ИФА – достоверный метод диагностики ВИЧ. Как и где сдать ИФА. ИФА-диагностика: в чем суть, определение антител, как проводят и при каких болезнях эффективна? Самый волнительный из иммуноферментных анализов – ИФА на ВИЧ

ВИЧ – бич нашего поколения. Какие существуют методы для диагностики ВИЧ, углубленная информация о ИФА-тесте на ВИЧ. Как сдавать, как трактовать результаты анализа.

Вирус иммунодефицита человека – одна из самых страшных инфекций для нашего поколения.

ВИЧ деструктивно влияет на нашу иммунную систему, и если вовремя не остановить прогресс заболевания, он может трансформироваться в синдром приобретенного иммунодефицита . ВИЧ распространяется через непосредственный контакт партнеров при сексуальном акте через мужские и женские половые органы. Еще одной причиной заражения может стать попадание вируса через кровь. Это происходит вследствие использования нестерильных инструментов, переливанием зараженной крови и даже через поколения: ребенку от инфицированной матери при кормление грудью.

До сих пор ученые по всему миру ломают голову над созданием лекарства нового поколения, способного излечить от СПИДа, однако, несмотря на большие темпы научного прогресса, вирус иммунодефицита человека продолжает распространяться по планете.

ИФА – метод диагностики ВИЧ

Учеными поколения 20-го века разработано несколько методов диагностики ВИЧ, важнейшим из которых считают иммуноферментный анализ. ИФА на ВИЧ стали проводить относительно недавно – в начале девяностых годов. С течением времени метод оттачивался, приобретал новые детали. Теперь достоверность метода ИФА одна из самых высоких – около 98%. Соответственно, такой метод проводится все чаще.

ИФА – первый анализ, с которым сталкивается пациент при обследовании на ВИЧ. Метод ИФА определяет наличие в крови антител. Если тест находит присутствие антител в крови, значит, и вирус присутствует. Однако, информацию по этому тесту необходимо подкреплять и другими анализами, такими как иммунный блоттинг (ИБ) и метод последнего поколения – полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Антитела – специальные белковые соединения, которые продуцируют плазматические клетки после как реакцию на попадание в организм инфекции (антитела начинают образовываться через 1-2 месяца с момента заражения).

Причины возникновения ВИЧ

Врач выпишет вам направление на анализ, если вы контактировали с человеком, зараженным ВИЧ либо существует опасность инфицирования. К группе опасности заражения ВИЧ относят поколения людей:

• проходящих в течение месяца курс инъекционного лечения;
• имеющих сексуальные отношения без специальных средств предохранения;
• переносчиков инфекций, передающихся во время сексуального контакта;
• пациентам после прохождения процедуры переливания крови либо укола обнаружения причины свертывания крови в восьмидесятые годы.

Если у вас есть сомнения относительно вашего ВИЧ-статуса и опасения, связанные с возможностью заражения, рекомендуется незамедлительно обратиться за помощью в любое медицинское учреждение нашей страны для проведения комплексного обследования на ВИЧ. Результат на анализы получают в течение месяца. Людям в группе риска по ВИЧ рекомендуется проходить обследование через каждые 4 месяца.

Как сдать анализ

Какой-то особенной подготовки к сдаче анализа крови на ВИЧ не требуется, однако лучше придерживаться простейших правил:

• лучше не кушать с вечера, а сдавать анализ натощак утром;
• не советуют загружать организм физической работой;
• употреблять здоровую пищу, воздержаться на некоторое время от сигарет и алкоголя;
• для исключения ложных показателей теста не стоит сдавать анализ после лечения серьезных заболеваний.

Инфекция, вызванная вирусом иммунодефицита человека, – серьезный диагноз. Ошибки при диагностике могут привести к плачевным последствиям. Анализ ИФА на ВИЧ – наиболее доступный метод исследования, но не во всех случаях он информативен.

ИФА – иммуноферментный анализ. Задача метода ИФА – выявление антител к вирусу иммунодефицита в биологическом материале. С помощью метода можно отследить присутствие в жидкости не самих вирусов, но только антител, вырабатывающихся в ответ на их присутствие. Иммуноферментный анализ широко используется при диагностике ЗППП. Он помогает выявить , передающиеся половым путем.

Существует несколько видов ИФА: прямой вариант, косвенный вариант, метод «сэндвича». В любом случае методика основана на определении наличия антител, которые служат индикатором проникновения чужеродного агента. Чтобы выявить эти «метки», биологический компонент обрабатывают ферментами.

Иммуноферментный анализ определяет антитела с точностью 96 – 98%, погрешность незначительна. Она составляет 2 – 4%.

ИФА – метод диагностики ВИЧ

ИФА анализ на ВИЧ – это первый этап диагностики. Антигенами вируса иммунодефицита являются протеины p24, p15, p17, p31 и гликопротеины gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.

Чтобы обнаружить вирусный белок, берут порцию крови из вены. Образец, направленный на исследование крови ИФА, обрабатывают иммуноферментными реагентами. Из крови выделяют сыворотку. Если в ходе исследования обнаруживаются , значит, в крови уже присутствует вирус.

Кровь сдают строго натощак. За 2 дня до анализа не рекомендуется есть жирную пищу и употреблять алкоголь. Следует за 14 дней прекратить прием противовирусных препаратов.

Преимущества метода:

• сравнительно небольшая стоимость;
• высокая стабильность реагентов;
• высокая чувствительность;
• короткий срок проведения;
• минимальное влияние человеческого фактора.

Современные тест-системы для ИФА производят по мировым стандартам. Это повышает точность метода.

Иммуноферментный анализ не всегда дает достоверные результаты. После попадания вируса в кровь начинается латентная (скрытая) стадия развития. Период, пока вирусы не начали размножаться, и антитела еще не сформированы, называется «время серонегативного окна». Делать ИФА на этом этапе бессмысленно. Если заражение произошло, результат будет . Как быстро вирус себя обнаружит, зависит от того, какое количество опасных клеток попало в организм. При незащищенном половом акте или переливании зараженной крови этот срок будет минимальным.

Для высокой достоверности ИФА на ВИЧ исследование проводят трижды. Сроки сдачи ИФА на вирус иммунодефицита человека:

• через 6 недель после вероятного контакта,
• через 3 месяца,
• спустя полгода.

ИФА 4 поколения на ВИЧ – метод, наиболее информативный на ранних сроках заражения. Его можно проводить уже через 1 месяц после предполагаемого инфицирования. Тест на является дорогостоящим по сравнению с аналогом 3-го поколения. Поэтому в государственных медучреждениях он используется как дополнительный метод диагностики. Бесплатно проводится тест 3. Если по его итогам однозначного ответа дать нельзя, пациента направляют на ИФА 4 поколения.

Важно! Сразу после инфицирования человек становится заразным. Он опасен для окружающих, даже когда еще не знает о своем диагнозе!

Если при ИФА выявлены антитела к антигенам ВИЧ, необходимо проводить дополнительные исследования. К таким относится . Достоверность этого метода – 80%. С помощью ПЦР исследуют кровь, сперму и влагалищные выделения. Биологическую жидкость расщепляют в медицинском реакторе, затем подвергают обработке ферментами. В итоге получают данные о том, какова концентрация клеток ВИЧ в жидкой среде. Из-за большой погрешности (20%) при положительном результате дополнительно проводят иммунный блоттинг.

Следующий этап диагностики – тест Комбо (или иммунный блоттинг). Это высокочувствительное исследование (98% достоверности), которое проводят, если через 6 месяцев результаты ИФА неоднозначны.

Расшифровка результатов ИФА

Время расшифровки составляет от 24 до 48 часов. Если необходимо получить информацию срочно (требуется хирургическое вмешательство), расшифровку проводят за 2 часа. В провинциальных медицинских пунктах не всегда есть необходимые реагенты. Пробу берут по месту обращения, затем ее передают в областной центр. При таких обстоятельствах итог можно узнать через 1- 2 недели.

Результат иммуноферментного анализа может быть либо положительным, либо отрицательным; других вариантов нет.

Даже если при первичном и повторных ИФА итог был положительным, пациента нельзя признать ВИЧ-инфицированным. Возможна погрешность. Причины ложноположительного результата:

• хронические заболевания;
• длительные инфекционные заболевания;
• беременность.

Поэтому результат анализа должен быть уточнен дополнительными исследованиями.

Если при проведении иммуноблоттинга на ВИЧ (реактивный), человек считается ВИЧ-инфицированным, а значит, что он здоров.

Клетки вируса со временем адаптируются к назначенным препаратам. Чтобы контролировать , тест ИФА периодически повторяют.

Иногда иммуноблоттинг показывает ложноотрицательный результат. Крайне редко вирус иммунодефицита 6 месяцев (и более) . Это возможно, если в кровь попало незначительное количество клеток вируса. В 0,5% от общего числа случаев диагностировать заражение удается лишь через год. В 99,5% в течение полугода после инфицирования при проведении ИФА получится достоверный результат.

Даже при проведении высокоточных исследований остается вероятность ошибки, составляющая 2%. Не следует забывать о человеческом факторе. Чтобы исключить вероятность ошибки, тест можно провести в 2-х разных учреждениях.

С.Н. ИГОЛКИНА, В.Ф. ПУЗЫРЕВ, Л.Г. ЗИНИНА, Н.М. ДЕНИСОВА, А.Н. БУРКОВ,

А.П. ОБРЯДИНА, Т.И. УЛАНОВА
ООО «Научно-производственное объединение «Диагностические системы»,

Нижний Новгород
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ «ДС-ИФА-HBeAg» и «ДС-ИФА-анти-HBe» ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ И ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИСХОДОВ ОСТРОГО И ХРОНИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА В
Гепатит В – вирусное инфекционное заболевание, характеризующееся тяжелым

воспалительным поражением печени . Около 1% летальных исходов наблюдается в

острый период болезни, в 4-10 % случаев происходит трансформация в хронический

процесс с возможным формированием в последующем цирроза печени и первичной

гепатокарциномы .

Несмотря на тенденцию к снижению заболеваемости острым гепатитом В, продолжает формироваться опасная в эпидемиологическом плане группа больных, которым впервые поставлен диагноз «хронический вирусный гепатит», а также группа носителей возбудителя заболевания. Сохраняется неблагополучный прогноз, связанный с высокой заболеваемостью гепатитом В среди населения репродуктивного возраста, а также среди подростков .

Поэтому, сейчас особенно актуальны вопросы лечения, профилактики и диагностики гепатита В. В настоящее время для детекции маркеров этой инфекции широко применяются методы иммуноферментного анализа. К числу важнейших серологических маркеров ВГВ относятся е-антиген (HBeAg) и антитела к е-антигену (анти-HBe). HBeAg ассоциируется с высокой инфицированностью крови, свидетельствуя об активной репликации вируса гепатита В (HBV). Установлено, что высокие титры HBeAg соответствуют высокой ДНК-полимеразной активности и всегда сочетаются с обнаружением полных частиц Дейна . При попадании сыворотки, содержащей HBeAg, в кровь здорового человека опасность заражения на много порядков выше, чем после наступления сероконверсии.

При остром гепатите В HBeAg обнаруживается в крови на ранних этапах инфекционного процесса уже при первых клинических проявлениях болезни, отставая на неделю от появления HBsAg. Острый гепатит В (ОГВ) циклического течения характеризуется кратковременной циркуляцией HBeAg. Вскоре, на 2-3 неделе желтушного периода появляются анти-HBe, что позволяет прогнозировать благоприятный исход заболевания .

Анти-HBe циркулируют в крови на протяжении 2-5 лет, реже несколько месяцев.

Наступление сероконверсии HBeAg-антиHBe знаменует резкое снижение активности

инфекционного процесса . Обнаружение HBeAg в крови пациентов после 2-х месяцев заболевания обозначает хронизацию патологического процесса . В этом случае анти-HBe могут образовываться спустя много лет после появления антител к HBcAg или вовсе не выявляться.

Появление анти-HBe может иметь неблагоприятное прогностическое значение в

остром периоде ВГВ при тяжелых формах, что соответствует мутации в pre-core зоне с

образованием HBV «e-» штамма .

Целью данной работы была разработка высокочувствительных и специфичных

иммуноферментных тест-систем для выявления HBeAg и анти-HBe и оценка их основных характеристик.

Материалы и методы.

1. Иммуноферментная тест-система «ДС-ИФА-HВeAg». Действующим началом теста

являются поликлональные антитела козы к рекомбинантному HBeAg, производства НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород, сорбированные на твердую фазу, и конъюгат, представляющий собой поликлональные антитела козы к рекомбинантному HBeAg, меченные пероксидазой хрена, производства НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород. Схема проведения анализа представляет собой одностадийный «сэндвич».Общая продолжительность реакции 1,5 часа. Образец сыворотки анализируется неразведенным.

2. Иммуноферментная тест-система «ДС-ИФА-анти-HBe». Основу теста составляют

рекомбинантный HBeAg (AHBV 102), производства НПО «Диагностические системы»,

Нижний Новгород, сорбированный на твердой фазе и конъюгат анти-IgG с пероксидазой хрена, производства «Сорбент Сервис», Москва. Реакция проходит в две стадии. К иммобилизованному антигену добавляют исследуемую сыворотку в разведении 1/10 и, после инкубации и удаления не связавшихся компонентов, проводят выявление специфических иммунокомплексов с помощью мышиных моноклональных антител против IgG человека, меченных пероксидазой хрена.

3. Для оценки разработанных тест-систем было использовано 2178 образцов сывороток

крови. Из них 480 образцов сывороток здоровых доноров. 1680 образцов представляют

собой образцы сывороток крови, содержащие различные маркеры вируса гепатита В.

Восемнадцать образцов были получены в динамике от больных с клиническим диагнозом «острый вирусный гепатит В». Предварительно все образцы были проверены на наличие HBsAg, HBeAg, анти-HBe, анти-HBc с помощью тест-систем производства НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород: «ИФА-НВsAg/m», «ДС-ИФА-НВеAg», «ДС-ИФА-анти-HBe», «ИФА-анти-НВс».

4. Сравнительную оценку разработанных тест-систем осуществляли с помощью

коммерческого препарата «Monolisa HBe», производства BIO-RAD, Франция;

Результаты и обсуждение. В НПО «Диагностические системы» разработаны 2 новых диагностикума: «ДС-ИФА-HBeAg» и «ДС-ИФА-анти-HBe». Тест-система «ДС-ИФА-HBeAg» предназначена для выявления е-антигена вируса гепатита В в сыворотке (плазме) крови людей методом иммуноферментного анализа и может быть использована для специфической диагностики, определения активности инфекционного процесса, прогнозирования тяжести и исхода гепатита В.

Тест-система «ДС-ИФА-анти-HBe» предназначена для выявления антител класса IgG к е-антигену вируса гепатита В в сыворотке (плазме) крови человека и может быть

использована при прогнозе течения инфекционного процесса и контроле проводимой терапии при гепатите В.

Для изучения специфичности новых тестов была проведена оценка распределения

оптической плотности (ОП) образцов сывороток крови, содержащих и не содержащих

НВeАg или анти-НВе. Были использованы образцы сывороток крови здоровых доноров и образцы сывороток крови, отобранные по различным маркерам вируса гепатита В на

станциях переливания крови. Результаты исследования показали достоверное разделение двух популяций. Значения ОП образцов сывороток, не содержащих НВеАg, колебались в пределах от 0,011 до 0,111, а основной пик образцов сывороток, содержащих НВеАg находился в пределах от 2,186 до 3,186 (рисунок 1а).

Рис.1a. Распределение ОП образцов сывороток, содержащих и не содержащих HBeAg в тест-системе «ДС-ИФА- HBeAg »
Пик, соответствующий группе сывороток с низкой ОП (0,3-0,6), вероятно, составляют образцы сывороток, отобранные на ранних этапах инфекционного процесса.

Уже в инкубационном периоде у больных закономерно регистрируются в крови НВsAg и НВеАg, что подтверждает их потенциальную эпидемиологическую опасность.

Диапазон оптической плотности образцов сывороток, не содержащих анти-НВе

находился в пределах от 0,002 до 0,122, а основной пик ОП образцов сывороток, содержащих анти-НВе, находился в пределах от 2,431 до 3,231(рисунок 1б).

Рис. 1б. Распределение ОП образцов сывороток, содержащих и не содержащих анти-Н Be , в тест-системе «ДС-ИФА-анти- HBeAg »
Были изучены особенности распределения ОП анти-НВе положительных образцов

сывороток, содержащих (n =78) и не содержащих HВsAg (n =56).


Рис. 2а. HBe -положительных образцов сывороток, содержащих HBsAg в тест-системе «ДС-ИФА-анти- HBe ».

Рис.2б. Особенности распределения ОП анти- HBe -положительных образцов сывороток, не содержащих HBsAg в тест-системе «ДС-ИФА-анти- HBe ».
Оптические плотности 87% анти-HBe-позитивных образцов сывороток, не содержащих HВsAg, находились в пределах от 0,41до 0,81 (рисунок 2б). При этом лишь у 14% анти-HBe-положительных образцов сывороток, содержащих HВsAg, ОП была в этом диапазоне (рисунок 2а). Известно, что в фазу поздней реконвалесценции при отрицательной реактивности на НВsAg постепенно происходит снижение титров антител к НBеAg (рисунок 2б). Поэтому, возможно, преимущественная концентрация анти-НВе-положительных образцов соответствовала ОП меньше 0,8.

Полученные данные свидетельствуют о достоверности разделения положительных и

отрицательных образцов сывороток крови независимо от стадии заболевания. Изучение чувствительности и специфичности тест-систем «ДС-ИФА-HBeAg» и «ДС-ИФА-антиHBe» проводили в сравнении с тестом «Monolisa HBe» («BIORAD»,Франция) (таблица 1).

Таблица 1
Сравнительная характеристика чувствительности и специфичности

тест-систем ДС-ИФА-HВeAg и ДС-ИФА-антиHB

Показатель	Определение HВeAg		Определение антиHBe
	НПО «ДС», ДС-ИФА-HВeAg	«BIO-RAD», «Monolisa HВe»	НПО «ДС», ДС-ИФА-антиHBe	«BIO-RAD»,
Количество исследованных образцов	67	67	32	32
Выявлено положительных образцов	47	47	16	16
Выявлено отрицательных образцов	20	20	16	16

Данные, приведенные в таблице 1, показывают, 100%-ное совпадение результатов.

Известно, что дополнительное прогностическое значение имеет сочетанная индикация НВеАg и анти-НВе, особенно их количественная оценка. Быстрое нарастание титра анти-НВе характеризует активный гуморальный иммунный ответ и практически исключает угрозу хронизации . Нами проанализировано изменение содержания НВеАg/анти-НВе в образцах сывороток крови пациентов с клиническим диагнозом «острый вирусный гепатит В» (таблица 2).

Таблица 2
Динамика сероконверсии НВеАg/анти-НВе у больных ОГВ

Обследуемый больной	День отбора крови*	НВеАg	анти-НВе ОПобр./ОПкр.		Анти-HBc	Анти- HBc IgM
	1	1,4+	2,1+	+	+	+
	12	0,5-	1,0+	+	+	+
	21	0,3-	1,3+	+	+	+
	1	1,2+	1,2+	+	+	+
	5	0,4-	1,0+	+	+	+
	13	0,2-	2,5+	+	+	+
	1	1,2+	0,6-	+	+	+
	21	0,2-	4,6+	+	+	+
	30	0,2-	9,7+	+	+	+
	1	2,1+	0,5-	+	+	+
	8	0,6-	1,1+	+	+	+
	28	0,3-	2,8+	+	+	+
	1	0,7-	2,2+	+	+	+
	8	0,3-	2,2+	+	+	+
	15	0,3-	2,8+	+	+	+
	38	0,2-	3,0+	+	+	+
6	1	1,1+	4,4+	+	+	+
	14	0,5-	3,8+	+	+	+

* от поступления в стационар
Все образцы сывороток были исследованы на наличие серологических маркеров

ОГВ: НВsAg, анти-НВс, анти-НВс IgM. Период наблюдения варьировал от 13 до 38 дней. У больных №1, №2 и №6 анти-НВе обнаружены уже на фоне снижения титра НВеАg. У пациентов №3 и №4 анти-НВе появились после исчезновения из сыворотки крови НВеАg на 21 и 8 день соответственно. Анализ детекции НВеАg в сыворотке крови пациента №5 при поступлении в стационар показал отрицательный результат. При этом была зарегистрирована конверсия на анти-НВе уже в первый день обследования.

У всех обследуемых прослежена тенденция к увеличению титра антител к НВеАg в

сыворотке крови, что позволяет прогнозировать благоприятную динамику клинических

проявлений ОГВ и скорое выздоровление.

Проведенное изучение новых тест-системы показало их высокую диагностическую надежность. Результаты сравнения ДС-ИФА-HBeAg» и «ДС-ИФА-антиHBe» показали 100% совпадение с тестом «Monolisa HBe».

При исследовании образцов сывороток больных гепатитом В в динамике, тесты

подтвердили высокую чувствительность и специфичность.

Короткое время инкубации исследуемых образцов и конъюгата (1 ч) позволяет в минимальные сроки определить правильную тактику проведения лечебных мероприятий. Созданные тест-системы удобны в постановке, экономичны (требуется 50 мкл сыворотки для определения HBeAg и 10 мкл сыворотки для определения анти-HBe). Высокие качественные характеристики тестов позволяют успешно использовать их при прогнозе течения инфекционного процесса и контроле проводимой терапии при гепатите В.
ЛИТЕРАТУРА

1.Майер К.П. Гепатит и последствия гепатита / К.П. Майер.– М., ГЕОТАР, Медицина,1999.- C.720

2.Онищенко Г.Г. Распространение вирусных гепатитов как угроза национальной безопасности / Г.Г. Онищенко, Л.А. Дементьева // Журнал микробиологии. –2003.-№ 4.- С.93-99.

3.Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты / С.Н.Соринсон. - Санкт-Петербург, Теза, 1997.- 306 С.

4. Baumeister M. Hepatitis B Virus e Antigen Specific Epitopes and Limitations of Commercial Anti-HВe Immunoassays / M. Baumeister // Journal of Medical Virology.- 2000.-N 60.- Р.256-263.

5.Kane M. Global program for control of hepatitis B infection / M. Kane// Vaccine. – 1995.-N131(Suppl. 1).- Р.47-6. Shunichi Sat о . Hepatitis B Virus Strains with Mutations in the Core Promoter in Patients with Fulminant Hepatitis / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Annals of Internal Medicine. – 1995.- N122.- Р.241-248.

7. Ou J.- Н . Molecular biology of hepatitis B virus e antigen./ J.-Н.Ou // Journal of Gastroenterology and Hepatology. – 1997.- № 12 (Suppl.1)- Р. 178- 187.

8.Tiollais P. The hepatitis B virus. / P.Tiollais, C.Pourcel, A.Dejean // Nature. – 1985. – P.317, 489-495
Опубликовано: Ж. «Клиническая лабораторная диагностика» - 2005.-№6-С.-34-37

ИФА (иммуноферментный анализ, ELISA – англ.) вошел в жизнь практической медицины еще где-то в 60-х прошлого столетия. Первоначальной его задачей были гистологические исследования в научных целях, которые сводились к поиску и идентификации антигенной структуры клеток живого организма.

В основе метода ИФА лежит взаимодействие специфических (АТ) и родственных антигенов (АГ) с образованием комплекса «антиген – антитело» , который выявляют при помощи фермента. Этот факт натолкнул ученых на мысль, что метод может быть использован в диагностических целях для выявления специфических иммуноглобулинов различных классов, участвующих в иммунном ответе на ту или иную инфекцию. И это был прорыв в клинической лабораторной диагностике!

Активно использоваться метод начал только в начале 80-х и то, в основном, в специализированных учреждениях. Первыми иммуноферментными анализаторами были снабжены центры и станции переливания крови, инфекционные и венерологические стационары, поскольку рожденный на африканском континенте, появившийся на горизонте у нас и тут же примкнувший к «старым» инфекциям грозный СПИД, требовал незамедлительных мер диагностики и поиска лечебных препаратов, воздействующих на него.

Область применения метода ИФА

Возможности иммуноферментного анализа поистине обширны. Теперь и представить себе трудно, как можно обойтись без подобных исследований, применяемых буквально во всех отраслях медицины. Кажется, что может сделать ИФА в онкологии? Оказывается, может. И многое. Способность анализа находить маркеры, свойственные некоторым видам злокачественных новообразований, лежит в основе раннего выявления опухоли, когда другим способом она еще не определяется из-за своих небольших размеров.

Современная клиническая лабораторная диагностика (КДЛ), кроме онкомаркеров, располагает значительным арсеналом панелей для ИФА и использует их для диагностики различных патологических состояний (инфекционных процессов, гормональных нарушений) и мониторинга фармацевтических лечебных препаратов с целью выявления их влияния на организм больного и, кстати, не только человека. В настоящее время иммуноферментный анализ широко используется и в ветеринарной службе, ведь «братья наши меньшие» тоже подвержены многим заболеваниям, от которых, порой, очень сильно страдают.

Таким образом, ИФА, благодаря своей чувствительности и специфичности, по образцу крови, взятому из вены, может определить:

• Гормональный статус (гормоны щитовидной железы и надпочечников, половые гормоны);
• Присутствие вирусной и бактериальной инфекции (ВИЧ, В и С, хламидиоз, сифилис, и , и , а также многие другие болезни, вызванные патогенными микроорганизмами);
• Следы жизнедеятельности микроорганизмов, возбудивших инфекционный процесс, который благополучно закончился и перешел в стадию формирования иммунного ответа на этот возбудитель. Такие следы, то есть, антитела, во многих случаях остаются циркулировать в крови пожизненно, чем защищают человека от повторного заражения.

В чем суть ИФА?

Иммуноферментный метод, позволяет определить не только присутствие самого возбудителя (качественный анализ), но и его количественное содержание в сыворотке крови больного.

Вирусовая или бактериальная доза существенно влияет на течение инфекционного процесса и его исход, поэтому количественному анализу отведена не последняя роль в диагностике и лечении заболеваний в различных формах и стадиях.

Однако зная иммуноферментные исследования, как метод ИФА, мы даже не задумываемся, как же ему удается охватить такой широкий круг микроорганизмов, населяющих нашу планету, многие из которых несут прямую угрозу здоровью и жизни человека и животных. А дело в том, что ИФА имеет много вариантов (неконкурентный и конкурентный – прямой и непрямой), каждый из которых решает свою задачу и, таким образом, позволяет проводить целенаправленный поиск.

Для выявления иммуноглобулинов того или иного класса используется традиционная 96-луночная полистироловая панель (планшет), в лунках которой в твердой фазе сосредоточены сорбированные рекомбинантные белки. Попавшие в лунку с сывороткой крови антитела или антигены, находят «знакомый» объект и образуют с ним комплекс (АГ – АТ), который, закрепившись ферментным конъюгатом, при считывании результатов проявится изменением окраски лунки.

Иммуноферментный анализ проводится на тест-системах определенной специфичности, изготовленных в специальных лабораториях и укомплектованными всеми необходимыми реагирующими компонентами. Исследования можно проводить с помощью промывных аппаратов («вошеров») и считывающих спектрофотометров, где большей частью задействован ручной труд. На полных автоматах, освобождающих лаборанта от монотонного закапывания, промывания и прочих рутинных дел, конечно, работать быстрее и удобнее, но не все лаборатории могут позволить себе такую роскошь и продолжают работать по старинке – на полуавтоматах.

Интерпретация результатов ИФА находится в компетенции врача лабораторной диагностики, при этом обязательно берется в расчет и присущее практически всем иммунохимическим реакциям свойство давать ложноположительные или ложноотрицательные ответы.

Видео: современное проведение иммуноферментного анализа

Результаты ИФА на примере сифилиса

Иммуноферментный анализ подходит для выявления всех форм , а, кроме этого, применяется в проведении скрининговых исследований. Для проведения анализа используют венозную кровь пациента, взятую натощак. В работе используются планшеты с определенной специфичностью (АТ классов А, М, G) или суммарные антитела.

Учитывая то, что АТ при сифилисе продуцируются в конкретной последовательности, ИФА может легко ответить на вопрос, когда произошло заражение и в какой стадии находится процесс, а расшифровка полученных результатов может быть представлена в следующем виде:

• IgM указывают на продолжительность инфекционного процесса (могут появляться при обострении хронических воспалительных заболеваний);
• IgA констатируют, что заражение случилось более месяца назад;
• IgG свидетельствуют о том, что инфекция находится в самом разгаре или о проведенном недавно лечении, что легко выясняется при сборе анамнеза.

При проведении анализа на сифилис, лунки с отрицательным ответом (и отрицательный контроль) останутся бесцветными, в то время как положительный результат (как и положительный контроль) даст ярко-желтое окрашивание за счет изменения цвета хромогена, добавленного в ходе исследования. Однако интенсивность окраски не всегда совпадает с контролем, то есть, она может быть немного бледнее или слегка желтоватой. Это сомнительные результаты, которые, как правило, подлежат повторному исследованию с обязательным учетом количественных показателей, полученных на спектрофотометре, но в целом, окраска находится в прямо пропорциональной зависимости от количества иммунных комплексов (связанные между собой АГ и АТ).

Самый волнительный из иммуноферментных анализов – ИФА на ВИЧ

Анализ на , пожалуй, больше других интересен широкому кругу населения, ведь пока нельзя с уверенностью утверждать, что исчезли многие социальные проблемы (проституция, наркомания и др.). К сожалению, ВИЧ затрагивает не только эти слои человеческого общества, заразиться можно при различных обстоятельствах, не связанных с половой распущенностью или приемом наркотиков. Но коль возникла необходимость обследования на ВИЧ, то бояться не следует, что все вокруг узнают о посещении такой лаборатории. Сейчас ВИЧ-инфицированные люди защищены законом, а сомневающиеся могут обратиться в анонимные кабинеты, где можно решить проблему, не боясь огласки и осуждения.

Иммуноферментный метод, применяемый для диагностики ВИЧ инфекции, относится к первостепенным стандартным исследованиям, которые, однако, требуют особых условий, поскольку тема очень деликатная.

ИФА на ВИЧ имеет смысл проводить после полового контакта, переливания крови, других медицинских манипуляций , предполагающих заражение, и по окончании инкубационного периода («серонегативное окно»), но следует учитывать, что этот промежуток времени не является постоянным. Он может закончиться через 14-30 дней, а может продолжаться до полугода, поэтому средним значением принято считать интервал от 45 до 90 дней. На ВИЧ кровь сдают так же, как и на другие инфекции – из вены на голодный желудок. Результаты будут готовы в зависимости от накопления материала в лаборатории и ее загруженности (от 2 до 10 дней), хотя чаще всего лаборатории обеспечивают получение ответа в тот же день или на следующий.

Что можно ожидать от результатов на ВИЧ?

ИФА на ВИЧ-инфекцию определяет антитела к двум разновидностям вируса: ВИЧ-1 (более распространенный в России и других странах Европы и Азии) и ВИЧ-2 (встречающийся чаще на территории Западной Африки).

Задачей ИФА ВИЧ является поиск АТ класса G, которые выявляются на всех тест-системах, но в более позднем периоде, и АТ классов А и М, выявляемых на рекомбинантных тест-наборах нового поколения, позволяющих найти антитела на самых ранних стадиях (инкубационный период – «серонегативное окно»). От ИФА можно ожидать следующие варианты ответов:

Первичный положительный результат: кровь подлежит перепроверке на тест-системе такого же типа, но по возможности другой серии и другим человеком (лаборантом);

Повторный (+) предполагает новый забор крови у пациента с исследованием ее подобно первичному анализу;

Очередной положительный результат подлежит референтному анализу, при котором используются высокоспецифичные тест-наборы (2-3 шт.);

Положительный результат в обеих (или в трех) системах направляется на иммуноблотинг (тот же ИФА, но выполненный в индивидуальном порядке на тест наборах особо высокой специфичности).

Заключение о ВИЧ инфицировании выносится только на основании иммуноблотинга. Проводится беседа с инфицированным в условиях полной конфиденциальности. Разглашение медицинской тайны в России, как, впрочем, и в других странах, подлежит уголовному наказанию.

Анализы на хламидии и цитомегаловирус иммуноферментным методом также обрели особую популярность, ввиду того, что позволяют определить время заражения, стадию заболевания и эффективность лечебных мероприятий.

При внедрении тоже можно наблюдать появление антител различных классов в разных фазах патологического состояния, вызванного инфекционным агентом:

• IgM могут обнаружиться уже дней через семь после заражения;
• IgA говорят о том, что инфекция в организме живет уже более месяца;
• IgG подтверждают диагноз хламидиоза, помогает следить за лечением и определить его действенность. Следует заметить, что антитела класса G остаются и циркулируют в организме независимо от давности болезни, поэтому для правильной расшифровки анализа нужно принимать во внимание референтные значения (нормы), которые, кстати, для каждой КДЛ свои: с учетом марки тест-системы и специфичности реагентов, входящих в набор. Значения нормы вписываются в бланк рядом с результатом ИФА.

Что касается , то здесь несколько иначе: антитела класса М появляются приблизительно через месяц-полтора, то есть, положительным результат (IgM+) становится в фазе первичного инфицирования или при реактивации скрытой инфекции и остается таковым от 4 месяцев до полугода.

Наличие АТ класса G характерно для начала первичной острой инфекции или реинфекции. Анализ констатирует, что вирус имеет место, однако информации, в какой стадии находится инфекционный процесс – не дает. Между тем, определение нормы титра IgG тоже вызывает затруднения, так как она целиком зависит от иммунного статуса конкретного человека, который, впрочем, устанавливается выявлением иммуноглобулинов класса G. Учитывая такое поведение антител, при диагностике ЦМВИ возникает необходимость в оценке способностей антител класса G взаимодействовать с ЦМВ, чтобы потом «обезвредить» его (авидность АТ). На начальном этапе болезни IgG очень плохо связываются с антигенами вируса (низкая авидность) и лишь потом начинают проявлять активность, стало быть, можно говорить о повышении авидности антител.

О достоинствах иммуноферментного анализа можно говорить долго и много, ведь этот метод сумел решить многие диагностические задачи, используя лишь венозную кровь. Не нужно долгих ожиданий, волнений и проблем с забором материала для исследования. К тому же тест-системы для ИФА продолжают совершенствоваться и не за горами тот день, когда тест выдаст 100% достоверность результата.

Видео: учебный фильм МГМУ им. Сеченова об основах ИФА

Цена: по запросу

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Производитель: Диагностические системы

Страна: Россия

Ед. изм.: набор

Вид упаковки: картонная коробка

Артикул: L-1823

Описание

Тест-система иммуноферментная для выявления антител классов G, M и А к Treponema pallidum (T. pallidum) в сыворотке (плазме) крови и ликворе человека с целью диагностики сифилиса, полный набор реагентов на 96х2 определения, подходит для ручных методик и постановки на автоматических анализаторах. В основе метода лежит принцип "ловушки", заключающийся в том, что специфические антитрепонемные антитела всех классов, присутствующие в образце, связываются одновременно с рекомбинантными антигенами - аналогами иммунодоминантных белков T.pallidum, зафиксированными в лунках планшета, и с теми же антигенами, меченными пероксидазой хрена, при совместной инкубации образцов сыворотки (плазмы) крови или ликворе человека и конъюгата. Изменение цвета субстратно-хромогенной смеси, содержащей ТМБ, при внесении ее в лунки планшета указывает на наличие в исследуемых образцах специфических антител к бледной трепонеме

Функциональное назначение

Выявление антител к Treponema pallidum играет важную роль при диагностике сифилиса, поскольку T.pallidum не может быть выделена из культуры клеток, а пробы для прямого определения возбудителя зачастую недоступны при латентных и поздних стадиях заболевания. В серодиагностике сифилиса используются используются нетрепонемные (РМП, RPR, VDRL) и трепонемные (РПГА, РИФ, ИФА) тесты. Иммуноферментные тесты для определения суммарных антител используются для массового скрининга донорской крови и для постановки диагноза сифилиса как составляющая часть комплекса серологических реакций. После успешно проведенной терапии реактивность трепонемных тестов в большинстве случаев сохраняется

Технические характеристики

Состав набора:
1. Планшет полистироловый 96-луночный разборный - 2 шт.,
2. Конъюгат - прозрачная желтая жидкость,
3. Контроль положительный - прозрачная красная жидкость,
4. Контроль отрицательный - прозрачная зеленая жидкость,
5. Промывочный раствор, концентрат, рН от 6,9 до 7,6,
6. ТМБ - прозрачная бесцветная жидкость,
7. Раствор субстрата - прозрачная бесцветная жидкость, pH ~4,2.
8. Стоп-реагент (0,2М),
9. Инструкция по применению и паспорт качества.
Условия хранения: при температуре +2...8°C, замораживание недопустимо.
Срок годности - 15 месяцев с даты производства, указанной на этикетке набора.
Соответствие требованиям ТУ 9398-182-05941003-2010.
Зарегистрировано в Росздравнадзор.