة غليان عالية.

يتم تفسير معدل الدقة المرتفع نسبيًا للتحليل من خلال حساسيته المتزايدة، مما يحفز التفاعل مع الأجسام المضادة للفيروسات الأخرى.

مزايا وعيوب تقنية PCR لفيروس نقص المناعة البشرية

ولتقييم الطريقة بشكل موضوعي، نعرض في الجدول أدناه عدداً من مزايا وعيوب الدراسة:

من الواضح أن هناك مزايا أكثر لهذه التقنية. إذا قمنا بتقييم نوع التشخيص من وجهة نظر إنتاجية العلاج الإضافي وإمكانية إطالة عمر المريض، فإن تفاعل البوليميراز المتسلسل هو أضمن طريق للنجاح.

مميزات التحليل

السمة الرئيسية للتحليل الموصوف هي قدرته على تشخيص فيروس نقص المناعة البشرية مبكرًا، وهو ما لا تستطيع طرق البحث الأخرى القيام به. كم يومًا بعد الإصابة المشتبه بها، يمكنني التبرع بالدم لإجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)؟ عادة هذه الفترة الزمنية هي 10-14 يوما. خلال الـ 24 ساعة القادمة، يتلقى المريض النتيجة. يتم تفسير الانحرافات المحتملة في المواعيد النهائية من خلال ظروف التشغيل الفردية لمراكز التشخيص والعيادات.

الغرض من الدراسة

يتم إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل في الغالب للكشف عن فيروس نقص المناعة البشرية (متلازمة نقص المناعة البشرية). ومع ذلك، يمكن أيضًا إجراء الاختبار إذا كنت تشك في الإصابة بأمراض تنتقل عن طريق الاتصال الجنسي. تنطبق نفس الطريقة في حالة تشخيص الأمراض الوراثية.

تشخيص PDR: أسباب التنفيذ

متى يجب التبرع بالدم لإجراء PCR؟ في معظم الحالات، يتم التبرع بالمواد البيولوجية عندما يتكيف فيروس نقص المناعة البشرية مع ظروف الجسم، ويحفز إنتاج الأجسام المضادة ويسبب الأعراض الأولى لفيروس نقص المناعة البشرية. ومع ذلك، هذا له ما يبرره فقط إذا مرت فترة زمنية كافية بعد الإصابة ويتطلب ELISA.

تنشأ الحاجة إلى تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) بمبادرة من المريض الذي يريد تشخيص المرض بسرعة (إن وجد). قد يكون السبب في ذلك: الاتصال الجنسي غير المحمي، أو الاتصال بمواد بيولوجية لشخص مصاب، أو نقل دم مؤخرًا، وما إلى ذلك.

من يوصف PCR؟

يتم تحديد الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية باستخدام PCR، بناء على توصية من أخصائي، في الحالات التالية:

• التشخيص الأولي.يؤكد PCR بدقة أو يدحض نتيجة ELISA؛
• أكد التطعيم المناعي التشخيص. النشاف المناعي هو وسيلة إضافية لدراسة مرض الإيدز . يتم استخدام كلتا الطريقتين معًا، مما يلغي إمكانية التشخيص الخاطئ؛
• مع حالة فيروس نقص المناعة البشرية المؤكدةوباستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل، تتم مراقبة تأثير العلاج المختار؛
• لتحليل الدم للمتبرعينلوجود الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية.
• لتحديد حالة فيروس نقص المناعة البشرية لحديثي الولادة عندما تكون نتيجة اختبار الأم إيجابية. يتيح اختبار PCR في الأيام الأولى من الحياة تحديد العدوى داخل الرحم أو إصابة الطفل أثناء مروره عبر قناة الولادة. يتم إجراء الاختبار بعد 2-3 أسابيع من الولادة.

ما هي المدة التي يستغرقها إجراء اختبار PCR، وأين يمكن إجراؤه؟

يتم إجراء تحليل فيروس نقص المناعة البشرية PCR في مختبر خاص. الاختبار نفسه وتفسير النتيجة لا يتطلب الكثير من الوقت: شهر أو حتى أسبوع. يستغرق سحب الدم ما يصل إلى 6 دقائق. في الحالة الطبيعية، لن يحتاج الأخصائي إلى أكثر من يوم واحد لإجراء التشخيص وإصدار الاستنتاج. يتم قضاء الساعات الثماني الأولى في دراسة الدم، أما الوقت المتبقي فيقضيه في التسجيل. ويمكن جمع النتيجة في اليوم التالي بعد أخذ العينة. مدة الاختبار السريع ساعتان.

انتباه! تسمح لك بوليصة التأمين الطبي الإلزامي بإجراء الاختبار مجانًا في إحدى مؤسسات الرعاية الصحية العامة.

تقريبا أي مختبر تجاري قادر على إجراء البحوث، وعلى أساس مجهول. يتم تخصيص رقم خاص للشخص، ثم يتم ربط النتائج به. يتم تحميل هذه المعلومات على موقع المؤسسة في الحساب الشخصي للمستخدم.

ما هي تكلفة إجراء اختبار PCR؟

هذه الطريقة لإجراء البحوث مكلفة للغاية. ويرجع ذلك إلى أن إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل يجب أن يتم على أحدث الأجهزة الطبية، ويتطلب التلاعب به وجود متخصصين لديهم القدر الكافي من المعرفة.

والسؤال الملح هو: ما هي تكلفة إجراء اختبار PCR لفيروس نقص المناعة البشرية؟ سيتطلب هذا حوالي 56-60 دولارًا.

إجراء التحليل

يتضمن اختبار PCR لفيروس نقص المناعة البشرية ما يلي:

• أخذ عينات من الدم للبحث؛
• جمع إضافي للحيوانات المنوية من الرجل والإفرازات التناسلية من المرأة.

انتباه! ونتيجة لذلك، يسمح الاختبار للأطباء بتحديد الحمل الفيروسي العالي من أجل مراقبة حالة المريض.

الميزات الأخرى لاختبار فيروس نقص المناعة البشرية هذا التي ينبغي أخذها بعين الاعتبار:

• قبل يومين من الاختبار، يجب على المريض تقليل كمية الأطعمة الدهنية في النظام الغذائي.
• يتم سحب الدم على معدة فارغة.
• تتم إضافة الإنزيمات التي تصنع العدوى المختلفة إلى المواد البيولوجية المنقسمة في مفاعل خاص؛
• ويتم التحليل على عدة مراحل، حيث أن تقسيم الجزيئات يحدث في تقدم حسابي. يقوم برنامج خاص بمقارنة عدد كبير من الهياكل الخلوية للكشف عن فيروس نقص المناعة البشرية.

إن طرق التشخيص الدقيقة، والتي تشمل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، باهظة الثمن، ولكنها قادرة على اكتشاف فيروس نقص المناعة البشرية في المراحل المبكرة. في علاج مثل هذه الأمراض، الشيء الأكثر أهمية هو التشخيص الصحيح وفي الوقت المناسب، والذي يمكن أن يحسن نوعية حياة الشخص ومدته.

لماذا فيروس نقص المناعة البشرية والإيدز مخيف جدا، ما هي طرق التشخيص الموجودة. معلومات متعمقة حول دراسات PCR.

ووفقا للإحصاءات التي قدمتها منظمة الصحة العالمية بالاشتراك مع برنامج الأمم المتحدة المشترك المعني بفيروس نقص المناعة البشرية/الإيدز، توفي أكثر من 25 مليون مريض بسبب فيروس نقص المناعة البشرية والإيدز على مدى الأربعين عاما الماضية. ليس من قبيل الصدفة أن يطلق علماء الأوبئة على فيروس نقص المناعة البشرية اسم طاعون القرن العشرين، لأن الضرر الذي تسببه هذه العدوى للبشرية هائل. وكانت دول القارة الأفريقية الأكثر إصابة. وتضرب العدوى بشدة اقتصادات الدول غير المستقرة بالفعل، ويعاني الناس من الفقر المدقع.

عندما تظهر الأعراض، التشخيص الفوري مهم للغاية.إصابة الجسم بعدوى فيروس نقص المناعة البشرية، لأن دورة العلاج في الوقت المناسب يمكن أن تنقذ حياة المريض أو على الأقل تزيد منها. في الوقت الحاضر، قطع التقدم التكنولوجي شوطا طويلا: تم اختراع أحدث الطرق لتشخيص فيروس نقص المناعة البشرية وفيروس الإيدز، والعلاج متاح لأي شخص على هذا الكوكب، وتتميز موثوقية الاختبارات بدرجة صغيرة من الخطأ، والعلاج متاح. فعالة للغاية.

تشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية

في بلدنا، يعد تحديد وجود عدوى فيروس نقص المناعة البشرية في جسم المريض أمرًا ضروريًا مجمع التحليلات:

• مقايسة الممتز المناعي المرتبط
• النشاف المناعي
• تفاعل البوليميراز المتسلسل
• اختبارات صريحة

المقايسة المناعية الإنزيمية.

الفحص (اختبار إليسا)هي المرحلة الأولية لتحديد العدوى في الجسم. ويعتمد على مركبات بروتينية للفيروس تتشكل في ظروف اصطناعية، والتي تحدد الأجسام المضادة التي تنتجها الخلايا المناعية كرد فعل للعدوى. يحدث تفاعل كيميائي بين الكواشف، ونتيجة لذلك يتغير لون عنصر المؤشر. وهذا يعني أن نتيجة الاختبار إيجابية. يمكن الحصول على المعلومات باستخدام هذه الطريقة في غضون أسبوعين من لحظة الإصابة. هذه الطريقة لا تكتشف وجود العدوى لدى المريض، ولكنها تحدد الأجسام المضادة المنتجة لهذه العدوى. يحدث أن إنتاج الأجسام المضادة يبدأ بعد 10-15 يومًا من الإصابة، ولكن في الغالبية العظمى من الحالات لاحقًا - بعد 1-1.5 شهرًا.

تتم معالجة المعلومات المتعلقة بهذا التحليل من يومين إلى عشرة أيام.

يتم دعم موثوقية diangosis لفيروس نقص المناعة البشرية من خلال تحليل IB. يمكن أن يكون اختبار IB الإيجابي بشكل استثنائي للفيروس بمثابة سبب مقنع لتأكيد الإصابة.

جوهر التحليل:

يتم أخذ عينة من الدم الوريدي لتحليلها في المختبر. يتم تحضير العينة بشكل إضافي، حيث يتم كهربة مركبات البروتين الموجودة فيها في غرفة الاختبار، ومن ثم يتم توزيعها في المادة الهلامية حسب وزنها الجزيئي. يتم وضع شريط ورقي مطلي بالكاشف عدة مرات في العينة المعدة. إذا كانت هناك أجسام مضادة للفيروس في العينة، يحدث تفاعل كيميائي وتصبح الخطوط مرئية على شريط الاختبار. عندما تظهر شرطتان أو ثلاث شرطات من p24 وgp41 وgp120 أو gp160، تكون نتيجة الاختبار إيجابية.

إذا تم الحصول على نتيجة إيجابية من تحليل IB، مع وجود خطأ بنسبة واحد في المئة، فيمكن التوصل إلى استنتاج حول وجود عدوى فيروس نقص المناعة البشرية في الجسم.

الاختبارات السريعة لفيروس نقص المناعة البشرية والإيدز

أحدث التقنيات لتحديد فيروس نقص المناعة في الجسم هي طرق سريعة. يمكن الحصول على معلومات حول هذا التحليل في غضون دقائق قليلة بعد الانتهاء. تم العثور على أعلى موثوقية في اختبارات التصوير المناعي - شرائط اختبار خاصة يتم رش طبقة من الكاشف على سطحها. تتلامس الأجسام المضادة الموجودة في مادة الاختبار مع الكاشف، مما يؤدي إلى تغيير لون المؤشر. وبعد دقائق قليلة يظهر خطان يشيران إلى وجود عدوى. وجود خط واحد يعني عدم وجود عدوى.

يمكن استخدام مثل هذا الاختبار كاختبار إضافي، ويتم تأكيد المعلومات المتعلقة بهذا الاختبار بالضرورة من خلال دراسات أخرى.

كم تكلفة اختبار فيروس نقص المناعة البشرية السريع؟

سيكلف الاختبار السريع لفيروس نقص المناعة البشرية في المتوسط ​​200-1000 روبل.

تم تطوير تقنية التشخيص PCR في الأصل قبل 35 عامًا على يد العالم الأمريكي كاري موليس. حصل مخترع الدراسة على جائزة نوبل العالمية عام 1993 لابتكاره. لقد أصبح لا غنى عنه في أي نشاط مختبري.

يستخدم PCR في البيولوجيا الجزيئية لعمل نسخ عديدة (تضخيم) أجزاء صغيرة من الحمض النووي. يمكن لبوليميريز الحمض النووي إضافة نيوكليوتيدات فقط إلى مجموعة 3-OH الموجودة مسبقًا. لذلك فهو يحتاج إلى مادة تمهيدية يمكنه إضافة النوكليوتيدات الأولى إليها. يتيح لك هذا المتطلب تحديد قسم معين من تسلسل النمط الذي يحتاج إلى التشخيص. في نهاية تفاعل PCR، سوف يتراكم تسلسل معين إلى مليارات النسخ (amplicons).

يتضمن تفاعل البوليميراز المتسلسل عملية تسخين وتبريد تسمى الدورة الحرارية، والتي تتم بواسطة معدات متخصصة. يعد تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) تقنية بسيطة نسبيًا. إنه يعزز قالب الحمض النووي لإنتاج أجزاء معينة من الحمض النووي في المختبر (التحليل في المختبر). غالبًا ما تتطلب الطرق التقليدية لاستنساخ تسلسل الحمض النووي في ناقل وتكراره في خلية حية عدة أيام إلى عدة أسابيع من البحث. ولكن يمكنك الحصول على نتائج تضخيم تسلسل الحمض النووي باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) بعد بضع ساعات.

تتطلب معظم الاختبارات البيوكيميائية المستخدمة في تشخيص الأمراض المعدية كمية كبيرة إلى حد ما من المواد البيولوجية. بالنسبة لـ PCR، هذا الشرط ليس إلزاميًا. وبالتالي، قد يوفر تفاعل البوليميراز المتسلسل اكتشافًا أكثر حساسية لمسببات الأمراض. ومستويات أعلى من التضخيم لتسلسلات معينة في وقت أقل مع كمية محدودة إلى حد ما من المواد الحيوية. هذه الميزات تجعل التكنولوجيا مفيدة للغاية. ليس فقط للبحث الأساسي، ولكن أيضًا للأغراض الشخصية. بما في ذلك اختبار الهوية الجينية، واختبار الطب الشرعي، ومراقبة الجودة الصناعية.

تكمن القيمة الرئيسية للتحليل في القدرة على تحديد الأمراض المنقولة جنسياً قبل ظهور العلامات الأولى. يُستخدم تحليل PCR عندما يكون التشخيص المبكر للإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية ضروريًا. وكذلك تحديد الحمض النووي الريبوزي (RNA) للفيروس في دم المتبرع. ونظرًا لحساسية التحليل العالية، يمكن الحصول على الإجابة بعد 7-14 يومًا من الإصابة المشتبه بها. ستصل موثوقية التشخيص من 85 إلى 98٪. ومع ذلك، لا يتم وصف اختبار PCR للجميع. لأنها دراسة مكلفة إلى حد ما. والأهم من ذلك، أنه يتطلب معدات باهظة الثمن ومهارات مهنية معينة من موظفي المختبر. إذا لم يكن المريض قد تعرض سابقًا لمواقف مرتبطة بزيادة خطر الإصابة بالعدوى، فلا ينصح بتفاعل البوليميراز.

تفاعل البلمرة النوعي لفيروس نقص المناعة البشرية

يتيح لك إجراء PCR عالي الجودة لفيروس نقص المناعة البشرية تحديد وجود مرض فيروسي في الجسم. ويمكن للمريض أن يحصل على النتيجة على شكل العلامات التالية: إيجابية، إيجابية كاذبة، سلبية. لكن الدراسة لا تجعل من الممكن تحديد عدد نسخ الفيروس القهقري. لا يتم إجراء التحليل النوعي على المرضى الذين سبق تشخيص إصابتهم بالعدوى. لا يوصف لمراقبة فعالية العلاج المضاد للفيروسات.

PCR الكمي لفيروس نقص المناعة البشرية

يتم إجراؤه لتحديد نسخ فيروس RNA في المادة البيولوجية للمريض. يوصف اختبار PCR الكمي فقط للمرضى الذين يعانون من عدوى تم تحديدها مسبقًا، كمراقبة للعلاج المستمر.

في الوقت الحقيقي PCR

يستخدم في التشخيص المختبري لتكوين نسخ من أقسام الحمض النووي. أيضًا للبحث الكمي المتزامن والكشف عن تسلسل الحمض النووي في المواد الحيوية. في الأساس، التشخيص هو PCR الكمي.

في ملاحظة!

في مختبرات مختلفة، يمكنك العثور على العديد من الصيغ التشخيصية: "التحديد الكمي لـ PCR" و"PCR في الوقت الحقيقي".

كلا التحليلين متطابقان.

أخذ المواد اللازمة لتشخيص فيروس نقص المناعة البشرية

يتم جمع المواد البيولوجية لتشخيص فيروس نقص المناعة البشرية باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وفقًا لمعايير معينة. يتم التلاعب في غرفة العلاج. يتم استخدام أدوات معقمة يمكن التخلص منها. يتم فتح العبوة التي تحتوي على الأدوات مباشرة بالقرب من المريض. يتم وضع المادة المجمعة في أنابيب معقمة تمت معالجتها مسبقًا بـ CrO3 (خليط الكروم). المادة البيولوجية هي الدم الوريدي، الذي يتم التبرع به في الصباح وعلى معدة فارغة. قبل أيام قليلة من الاختبار، يجب عليك تجنب شرب الكحول والأطعمة الدهنية والحارة، والتوقف عن تناول الأدوية.

إذا لم يكن من الممكن التوقف عن تناول الأدوية، فيجب الإبلاغ عن ذلك قبل الاختبار.

بالإضافة إلى ذلك، يمكن أخذ مسحة من مجرى البول والمهبل لتحديد الأمراض المنقولة جنسيا المصاحبة. تتم الدراسة بشكل مجهول، ويتلقى المريض النتائج شخصيا. من المستحسن أن يكون هويتك معك.

كم من الوقت بعد أن تتمكن من إجراء اختبار PCR لفيروس نقص المناعة البشرية؟

من الممكن اكتشاف وجود فيروس نقص المناعة البشرية لاحقًا 4-6 أيام بعد الإصابة. في هذه الحالة، سيصل محتوى المعلومات للتحليل إلى 85٪. وبعد 10-13 يومًا يمكن للتحليل تحديد المرض بدقة تصل إلى 98٪. لن تكون النتيجة السلبية صحيحة إلا إذا تم تناولها في موعد لا يتجاوز أسبوعين بعد الإصابة المشتبه بها.

أسباب النتيجة الإيجابية الكاذبة

الحصول على نتيجة إيجابية كاذبة أمر صعب للغاية.

وهذا ممكن إذا لم يتم اتباع قواعد جمع المواد البيولوجية، وتم وضع علامة غير صحيحة على الأنابيب، واستخدام نظام اختبار منخفض الجودة وعوامل أخرى مماثلة. وفي حالات أخرى لا تزيد فرصة الحصول على نتيجة مماثلة عن 2%.

كم من الوقت يستغرق الحصول على نتائج الاختبار؟

من الناحية الفنية، يمكن الحصول على نتائج PCR خلال 4 ساعات. ومع ذلك، في الممارسة العملية، يتلقى المريض تقريرا مختبريا من يوم إلى عدة أيام. بشكل عام، يعتمد التوقيت على حجم العمل في المختبر ومدى تنظيم عمله.

إجراء تفاعل البلمرة عند الوليد

يوصف تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) عند ولادة طفل من أم مصابة بفيروس نقص المناعة البشرية. إجراء ELISA في هذه الحالة ليس مفيدًا. حيث أن الطفل يحتفظ بالأجسام المضادة ضد الفيروس القهقري حتى عمر عامين تقريبًا. لهذا السبب، فإن المقايسة المناعية الإنزيمية لن تعطي إجابة دقيقة. إذا تم إجراء اختبار PCR على طفل يتراوح عمره بين 4-6 أسابيع وتم الحصول على نتيجة إيجابية، فسنتحدث عن العدوى.

إذا أظهر اختبار PCR بين عمر 8 أسابيع وستة أشهر نتائج سلبية (بشرط ألا يتغذى الطفل على حليب الأم)، يتم استبعاد الإصابة.

لماذا يعتبر PCR أفضل من ELISA للكشف عن فيروس نقص المناعة البشرية؟

يتيح تفاعل البوليميراز اكتشاف الحمض النووي الريبوزي (RNA) للفيروس ووجوده في الجسم، بما في ذلك الكمية. مهمة ELISA هي تحديد الأجسام المضادة للإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية. إن مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم ليست أقل شأنا من PCR في تحديد العدوى المحتملة، حيث تصل دقتها إلى 99٪. ومع ذلك، على عكس تفاعل البوليميراز المتسلسل، فإنه غير قادر على اكتشاف المرض في المراحل الأولى من تطوره.

مزايا فيروس نقص المناعة البشرية PCR

• يحدد تفاعل البوليميراز بشكل مباشر وجود العامل المعدي. على سبيل المثال، يمكن لـ ELISA اكتشاف الأجسام المضادة وفضلات الكائنات الحية الدقيقة بشكل حصري.
• يحدد الاختبار بوضوح مسببات الأمراض المحددة، حتى لو كان هناك العديد من العوامل المسببة للتفاعل المتبادل.
• تتيح لك هذه التقنية فحص أي نوع من المواد البيولوجية، بما في ذلك قطرات الدم المجففة.

ومن عيوب PCR زيادة حساسية التحليل. وهذا يؤدي في بعض الأحيان إلى نتيجة إيجابية كاذبة. يحدث هذا في حالة وجود كمية صغيرة من الحمض النووي الغريب في أنبوب اختبار أو على الأدوات.

تشخيص فيروس نقص المناعة البشرية باستخدام PCR وELISA: التفسير وموثوقية النتائج

تكون نتيجة المقايسة المناعية الإنزيمية، والتي تشير نتائج الاختبار فيها إلى عدم وجود أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية ومستضد p24 في الجسم، سلبية. إذا كانت هذه الجزيئات موجودة، يتم إصدار نتيجة تشخيصية إيجابية. في بعض الحالات قد يحصل المريض على نتيجة إيجابية أو سلبية كاذبة. وهذا نتيجة للحمل المبكر، ووجود عدوى هربسية، وأخذ عينات غير صحيحة من المواد، وتعطيل نقل أنابيب الاختبار. بالإضافة إلى ذلك، تم العثور على نتائج مماثلة في المرضى الذين يعانون من أمراض المناعة الذاتية المستمرة وأنواع مختلفة من التهاب الكبد. يمكن إجراء اللطخة الغربية (النشاف المناعي)، الذي يجمع بين ELISA وفصل البروتين الفيروسي.

ثم ستكون النتيجة إيجابية في وجود العدوى الفيروسية بروتين سكري gp160. وهو مقدمة للبروتينات السكرية المغلف لفيروس نقص المناعة البشرية gp41 وgp120. إذا كانت هذه الجزيئات مفقودة، فإن نتيجة الاختبار المعملي تعتبر سلبية. يتيح لك إجراء Western Blot مع ELISA الحصول على نتائج تتجاوز موثوقيتها 98٪. في حالة ما إذا كانت نتيجة اختبار ELISA إيجابية وكانت نتيجة اختبار Western Blot سلبية، فإن الاختبار يعتبر مشكوكًا فيه ويتطلب تفاعل البوليميراز المتسلسل.