Лабораторные исследования пцр. Что показывает анализ крови на ПЦР? Как подготовиться к анализу. Где сдать анализы на ПЦР

Для адекватного и эффективного лечения многих инфекционных заболеваний необходимо своевременное установление точного диагноза. В решении этой задачи в наши дни привлекаются высокотехнологичные методы диагностики основанные на методах молекулярной биологии. В настоящий момент полимеразная цепная реакция (ПЦР) уже достаточно широко применяется в практической медицине как наиболее надежный инструмент лабораторной диагностики .

Чем объясняется популярность ПЦР в настоящее время?

Во-первых, данный метод используется для выявления возбудителей различных инфекционных заболеваний с высокой точностью.

Во-вторых, для контроля эффективности проведенного лечения.

В различных руководствах, проспектах, статьях, а также объяснениях врачей-специалистов, мы часто сталкиваемся с употреблением непонятных терминов и слов. Действительно трудно рассказать о высокотехнологичных продуктах науки обыденными словами.

В чем суть и механика ПЦР диагностики?

Каждый живой организм имеет свои уникальные гены. Гены располагаются в молекуле ДНК, которая собственно и является «визитной карточкой» каждого конкретного организма. ДНК (генетический материал) – это очень длинная молекула, которая состоит из «кирпичиков», называемых нуклеотидами. У каждого возбудителя инфекционных заболеваний они расположены строго специфично, то есть в определенной последовательности и комбинации. Когда необходимо понять имеется ли у человека тот или иной возбудитель, забирается биологический материал (кровь, моча, слюна, мазок), который содержит ДНК или фрагменты ДНК микроба. Но количество генетического материала возбудителя очень мало, и невозможно сказать какому именно микроорганизму он принадлежат. Для решения этой задачи и служит ПЦР. Суть полимеразной цепной реакции заключается в том, что берется малое количество материала для исследования, содержащего ДНК, а в процессе ПЦР происходит увеличение количества генетического материала, принадлежащего конкретному возбудителю и, таким образом, его можно идентифицировать.

ПЦР диагностика – генетическое исследование биоматериала.

Идея метода ПЦР принадлежит американскому ученому K.Mullins, которую он предложил в 1983 году. Однако широкое клиническое применение получила лишь в средине 90-х годов XXвека.

Разберемся с терминологией, что же это такое – ДНК и т.д. Каждая клетка любого живого существа (животного, растения, человека, бактерии, вируса) имеет хромосомы. Хромосомы – это хранители генетической информации, которые содержат всю последовательность генов каждого конкретного живого существа.

Каждая хромосома состоит из двух нитей ДНК, закрученных в спираль друг относительно друга. ДНК – химически это дезоксирибонуклеиновая кислота, которая состоит из структурных компонентов – нуклеотидов. Нуклеотидов бывает 5 видов – тимин (Т), аденозин (А), гуанин (Г), цитозин (Ц) и урацил (У). Нуклеотиды располагаются друг за другом в строгой индивидуальной последовательности, образуя гены. Один ген может состоять из 20-200 таких нуклеотидов. Например, ген, кодирующий выработку инсулина, состоит из 60 пар нуклеотидов.

Нуклеотиды имеют свойство комплементарности. Это означает что напротив аденина (А) в одной цепочке ДНК обязательно стоит тимин (Т) в другой цепочке, а напротив гуанина (Г) – цитозин (Ц). Схематически выглядит следующим образом:
Г - Ц
Т - А
А - Т
Данное свойство комплементарности ключевое для проведения ПЦР.

Помимо ДНК такую же структуру имеет РНК – рибонуклеиновая кислота, отличающаяся от ДНК тем, что вместо тимина в ней используется урацил. РНК – является хранителем генетической информации у некоторых вирусов, которые называются ретровирусами (например, ВИЧ).

Молекулы ДНК и РНК могут «размножаться» (данное свойство используется для проведения ПЦР). Происходит это следующим образом: две нити ДНК или РНК, отходят друг от друга в стороны, на каждую нить садится специальный фермент, который синтезирует новую цепочку. Синтез идет по принципу комплементарности, то есть, если в исходной цепочке ДНК стоит нуклеотид А, то во вновь синтезированной будет стоять Т, если Г – то Ц и т.д. Этот специальный фермент -«строитель» для начала синтеза нуждается в «затравке» - последовательности из 5-15 нуклеотидов. Данная «затравка» определена для каждого гена (гена хламидии , микоплазмы , вирусов) экспериментально.

Итак, каждый цикл ПЦР состоит из трех стадий. В первую стадию происходит так называемое раскручивание ДНК – то есть разделение связанных между собой двух цепей ДНК. Во вторую - происходит присоединение «затравки» к участку нити ДНК. И, наконец, удлинение данных нитей ДНК, которое производится ферментом-«строителем». В настоящее время весь этот сложный процесс протекает в одной пробирке и состоит из повторяющихся циклов размножения определяемой ДНК с целью получения большого количества копий, которые могут быть, затем выявлены обычными методами. То есть из одной нити ДНК мы получаем сотни или тысячи.

Этапы проведения ПЦР исследования

Забор биологического материала для исследования

В качестве пробы служит различный биологический материал: кровь и ее компоненты, моча, слюна, отделяемое слизистых оболочек, спинномозговая жидкость, отделяемое раневых поверхностей, содержимое полостей тела. Все биопробы собираются одноразовыми инструментами, а набранный материал заключают в пластиковые стерильные пробирки или помещают на культуральные среды, с последующей транспортировкой в лабораторию.

В забранные пробы добавляют необходимые реагенты и ставят в программируемый термостат – термоциклер (амплификатор). В амплификаторе 30-50 раз повторяется цикл ПЦР, состоящий из трех этапов (денатурация, отжиг и удлинение). Что это означает? Рассмотрим подробнее.

Этапы непостредственно ПЦР реакции, копирование генетического материала

I этап ПЦР - Подготовка генетического материала для копирования.
Происходит при температуре 95° С, при этом нити ДНК разъединяются, и на них могут садиться «затравки».

«Затравки» изготавливают промышленным способом различные научно-производственные объединения, а лаборатории покупают уже готовые. При этом «затравка» для выявления, например, хламидии, работает только для хламидии и т.д. Таким образом, если тестируется биоматериал на наличие хламидийной инфекции, то в реакционную смесь помещается «затравка» для хламидий; если тестирование биоматериала на вирус Эпштейн-Барра, то и «затравка» для вируса Эпштейн-Барра.

II этап – Объединение генетического материала возбудителя инфекции и «затравки».
Если имеется ДНК определяемого вируса или бактерии , «затравка» садится на эту ДНК. Этот процесс присоединения «затравки» и есть второй этап ПЦР. Данная стадия проходит при температуре 75°С.

III этап - Копирование генетического материала возбудителя инфекции.
Это процесс собственно удлинения или размножения генетического материала, который происходит при 72°С. К «затравкам» подходит фермент- «строитель» и синтезирует новую цепочку ДНК. С окончанием синтеза новой цепочки ДНК, заканчивается и цикл ПЦР. То есть за один цикл ПЦР происходит увеличение количества генетического материала в два раза. Например, в исходной пробе имелось 100 молекул ДНК какого-либо вируса, после первого цикла ПЦР в пробе будет уже 200 молекул ДНК тестируемого вируса. Один цикл длится 2-3 минуты.

Для образования достаточного количества генетического материала для идентификации, обычно производится 30-50 циклов ПЦР, что занимает 2-3 часа.

Этап идентификации размноженного генетического материала

Собственно ПЦР на этом заканчивается и далее идет не менее значимый этап идентификации. Для идентификации используют метод электрофореза или меченые «затравки». При использовании электрофореза полученные нити ДНК разделяются по размерам, и наличие фрагментов ДНК разной длины свидетельствует о положительном результате анализа (то есть о наличии того или иного вируса, бактерии и т.д.). При использовании меченых «затравок», к конечному продукту реакции добавляют хромоген (краситель), вследствие чего ферментативная реакция сопровождается образованием окраски. Развитие окраски прямо свидетельствует, что вирус или другой выявляемый агент присутствуют в исходной пробе.

На сегодняшний день, используя меченые «затравки», а также соответствующее программное обеспечение, можно производить сразу и «чтение» результатов ПЦР. Это так называемаяreal-time ПЦР.

Почему ПЦР диагностика обладает такой ценностью?

Одним из существенных преимуществ метода ПЦР является высокая чувствительность – от 95 до 100%. Однако, эти преимущества должны базироваться на непременном соблюдении следующих условий:

1. корректный забор, транспортировка биологического материала;
2. наличие стерильного, одноразового инструментария, специальных лабораторий и обученного персонала;
3. строгое соблюдение методики и стерильности во время проведения анализа

Чувствительность различается для различных выявляемых микробов. Так, например, чувствительность метода ПЦР для выявления вируса гепатита С составляет 97-98%, чувствительность для выявления уреаплазмы – 99-100%.

Возможности, заложенные в ПЦР-анализе, позволяют достичь непревзойденной аналитической специфичности. Это означает выявление именно того микроорганизма, который искали, а не похожего или близкородственного.
Диагностическая чувствительность и специфичность метода ПЦР, зачастую превосходят таковые и для культурального метода, называемого «золотым стандартом» для выявления инфекционных заболеваний. Учитывая продолжительность выращивания культуры (от нескольких дней до нескольких недель), преимущество метода ПЦР становится очевидным.

ПЦР в диагностике инфекций
Преимущества метода ПЦР (чувствительность и специфичность) определяют широкий спектр применения в современной медицине.
Основные области применения ПЦР-диагностики:

1. диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний различной локализации
2. контроль эффективности проведенной терапии
3. уточнение вида возбудителя

ПЦР используется в акушерстве, гинекологии, неонатологии, педиатрии, урологии, венерологии, нефрологии, клинике инфекционных болезней, офтальмологии, неврологии, фтизиопульмонологии и др.

Использование ПЦР-диагностики производится в совокупности с другими методами исследования (ИФА, ПИФ, РИФ и др.). Их сочетание и целесообразность определяет лечащий врач.

Возбудители инфекций, обнаруживаемые методом ПЦР

Вирусы:

1. ретровирусы HIV-1 и HIV-2
2. герпетиформные вирусы
3. вирус простого герпеса 1 и 2 типов

ПЦР диагностика - что это такое? Суть Полимеразно-Цепной Реакции заключается в том, что для исследования биологического материала применяются маркеры особого типа, которые быстро анализируют ДНК возбудителей инфекции. В гинекологии существуют разные методы ПЦР анализов у женщин в зависимости от исследуемого материала (кровь, моча, мазки и т.д.). После обработки данных выявляют тип возбудителя (это т.н. "ПЦР качественный анализ") и/или их концентрацию - этот тип исследования называется "ПЦР количественный анализ".

Сдача анализов методом ПЦР позволяет быстро провериться на возбудителей инфекционной патологии тогда, когда это не представляется возможным сделать другими анализами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопией). В современной лабораторной диагностике ПЦР - самый эффективный и лучший способ обнаружения ДНК микробов и вирусов. Тест позволяет гинекологу и другим врачам клиники не только установить причину недомогания у женщин и мужчин, но и контролировать ход процесса, правильно оценить результат проведенной терапии.

Цены ПЦР диагностики

Инфекция	ПЦР	Цена
Хламидии (Clamidia Trachomatis)	качественный	450
Хламидии	количественный	850
Уреаплазма (U. urealiticum / U. parvum)	качественный	450
Уреаплазма	количественный	750
Микоплазма (Micoplasma Hominis)	качественный	450
Микоплазма	количественный	750
Микоплазма (Micoplasma Genitalium)	качественный	450
Микоплазма	количественный	750
Гарднерелла (Gardnaerella vaginalis)	качественный	450
Трихомонада (Trichomonas vaginalis)	качественный	400
Трихомонада	количественный	850
	качественный	500
Гонококки (Neisseria gohorrhoeae)	количественный	650
Цитомегаловирус (CMV)	качественный	400
Возбудитель сифилиса (Treponema pallidum)	качественный	500
Кандида (Candida albicans)	качественный	450
Кандида (Candida albicans / Candida glabrata / Candida crusei)	качественный	750
Вирус герпеса I и II типа (HSV)	качественный	450
Вирус Эпштейн-Барра	качественный	500
Вирус Варицелла-Зостер	качественный	350
Вирусы папилломы человека

ЧТО ПОКАЗЫВАЕТ ПЦР

Качественный анализ ПЦР даёт указание на прямое пристуствие возбудителя инфекции в организме человека или животного. Сдать можно как мазок практически любой локализации (половые органы, уретра, ротоглотка и пр.), так и ПЦР анализы крови . По мазку или соскобу в гинекологии проверяют на хламидии, уреа- и микоплазмы, герпес-вирус, ВПЧ и прочие микробы. Результат ДНК анализа выдается на руки пациенту с заключением лаборатории "обнаружено" или "не обнаружено". В случае с анализом крови он позволяет на самой ранней стадии выявить ВИЧ, гепатит, герпес, цитомегаловирус и другие микроорганизмы, а в ряде случаев - и определить их генотип и показывает количество.

Количественные анализы ПЦР.
Исследование позволяет не только быстро выявить искомый генетический материал, но и показать концентрацию их ДНК (количественный метод ПЦР). Определение типа и количества возбудителей имеет важное значение в решении вопроса о назначении лечения, особенно если обнаружены, например, микоплазма (количественное определение ДНК), типирование уреаплазмы (количественное определение ДНК) или, что особенно важно, можно сделать генотипирование и количественное определение вирусной нагрузки в анализах при ВПЧ-инфекции .

РЕЗУЛЬТАТЫ ПЦР

Из всего сказанного понятно, что такое ПЦР анализ и каковы преимущества данного теста в гинекологии. Еще один важный нюанс этой диагностики - расшифровка результата доступна и удобна для непрофессионала. Учитывая, сколько делается анализ ПЦР в клинике, а также сроки готовности заключения (лаборатория обычно выдает информацию через 1-2 суток), данный метод диагностики становится лучшим выбором для определения всех основных гинекологических и прочих инфекций.

Лаборатория при качественном методе проведения ДНК исследования женских и мужских мазков делает заключение двух типов:

1. "ПЦР отрицательный" - в исследуемом материале не обнаружено возбудителя и
2. "ПЦР положительный" - в тесте были найдены РНК или ДНК микроба или вируса.

ПЦР в гинекологии

Показания к сдаче данных тестов у женщин следующие:

• Подозрение на возможность инфицирования ИППП;
• Анонимное обследование;
• Наличие выделений из половых путей, зуда;
• Боли внизу живота;
• Дискомфорт при мочеиспускании;
• Боли при половых контактах;
• Повышенные лейкоциты в анализе мазка на флору;
• Наличие эрозии на шейке матки;
• Планирование беременности;
• Проблемы с зачатием и вынашиванием ребенка;
• Подготовка к гинекологическим операциям, ЭКО;
• В профилактических целях.

Где лучше сдавать анализы на ПЦР в Москве?
Данный тип диагностики в гинекологии относится к современным и высокотехнологическим способам. Сдавать анализы на инфекции методом ПЦР следует в клинике, которая обладает всем необходимым для получения полноценных результатов. В нашем медцентре взятие материла проводится квалифицированными, опытными врачами гинекологами (не средним персоналом в процедурном кабинете), используются одноразовые инструменты и специальные лабораторные материалы, а полученные от пациентов образцы ежедневно отправляются в работу. Это позволяет не только получить результаты ПЦР быстро, но и обеспечить их достоверность. По желанию - полная анонимность обследования.

Сколько стоит ПЦР?
Данная услуга предоставляется многими медицинскими учреждениями столицы. На стоимость оказывают влияние множество факторов, начиная от месторасположение и заканчивая внутренней ценовой политикой. Тем не менее, есть объективные факторы, которые определяют среднюю минимальную цифру, ниже которой качественная и достоверная услуга оказана быть не может в силу упомянутых факторов. Цена ПЦР диагностики в клиниках Москвы на некоторые инфекции в среднем следующая:

• качественный анализ мазка ПЦР - 400 - 500 руб;
• количественный анализ ПЦР мазок - от 600 руб (1ед);
• РНК диагностика соскоба - от 1 000 руб (1ед);
• ПЦР анализ крови качественный (например, на герпес, ВПЧ, вирус Эпштейна-Барра, цитомегаловирус) - 450 - 550 руб, количественный - от 2 000 руб;
• ВИЧ ДНК качественный (опровержение/подтверждение наличия ВИЧ в доклинический период) - от 2 000 руб, РНК количественный - от 7 000 руб, резистентность - от 14 000 руб.

Подготовка к ПЦР

Для получения правильных, достоверных результатов исследования, девушкам и женщинам перед тем, как пойти сдать анализы на инфекции, следует придерживаться определенных правил:

За 1-2 дня до визита в клинику для сдачи анализа отказаться от половых актов;
- воздержаться от мочеиспускания за 1,5 - 2 часа до мазка;
- проводить гигиену наружных половых органов простой водой, без моющих средств, исключить спринцевания;
- исключить использование вагинальных таблеток, свечей;
- не сдавать ПЦР анализы во время месячных;
- являясь девственницей, перед осмотром заранее предупредите об этом гинеколога.

Как сдать анализы ПЦР

Сдать ПЦР у нас в клинике, в том числе анонимно, довольно просто. Далее мы рассажем как берут ПЦР у женщин и мужчин и откуда, из каких мест это исследование наиболее информативно.

В случае с женщиной анализ берётся врачом гинекологом. Обычно это бывает на первичном приеме у врача или при явке просто на сдачу анализов на инфекции, без предварительной консультации. Все по вашему желанию. Вы говорите свои пожелания, на какие именно инфекции хотелось бы провериться, и после этого начинается непосредственно сама процедура забора материала. Пациентка раздевается ниже пояса, располагается на кресле. Раздвинув малые половые губы, доктор вводит во влагалище гинекологическое зеркало подходящего размера. Гинекологи берут ПЦР у женщин обычно из шейки матки, а также мочеиспускательного канала. В последнем случае перед введением зондика производится кратковременный массаж уретры пальцем, введенным во влагалище. В случае, если анализ ПЦР сдают девочки-подростки или девушки девственницы, то зеркало не используется, а образцы выделений берут через отверстие в девственной плеве или области предверия вагины. Полученный материал помещается в герметичную пробирку со специальной средой и отправляется в лабораторию.

Взятие данного анализа у мужчин особых сложностей не представляет. Зонд вводится в уретру на глубине 3-4 см, несколько раз проворачивается по и против часовой стрелки. Материал также помещается в пробирку для последующей диагностики.

В конце статьи см.
Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) - экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).
В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.
Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение

Проведение ПЦР

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

• ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
• два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
• термостабильная ДНК-полимераза;
• дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
• ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
• буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе - приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции.
Ход реакции

Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 - 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 - 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 - 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией - разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 - 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.
Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 - 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии - 0,5 - 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это - стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 - 15 мин.
Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию

Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой - позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота - биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках - долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.

РНК– рибонуклеиновая кислота - биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев - нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.

Нуклеоти́ды - основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию - адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) - гуанин, цитозиновый (C) - цитозин, тиминовый (Т) - тимин, урациловый (U) - урацил. В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов - A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа - A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК - рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.

Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.

Литература

1. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. - М.: Мир, 2002. - 589 с., илл. ISBN 5-03-003328-9
2. Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия - Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004. - 496 с.; илл. ISBN 5-94087-098-8
3. Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы - М.: Наука, 2005 - В 2 т. - ISBN 5-02-033278-X

ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Артикул 00516

Блок анализов для диагностики половых (урогенитальных, скрытых) инфекций методом ПЦР

В этот блок анализов входят:

• Gardnerella vaginalis (гарднереллы) (определение в материале методом ПЦР)
• Candida albicans (кандида) (определение в материале методом ПЦР)
• HPV, ВПЧ (Human Papillomavirus, папилломавирус человека), типы: низкого онкогенного риска (6,11) с указанием типа; высокого онкогенного риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52) без указания типа (определение в материале методом ПЦР) (определение в материале мет
• Mycoplasma hominis (микоплазма человека) (определение в материале методом ПЦР)
• Mycoplasma genitalium (микоплазма генитальная) (определение в материале методом ПЦР)
• Neisseria gonorrhoeae (гонококки) (определение в материале методом ПЦР)
• Trichomonas vaginalis (трихомонады) (определение в материале методом ПЦР)

Для чего это нужно

Оптимальный блок для диагностики инфекций, передающихся половым путем (ЗППП, ИППП), а также воспалительных заболеваний мочеполовой системы у мужчин и женщин.

Влагалище не является стерильной средой. Во влагалище, так же, как и в кишечнике и на коже - множество различных микроорганизмов…

Этот блок для Вас, если:

• не обследовались никогда или обследовались более года назад;
• имели незащищенные половые контакты после последнего обследования;
• планируете беременность (сдают оба супруга);
• появились какие-либо жалобы, например, неприятные ощущения, зуд, жжение, выделения, запах из влагалища, ощущение раздражения.

Обратите внимание, многие инфекции протекают бессимптомно (так называемые скрытые инфекции), поэтому сдавать анализы ПЦР следует не только при наличии жалоб.

В блок входят следующие показатели:

• Chlamydia trachomatis (хламидия) (возбудитель хламидиоза)
• Mycoplasma hominis (микоплазма человека)
• Mycoplasma genitalium (микоплазма генитальная) (возбудитель микоплазменной инфекции)
• Ureaplasma parvum (уреаплазма парвум)
• Ureaplasma urealyticum (уреаплазма уреалитикум, прежнее название Биовар «Т-960»)
• Neisseria gonorrhoeae (гонококк, возбудитель гонореи)
• HPV (Human Papillomavirus, папилломавирус человека), типы высокого онкогенного риска: 16,18 с указанием типа, 16, 18,31,33,35,39,45,52,67,58,59 без указания типа
• HPV (Human Papillomavirus, папилломавирус человека), типы низкого онкогенного риска: 6,11 с указанием типа
• HPV (Human Papillomavirus, папилломавирус человека), типы высокого и низкого онкогенного риска: 16,18 с указанием типа, 16,18,31,33,35,39,45,52,67,58,59 без указания типа, 6,11 с указанием типа
• Trichomonas vaginalis (трихомонада, возбудитель трихомониаза)
• Gardnerella vaginalis (гарднереллы)
• Candida albicans (Кандида) (возбудитель кандидоза)

Основные симптомы этих инфекций, в том числе, симптомы венерических заболеваний

Метод исследования : ПЦР.

ПЦР - полимеразная цепная реакция (PCR) - метод диагностики, который позволяет обнаружить в клиническом материале ничтожно малые количества определенного генетического материала, размножить и идентифицировать его.

Биологический материал для анализа ПЦР выбирается в зависимости от локализации возбудителя. Однако для получения достоверного результата анализа рекомендуемым типом биологического материала для обнаружения инфекций урогенитального тракта является мазок из отделяемого влагалища и цервикального канала у женщин и уретры у мужчин.

Виды биологического материала для ПЦР-диагностики

• Моча для выделения инфекций
• Соскобы и мазки (цервикальные, вагинальные, уретральные) на инфекции
• Сперма, секрет простаты
• Кровь и её компоненты (сыворотка, плазма, лейкоциты и т.д.)
• Фекалии
• Слюна, мокрота и смывы
• Грудное молоко и выделения молочных желез
• И др.

Значение анализов

Результат по каждому возбудителю : отрицательно/положительно

Условия сдачи анализа

Анализ можно сдать в любой клинике ЦИР в дни и часы работы.

Также спрашивают:

• Бактериологическое исследование отделяемого из цервикального канала с определением чувствительности к антибиотикам, без чувствительности к антимикотикам

Как сдать анализы в Лабораториях ЦИР?

Для экономии времени оформите заказ на анализ в Интернет-магазине ! Оплачивая заказ онлайн, Вы получаете скидку 10% на весь оформленный заказ!

Материалы по теме

Chlamydia и Chlamydophila

Современная классификация семейства Chlamydiaceae (хламидии, хламидофилы)

ПЦР – полимеразная цепная реакция (PCR, Polymerase Chain Reaction)

ПЦР - это метод ДНК-диагностики, который позволяетвыделить в клиническом материале ничтожно малые количества определенного генетического материала, размножить и идентифицировать его.

Хламидиоз

Хламидиоз - бактериальное заболевание, возбудителем которого является Chlamydia trachomatis .

Микрофлора влагалища

Влагалище не является стерильной средой. Во влагалище, так же, как и в кишечнике и на коже - множество различных микроорганизмов. Основой микрофлоры являются молочно-кислые бактерии.

Различные программы диспансеризации

Какие обследования входят в ежегодную диспансеризацию? Почему важно проходить полное обследование?

Иммуноблот

Блоттинг (от английского blot - пятно) - методики выявления белков, которые обеспечиваются нанесением на какой-либо носитель разделенных молекул (например, антигенов).

ПЦР-диагностика инфекций в сперме (эякуляте)

ПЦР-анализ на сегодняшний день является одним из высокотехнологичных, доступных и эффективных методов молекулярной диагностики, применяемый в разных областях медицины. Чаще всего он используется для лабораторной диагностики инфекционных заболеваний человека, в том числе инфекций, передаваемых половым путём (ИППП), и выявления возбудителей урогенитальных инфекций, которые могут вызывать различные воспалительные заболевания органов мочеполовой системы у мужчин и женщин.

В современной медицине большее значение уделяется высокоточной лабораторной методике исследования, основанной на Полимеразной Цепной Реакции. Благодаря применению ПЦР – технологий появилась возможность провести анализ на молекулярно-генетическом уровне и выявить у пациента острые и хронические формы наследственных и инфекционных заболеваний задолго до появления клинических симптомов.

Что такое ПЦР – диагностика

Этот метод был разработан американским биохимиком и лауреатом Нобелевской премии Кэрри Мюллисом в 1984 году.

Многие квалифицированные специалисты сталкиваются с ПЦР-исследованием каждый день и не представляют без его результатов точного диагностирования большинства активных форм патологий в тех случаях, когда не срабатывают иммунологические и микробиологические методики. Очень часто бывает так, что разные вирусы могут вызвать одни и те же клинические симптомы, ПЦР-анализ позволит определить возбудитель при самой малой его концентрации в биоматериале и выявить даже единичные клетки вирусов или бацилл.

О ПЦР-диагностики на видео

Основу ПЦР-диагностики представляет проведение в специальных лабораторных условиях многократной амплификации (умножения) определенных участков ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) — генетического материала человека.

Весь технологический процесс копирования состоит из несколько этапов:

1. Денатурации – подготовке образца, посредством повышения температуры биоматериала (до 95 °C) происходит расщепление 2-х цепочной ДНК на две отдельные нити.
2. Отжига — исследуемый биоматериал остужают и добавляют к нему азотистые праймеры (реагенты), имеющие способность специфично распознавать последовательности в молекуле ДНК, характерные только для болезнетворного агента, и соединяться с ними.
3. Элонгации – самой полимеразной реакции, происходит достраивание уникального молекулярно-генетического участка, в каждом из соединений с праймером образуется новая, структурно дополняющая дочернюю, цепь ДНК.

Весь цикл повторяется 20 – 30 раз. В конечном итоге образуется то количество комплементарных нитей ДНК, которое достаточно для визуального анализа и сравнения результатов с имеющимися данными о клеточном строении различных возбудителей. Определяют вирус, природу его появления, устанавливают силу его воздействия на организм и количество имеющихся бацилл. Эта информация представляет большую ценность для лечащего врача при назначении эффективных методов терапии и подборе лекарственных препаратов.

Методики ПЦР – диагностики отличаются от других лабораторных методов следующим:

• прямым определением наличия возбудителей;
• высокой чувствительностью, специфичностью и универсальностью процедуры выявления вирусов;
• быстротой выполнения анализа;
• возможностью диагностирования бессимптомных патологий.

Результаты исследования можно фотографировать или вносить в информационные носители для возможности их оценивания независимыми экспертами.

Как правильно подготовиться к сдаче анализа ПЦР?

Для исследования используют различные биоматериалы:

• кровь;
• слизь;
• слюну;
• мочу;
• мокроту;
• соскобы эпителия;
• сок простаты;
• соскобы слизистых оболочек;
• околоплодные воды;
• ткань плаценты;
• спинномозговую, суставную или плевральную жидкости;
• выделения половых органов.

Современное лабораторное оборудование и профессионализм врача-лаборанта гарантирует пациенту, которому проводят ПЦР-анализ получение достоверного результата. Но точность исследования зависит и от правильной подготовки к тесту, и от соблюдения всех рекомендаций по отбору биоматериала.

Правильно подготовиться к анализу не сложно, важно выполнить все существующие правила:

1. За сутки до исследования не вступать в половые контакты.
2. Отменить занятия в спортзале.
3. Не посещать перед обследованием баню или сауну.
4. Ужинать накануне следует не позднее 20 часов, не увлекаться острой и жирной пищей, не принимать спиртное.
5. Венозную кровь нужно сдавать в утренние часы, перед процедурой не есть, не пить и не курить.

Как сдают анализы ПЦР женщины и мужчины – особенности процедуры

Главным общим требованием к отбору биоматериала – получение в образец максимальной концентрации микроорганизмов и отсутствие нежелательных примесей – слизи, крови или гноя.

При обследованиях на инфекции, которые передаются при половых контактах (уреаплазмоз, гарднереллез, хламидиоз, микоплазмоз, трихомониаз) забирают выделения из половых органов:

• у мужчин производится взятие мазка или соскоба из мочевыводящего канала (уретры);
• у женщин – мазка или соскоба из влагалища, цервикального канала.

При взятии материала из урогенитальных путей важно избежать попадания примесей. С этой целью у мужчин соскоб берут не ранее 2-х часов после последнего мочеиспускания, у женщин — с учетом дней цикла месячных. Избыток слизи или гноя удаляется стерильными ватными тампонами, биоматериал отбирают при помощи специальных пластиковых зондов – при этом снижается вероятность попадания крови в образец.

Процедура взятия урогенитального соскоба довольно болезненна для мужчин , именно поэтому для анализа часто используется первая порция мочи после ночной задержки, которая содержит наибольшее количество эпителия. Мочу собирают в стерильный контейнер с плотно прилегающей крышкой и доставляют в лабораторию не позднее, чем спустя два часа после отбора. В лаборатории для последующей работы получают клеточный осадок мочи путем центрифугирования.

Какие инфекции входят в комплекс ПЦР-12?

ПЦР-диагностику активно используют опытные специалисты. Наиболее востребованной считается диагностика вирусов и инфекций.

Какие 12 инфекций можно выявить с помощью ПЦР-диагностики	Что выявляется
ВИЧ-инфекция	Вирус иммунодефицита человека, тип 1/2
Гепатиты А, В, С, G	Вирусы гепатитов HAV, HBV, HCV, HGV
Мононуклеоз	Вирус Эпштейна — Барра
Цитомегаловирусная инфекция	Возбудитель — Cytomegalovirus
Герпетическая инфекция	Вирус простого герпеса, тип 1/2
ИППП – инфекции, которые передаются половым путем	Патогенные микробы — уреаплазма, гарднеллера, хламидия, микоплазма, трихомонада
Туберкулез	Микобактерия туберкулеза
Онкогенные вирусы	Вирус папилломы человека — Human papillomavirus и его онкогенные виды (14 типов)
Боррелиоз	Возбудитель клещевого энцефалита
Листериоз	Возбудитель — Listeria monocytogenes
Кандидоз	Грибы семейства Candida
Хеликобактерная инфекция	Возбудитель — Helicobacter pylori

В настоящее время методики Полимеразной цепной реакции расширяют возможности проведения исследований — введение геннотипирования и сращивания фрагментов ДНК тканей получили широкое распространение в различных областях современной медицины:

• гинекологии;
• урологии;
• пульмонологии;
• гастроэнтерологии;
• гематологии;
• онкологии.

Где можно недорого сдать анализы в УРФО?

Современные методы ПЦР-диагностики постоянно развиваются. Совершенствуется сама методика, происходит появление новых разновидностей ПЦР и новых тест – систем, используемых для цепной реакции. Благодаря этим нововведениям, стоимость этих анализов становится более доступной для пациентов.